地塞米松诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中[Ca~(2 )]i的变化

目的　研究地塞米松诱导凋亡小鼠腹腔巨噬细胞 [Ca2 ]i的变化及其对凋亡的影响以及信使分子对凋亡和 [Ca2 ]i变化的影响。方法　激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记术。结果　 1 凋亡巨噬细胞内fluo 3荧光强度逐渐增强。胞内钙库受体抑制剂 ,尤其是Ca2 内流阻断剂抑制细胞内fluo 3荧光强度变化 ,同时使细胞凋亡率降低 ;2 .staurosporine和DcAMP显著降低巨噬细胞凋亡率并明显抑制fluo 3荧光强度改变。genistein和亚甲蓝稍降低巨噬细胞凋亡率 ,并降低fluo 3荧光强度升高幅度。结论　 1 胞外Ca2 内流和内源性Ca2 释放 ,主要是胞外Ca2 内流使[Ca2 ]i逐渐升高并促进巨噬细胞凋亡 ;2 .PKC促进 [Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cAMP抑制[Ca2 ]i升高和巨噬细胞凋亡。cGMP、TPK降低 [Ca2 ]i升高幅度并稍抑制巨噬细胞凋亡。结果提示 ,[Ca2 ]i是信使分子调控巨噬细胞凋亡的主要靶点。     

人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定

目的从人腱细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２、４的功能性结构域－ＭＨ２结构域。 方法　原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总 ＲＮＡ,逆转录合成单链 ｃＤＮＡ;设计引物进行 ＰＣＲ,扩增 Ｓｍａｄ２、４基 因ＭＨ２结构域的基因片段,将其定向插入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α。挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定 分析。结果测序结果与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中克隆的基因序列完全一致。结论从人腱细胞中克隆成功 Ｓｍａｄ２、４基因的 ＭＨ２结 构域,证实了 Ｓｍａｄ２、４基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在 ＳＭＡＤ２、４信号转导途径,ＴＧＦ－β对人腱细胞 分化的调节可能是通过ＳＭＡＤ２、４信号转导途径实现的。     

高效液相色谱-质谱联用技术分析刺五加抗疲劳化学成分

刺五加粗提物经植化方法处理后,采用液相质谱(LC/MS/MS)联用技术进行分析。得到了LC/MS/MS联用的分析条件,取得较好分离效果,确定了数种已知及未知的化合物的所在部位。在其中一个部位,即11号样品中,发现5个已知成分和相对分子质量分别为302、318、346、354、390、406的6个未知成分。     

ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的 探讨ＲＯＳ影响巨噬细胞凋亡的机制。方法 激光扫描共聚集显微术,流式细胞术和荧光标记技术等,结果（１）凋亡巨噬细胞内ＤＡＤＰＨ氧化酶活性急剧降低使得胞内ＲＯＳ水平快速上降;（２）ＲＯＳ清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（３）ＰＫＣ促进巨细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少;ｃＡＭＰ抑制巨噬细胞凋亡和ＲＯＳ急剧减少。结论 （１）ＲＯＳ抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡;（２）ＰＫＣ,ｃＡＭＰ等因素通过影响地     

一种检测巨噬细胞内NADPH氧化酶活性的新方法

目的建立一种检测活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的新方法。方法用超氧离子物荧光探针ＨＥ标记巨噬细胞后,在激光扫描共聚焦显微镜下,用最适发射波长为５３０ｍｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化。结果检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＨＥ的荧光强度变化,ＰＭＡ刺激后巨噬细胞内ＨＦ荧光强度增强,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性升高;地塞米松使巨噬细胞内ＨＥ荧光强度减弱,ＮＡＤＰＨ氧化酶活性降低：经地塞米松处理０．５ ｈ, ＰＭＡ刺激引起的巨噬细胞内 ＨＥ荧光强度增强幅度减小, ＮＡＤＰＨ氧化酶活性变化减小。结论激光扫描共聚焦显微术结合荧光标记技术可原位实时观察活细胞内ＮＡＤＰＨ氧化酶活性的变化。     

正常人表皮细胞在增殖与终末分化中DNA的变化

目的 探讨正常人表皮细胞在增殖与终末分化中ＤＮＡ的变化。方法 通过粘附式细胞仪用吖啶橙梁色１０例正常人皮肤发片,测表皮各层细胞ＤＮＡ综合荧光值、荧光浓度、面积。结果 正常表皮细胞ＤＮＡ综合荧光值、荧光密度、面积、棘层较其他各层均高（Ｐ〈０．０１）,其余各层差异无显著性（Ｐ〉０．０５）;角质下层仍存在ＤＮＡ荧光,角质上层ＤＮＡ荧光极淡。结论 正常人表皮细胞ＤＮＡ含量,浓度、分布范围以棘层最高,ＤＮＡ     

利用共焦镜检测凋亡早期巨噬细胞内pH的变化

用激光扫描共聚焦显微镜和ｐＨ荧光探针ＳＮＡＲＦ－１／ＡＭ实进检测地塞米松处理茂噬细胞胞浆－ＰＨ的动态变化。结果显示，加入地塞米松，巨噬细胞胞浆发生快速，短期碱化，随后胞浆ＰＨ缓慢降低。结果表明，胞浆酸化是细胞凋亡发展的必然过程，胞浆碱化则很可能与细胞凋亡的发生相关。     

荧光定量测量方法在共聚焦显微镜上的应用

根据共聚焦显微镜ACAS570测量原理，结合巨噬细胞研究，认定性和定量方面，叙述了通过荧光图像测量细胞胞内游离Ca2＋、胞浆pH、细胞膜电位、线粒体膜电位、细胞膜磷脂和受体流动性、细胞内蛋白的方法，给出了用于定量测量的荧光探针工作曲线的制定方法和不同实验中选择荧光探针所需注意的问题。     

13—8 谈谈对柏努利方程的认识

从稳恒理想流体的柏努利方程推导来看,是在流体中任取一小流管中的一小液段,对这小段流动的液体应用功能原理便可推导出柏努利方程。在公式推导过程中,所用的物理知识和数学知识都是中学内容,比较容易接受。但对公式中各项的物理意义有不同的理解,主要集中在对P这个物理量的争论上,其实质是对方程的理解存在分岐,那么究竟怎样理解柏努利方程呢? 对P的理解,一般书籍、讲义上都定义为单位体积的压强(或压力)能;但也有人提出这样定义是错误的,应叫压强功;还有的干脆就叫压强。各自都有道理。     

激光扫描共焦显微镜研究巨噬细胞在ConA刺激下的变化

用激光扫描共焦显微镜观察了培养的小鼠腹腔巨噬细胞在ＣｏｎＡ刺激下的变化，结果显示ＣｏｎＡ刺激前溶酶体主要分布在细胞核周围，刺激后溶酶体在细胞周边明显增多，细胞外液中荧光强度增加．上述结果表明巨噬细胞在ＣＯｎＡ的刺激下，除形成吞噬小泡外，在刺激物加入后一定时间后，有外排小泡生成。在ＣＯｎＡ加入后的５ｍｉｎ内，细胞内的溶酶体的ｐＨ从静息状态的ｐＨ４．６上升到ｐＨ５．７，５ｍｉｎ后基本维持不变。