腺病毒介导的VEGF-B基因促血管内皮细胞增殖作用的研究

为观察腺癌毒素介导的血管内皮细胞生长因子B（VEGF－B）基因体外转染对血管内皮细胞的促增殖作用，构建编码人VEGF－B基因的复制缺陷的重组腺病毒载体，体外转染鼠主动脉血管内皮细胞（RAECs），应用RT－PCR和Western blot检测外源VEGF－B的表达，应用四唑盐（MTT）观察转染后RAECs的增殖。结果发现，RAECs可有效地被重组腺病毒载体感染，并能成功转录和表达VEGF－B基因和蛋白，在转染后细胞培养上清中检测到VEGF－B蛋白的表达，对RAECs有显著促增殖作用。提示重组腺病毒载体介导的人VEGF－B基因有血管新生作用，可用于缺血性心脏病的治疗。     

中低温停循环经下腔静脉逆灌对猪肠系膜微循环的影响

目的观察中低温下半身停循环时经下腔静脉(IVC)逆行灌注方法对猪肠系膜微循环变化的影响。方法选择健康小型猪20只,随机分为A、B两组(n=10)。两组均在体外循环(ECC)下肛温降到28℃时停循环60 min,同时经右无名动脉行顺灌脑保护。A组单纯下半身停循环。B组停循环同时联合经IVC逆灌行腹腔脏器保护,灌注压力前20 min为20 mm Hg,中间20 min为25 mm Hg,后20 min为30 mm Hg。用BI-2000医学图像分析系统分别观察和记录上述二组动物在不同时相肠系膜微循环管径及血液流速变化。结果①两组在体外循环前、并行循环时,肠系膜微血管管径、血液流速对比均无统计学差异。②B组在给予逆灌后肠系膜微血管管径、血液流速均较A组显著增加(P<0.01)。③B组逆灌压力由20 mm Hg提高到25 mm Hg时,微动、静脉管径及血流速度均显著增加(P<0.01),但从25 mm Hg增加到30 mm Hg时,微动、静脉管径及血流速度无统计学差异(P>0.05)。结论中低温停循环时经IVC逆行灌注后肠系膜微循环明显改善,合理的逆灌压力为25 mm Hg。     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血心肌细胞纤维化及凋亡的实验研究

我们采用携带肝细胞生长因子(HGF)基因重组腺病毒(AdHGF)干预猪慢性缺血性心肌模型,研究HGF改善缺血性心脏病心脏功能的重要机制,探讨其抑制缺血心肌细胞纤维化及凋亡的作用. 一、材料与方法 1.材料:相同遗传背景的实验用贵州小型香猪18只,体质量(30±5)kg,雌雄不拘(第二军医大学动物实验中心提供).术前禁食、禁水24h以上.     

细胞性心肌成形术研究进展

许多基本的心血管疾病发展到晚期会演变为充血性心力衰竭 ,尽管治疗手段已有了明显进步 ,但充血性心力衰竭仍然是一个主要并且将继续为人类关注的健康问题。充血性心力衰竭可使具有完整舒缩功能的心肌细胞数量减少 ,心肌结构完整性遭到破坏。心脏移植治疗终末期心力衰竭是金标准 ,但供体的不足限制了其临床广泛应用 ,就需要其它新方法来替代以挽救丧失的心肌细胞。细胞性心肌成形术被证明是一种行之有效的替代治疗方法。细胞性心肌成形术就是将包括自体心肌细胞在内的不同类型的细胞移植到宿主心肌组织中加固其结构和改善其功能。最近研究发现胚胎干细胞和成体干细胞均可以向心肌细胞方向分化。自体骨骼肌成肌细胞、内皮祖细胞等其它类型细胞同样成功地在宿主受损心肌组织中存活并增殖分化 ,改善宿主心脏功能。这里对目前细胞性心肌成形术的移植细胞类型作一综述。     

酸性成纤维细胞生长因子促血管内皮细胞增殖作用的实验研究

目的　探讨不同浓度的aFGF对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞生长的影响。方法　通过组织块培养法获取主动脉内皮细胞。将浓度为 5ng/ml,10ng/ml,2 0ng/ml的aFGF分别加入内皮细胞的培养液中作为实验组(Ⅰ～Ⅲ组 ) ,不加aFGF的组作为对照组。分别在 2 4h、48h和 72h应用MTT法进行细胞计数。结果　从大鼠主动脉成功地获取了内皮细胞。 3天内 ,实验组和对照组的主动脉内皮细胞都有不同程度的增殖 :培养 2 4h ,实验各组与对照组比较P >0 .0 5 ,无统计学差异 ;48h和 72h时 ,Ⅱ、Ⅲ组与对照组以及与Ⅰ组两两比较 ,有非常显著的差异 (P <0 .0 0 1) ;各时间段内 ,Ⅰ组与对照组 ,Ⅲ组与Ⅱ组比较 ,细胞数改变未见差异 (P >0 .0 5 )。结论　一定浓度的aFGF有非常明显的促血管内皮细胞生长的作用 ,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大的帮助。     

基因重组人自管生长素衍生物Asp116His的原核表达

目的：在大肠杆菌骨表达基因重组人血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ（ｒｈＤ１１６Ｈ－ＡＮＧ）并恢复其天然活性。方法：采用Ｅｃｏｒ１和ＢａｍＨⅠ双酶切,重组构建ｐＢＶ２２０／Ｄ１１６Ｈ－ＡＮＧ表达载体,转化大肠杆菌ＴＧ１基因工程菌,温控表达,破菌提取包涵体,变性、溶解、纯化、复性、浓缩,以鸡胚绒毛尿囊膜法及ＲＮＡ降解试验测活。结果：成功表达ｒｈＤ１１６Ｈ－ＡＮＤ,表达量约３０％,经纯化、复性、测活,     

血管生长素对缺血心肌促血管生长作用的初步观察

目的：探索血管生长素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ,ＡＮＧ）对缺血性心肌的促血管生长作用,以评坐其应用于生物治疗的可行性。方法：以先期成功表达的基因重组人血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ。对民肌梗死模型兔的缺血心肌边缘部作直接心肌内注射。注射后５ｄ行冠状动脉血管造影,并取注射点心肌切片作常规病理理苏木精＝工染色,ＶＢ染色,Ⅷ因子相关抗原免疫组化标记。结果：用药心脏表面注射点周围心肌缺血情况较对照组明显闰     

MRI评价VEGF转染自体骨髓基质细胞移植治疗慢性心肌缺血的实验研究

目的应用MR多技术扫描评价转染血管内皮生长因子的自体骨髓基质细胞移植于慢性缺血动物模型猪后对心功能的保护和促血管新生作用。方法将慢性缺血心脏病模型猪随机分2组:注射转染血管内皮生长因子基因的自体骨髓基质细胞组(组Ⅰ,n=9)和注射空腺病毒载体的对照组(组Ⅱ,n=7)。治疗后4周应用MR多技术扫描检测各实验组射血分数、缺血坏死节段,取心脏标本测定梗塞区的百分比、荧光显微镜下标记细胞、血管数量。结果与组Ⅱ相比组I的射血分数明显提高,缺血坏死面积明显减少(P<0.05),且荧光显微镜下可见大量CM-D iI标记的移植存活细胞。组I缺血区血管计数高于组II并有显著性差异。结论携带血管内皮生长因子的自体骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病具有明显的优越性,移植细胞成活率高,心功能和局部血运改善明显。     

体外促进血管内皮细胞分化的实验观察:人血管生成素相关蛋白2全长编码基因的克隆

目的:克隆人血管生成素相关蛋白2(angiopoietin-relatedprotein2,ARP2)全长编码基因,使其以体外方式促进血管内皮细胞分化,拟构建PET32a载体。方法:采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)从人脾脏组织中扩增ARP2cDNA,构建PET32a载体,采用EcoRI,HindIII双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果:RT-PCR扩增长度为1492bp的基因片段。EcoRI,HindIII双酶切结果显示重组T载体中含有目的基因片段,测序结果显示编码区无基因突变。结论:顺利构建PET32a载体,人ARP2全长cDNA基因克隆成功。ARP2有非常明显的促进血管内皮细胞生长的作用,可能对缺血性心脏病的促血管形成治疗有较大帮助。     

基因重组人血管生长素衍生物Asp116His对缺血心肌再血管化的影响

在建立家兔心肌梗死模型的基础上,以基因重组人血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ于血心肌边缘部作心肌多点注射。术后８－１０天取注射点心肌切片作ＨＥ染色、ＶＢ染色及Ⅷ因子标记的免疫组化染色观察,术后１８－２０天,做非选择性冠脉造影。病理学检查,可见心肌间质内大量小血管结构,毛细血管明显增多,冠脉造影,示有侧支血管形成。本研究首次证实血管生长素衍生物Ａｓｐ１１６Ｈｉｓ在心肌作用局部可引起明显新生血管形成