电泳技术结合计算机凝胶图像系统检测细胞凋亡

目的探讨检测细胞凋亡的新方法。方法利用常规电泳技术结合计算机凝胶图像分析系统对经地塞米松处理的巨噬细胞做细胞凋亡的定性定量检测。结果经地塞米松处理的巨噬细胞发生细胞凋亡,用1%琼脂糖凝胶电泳出现典型梯状条带,同时用流式细胞术检测出现凋亡峰,计算机凝胶图像光密度分析电泳结果,地塞米松处理0、0.5、1.0、2.04.0h巨噬细胞的凋亡率分别为0%、16.37%、30.72%、35.87%、56.60%,与流式细胞术的检测结果基本一致。结论琼脂糖凝胶电泳结合计算机凝胶图像分析系统是一种简便、低耗、准确的细胞凋亡定性定量检测新方法。     

人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定

目的从人腱细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２、４的功能性结构域－ＭＨ２结构域。 方法　原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总 ＲＮＡ,逆转录合成单链 ｃＤＮＡ;设计引物进行 ＰＣＲ,扩增 Ｓｍａｄ２、４基 因ＭＨ２结构域的基因片段,将其定向插入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α。挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定 分析。结果测序结果与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中克隆的基因序列完全一致。结论从人腱细胞中克隆成功 Ｓｍａｄ２、４基因的 ＭＨ２结 构域,证实了 Ｓｍａｄ２、４基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在 ＳＭＡＤ２、４信号转导途径,ＴＧＦ－β对人腱细胞 分化的调节可能是通过ＳＭＡＤ２、４信号转导途径实现的。