革兰阴性杆菌9种氨基糖苷类修饰酶基因的检测

目的 调查革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因的流行状况。方法 建立检测AMEs基因的PCR法，检测临床分离的20株革兰阴性杆菌9种AMEs基因。结果 20株革兰阴性杆菌中6株检出AMEs基因(30％)，同一菌株可产生2种以上AMEs，且不同菌株产生的AMEs有很大差异。3株表型为氨基糖苷类药物敏感，但检出AMEs基因；8株表型为氨基糖苷类药物耐药，但9种AMEs基因检测为阴性。本研究肺炎克雷伯菌的aac(3)-Ⅱ、大肠埃希菌的Bile(6’)-Ⅰ、铜绿假单胞菌的aac(3)-Ⅱ和ant(2”)-Ⅰ基因已成功注册GenBank。结论 产生AMEs是细菌对氨基糖苷类抗生素耐药的机制之一。不同菌株产生的AMEs有很大差异。     

幽门螺杆菌诱导的AGS细胞培养上清中高迁移率族蛋白与白细胞介素-8的关系

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)定植在人类的胃上皮细胞表面,全世界Hp的感染率在50%以上[1].严重胃炎与感染的Hp菌株是否表达VacA和CagA蛋白密切相关[2-3].     

国产血浆游离DNA提取试剂盒的性能评价

目的: 对国产血浆游离DNA（cell free DNA,cfDNA）提取试剂盒进行评价。方法: 用志愿者血浆构成血浆池A,再分别加入固定量片段长度为102、268、402 bp和所有片段混合物的DNA,形成血浆池B1-B4。用Qiagen和国产柱式法cfDNA提取试剂盒分别提取血浆池A和血浆池B1-B4中的cfDNA。用TaqMan qPCR分析两种试剂盒提取血浆池A中cfDNA的提取效率,同时分析cfDNA浓度与血浆用量之间的关系,用琼脂糖凝胶电泳分析提取的cfDNA的片段完整性。核酸测定仪分析两种试剂盒对血浆池B1-B4中不同DNA片段的回收率。结果： Qiagen和国产试剂盒提取的血浆池A中cfDNA的Ct值分别为27.94±0.423和27.41±0.356,国产试剂盒提取效率明显高于Qiagen试剂盒（t=4.29,P<0.01）;琼脂糖凝胶电泳结果表明,两种方法提取的血浆池A中cfDNA在102、268和402 bp处均出现明显条带,而1 204 bp片段未出现。Qiagen和国产试剂盒提取的cfDNA浓度与血浆池A的血浆用量之间均存在明显的线性相关,r2分别为0.979（P<0.01）和0.963（P<0.01）。Qiagen和国产试剂盒提取的血浆池B1-B4血浆中102、268、402 bp及其混合物的回收率分别为64.81%±4.27%,80.40%±4.31%,88.40%±6.11%,83.50%±5.21%和73.50%±5.33%,85.20%±4.49%,89.30%±5.91%,85.64%±4.48%,两者在102和268 bp片段的回收率上差异显著（t=5.69,P<0.01;t=3.44,P<0.01）,而在402 bp及混合物的回收率上无明显差异（t=0.47,P＞0.05;t=1.39,P＞0.05）。 结论： 国产cfDNA提取试剂盒在各项评价性能上均可与Qiagen产品媲美。     

临床分离革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的调查临床分离革兰阴性杆菌氨基糖苷类修饰酶(aminoglycosides-modifying enzymes,AMEs)基因的流行状况. 方法采用PCR法检测41株临床分离的革兰阴性杆菌9种AMEs基因. 结果 41株革兰阴性杆菌25株检出AMEs基因(61.0%),其中aac(3)-Ⅱ基因检出率最高(46.3%), ≥2种AMEs基因的占76.0%;不同菌株产生的AMEs也有一定差异;4株表型为氨基糖苷类抗生素敏感但检出AMEs基因,8株表型为氨基糖苷类抗生素耐药但9种AMEs基因检测为阴性. 结论革兰阴性杆菌AMEs基因携带率较高,且多种AMEs基因共存现象严重.     

原发性肝癌患者血清ROS、NO、SOD水平分析

目的 对原发性肝癌患者血清ROS、T-SOD、MnSOD、NO测定,分析它们之间的相互关系及与正常人的关系。方法 采用经病理切片确诊的30例原发性肝癌患者血清,对照组30例,NO采用硝酸还原酶法,T—SOD及Mn-SOD采用黄嘌呤氧化酶法测定,活性氧(ROS)采用Fenton反应及Gtordd显色原理测定。结果 原发性肝癌患者ROS和NO水平明显高于正常组(P＜0．01),T—SOD和Mn-SOD水平明显低于正常组(P＜0．01);ROS水平与Mn-SOD水平负相关(r=-0．9745,P＜0．01),T—SOD水平与NO水平负相关(r=-0．9112,P＜0．01),ROS与NO水平正相关(t＝9．9,r＝0．9376,P＜0．01),而其他结果之间无相关性。结论 原发性肝癌ROS的水平与Mn-SOD水平负相关,提示线粒体内Mn-SOD清除自由基能力下降从而引起ROS升高,可能与原发性肝癌的发生有关;NO升高并与T—SOD负相关、与ROS正相关提示NO可能作为一种介质和自由基参与肿瘤发生,与ROS具有协同作用。     

超短波治疗对高原肺水肿患者肺部罗音的影响

目的:探讨超短波治疗对高原肺水肿肺部罗音影响。方法:将中度病情的高原肺水肿随机分为常规治疗组(对照组)和常规治疗加超短波治疗组(实验组),对照组使用吸氧(2L/min)、速尿、地塞米松、氨茶碱静脉注射治疗,实验组在如前常规治疗的基础上加用超短波治疗,观察两组患者肺部罗音消失时间。结果:实验组肺部罗音消失时间明显缩短,t检验,P<0.01,两组比较具有非常显著性差别。结论:超短波治疗高原肺水肿可缩短病程,具有较好疗效。     

两种术式治疗闭角型青光眼合并白内障的比较

目的比较青光眼白内障联合手术与单纯小梁切除术治疗青光眼合并白内障的临床疗效。方法选择2009年1月～2011年12月四川省南充市中心医院眼科收治的青光眼合并白内障患者128例（128眼）,分为A组（青白联合手术组,n=52）和B组（单纯小梁切除术组,n=76）。术后随访6个月,观察治愈率、眼压、术后视力、术后并发症等情况。结果术后6个月,A组患者治愈率为90．4％,B组患者治愈率为86．8％．两组治愈率比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。两组术后眼压分别较术前均有明显下降,差异均有高度统计学意义（均P〈0．01）,但两组间术后眼压差异无统计学意义（P〉0．05）。A组术后视力较术前有明显好转,差异有高度统计学意义（P〈0．01）;B组术后视力与术前比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组间术后视力比较,A组优于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组术后并发症发生率为[19．2％（10／52）1,与B组[14．5％（11／76）1比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于有白内障手术指征的青光眼患者,选择青白联合手术治疗青光眼合并白内障手术安全、临床效果显著,而且术后视力恢复快,提高了患者的生活质量。     

幽门螺杆菌提取液诱导胃上皮细胞蛋白质组变化

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与人胃腺癌上皮细胞(AGS)蛋白质组变化的关系。方法采用双向凝胶电泳分离Hp11638提取液与AGS细胞相互作用24 h后的细胞全蛋白样品,考马斯亮蓝染色,PD quest图像分析软件分析比较,识别差异蛋白,将差异蛋白进行胶内酶解,经基质辅助电离解析飞行时间质谱获得肽质量指纹图谱(PMF),通过搜索蛋白质数据库完成对差异蛋白质的鉴定。结果差异点切下酶解后经过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定,共鉴定出7个蛋白;其中经细菌裂解液刺激后蛋白表达上调的有4种,分别是烯醇化酶1变异体、Septin家族成员1 CRA_a亚型、热休克蛋白gp96前体和阿片生长因子受体1;3种蛋白表达下调,分别是线粒体翻译单元延长因子EF-Tu前体、3-alpha羟类固醇脱氢酶Ⅱb型、1型蛋白磷酸酶调节亚基3D。结论幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用的过程中,与肿瘤生物学行为相关的几种细胞蛋白表达上调;与调节细胞正常生长代谢相关的细胞蛋白表达下调。     

幽门螺杆菌VacA蛋白体外诱导胃上皮AGS细胞内HMGB1的表达

摘要：目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）感染的胃上皮AGS细胞内高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1, HMGB1)的表达。 方法：Hp11638（CagA⁺,VacA⁺）和Hp11638突变株（Hp11638M,CagA⁺,VacA^-）的提取液与AGS细胞共同温育后,收集细胞及培养上清液。裂解AGS细胞,western blot分析AGS细胞内HMGB1的表达,ELISA法检测培养上清液中HMGB1的水平。 结果:Hp11638提取液刺激AGS细胞后HMGB1表达量为(123.33±25.2) μg/mL,明显高于Hp11638M提取液刺激后的(46.67±7.23) μg/mL（q=8.49,P<0.01）。Hp11638和Hp11638M提取液刺激的AGS细胞培养上清液中HMGB1的水平分别为（115.59±16.62）和（48.32±6.30） ng/mL,差异有统计学意义（q=12.25,P<0.01）。 结论:在胃炎发生、发展过程中,VacA蛋白是刺激细胞中HMGB1高表达的主要因子。     

自体角膜缘移植治疗复发性翼状胬肉疗效分析

目的探讨自体角膜缘移植治疗翼状胬肉的疗效。方法分析116例（129眼）复发性翼状胬肉患者接受不同手术方式的手术效果。其中,一组71眼接受翼状胬肉切除联合自体角膜缘移植术联合术,二组58眼行常规胬肉切除结膜瓣转位术。术后随访20到24月,平均22．4月。以上皮愈合稳定、角膜恢复正常光滑透明、无翼状胬肉样组织生长为治愈,否则视为复发。结果一组3眼复发,复发率为4．22％。二组11眼复发,复发率为18．96％,其差异有统计学意义（χ^2=7．17）。两组上皮修复时间分别为3．68±0．81和5．12±0．75（P=0．00）。结论自体角膜缘上皮移植治疗翼状胬肉是防止其复发的好方法。