新型纳米微球载碱性成纤维细胞生长因子促进新生血管形成的研究

目的 制备载碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)甲基丙烯酸缩水甘油酯修饰葡聚糖纳米凝胶微球,观察其对新生血管生成的诱导和促进作用.方法 采用改良乳液聚合法制备载bFGF纳米微球(bFGF-Dex-GMA-NPs),对纳米微球的外形、包封率、体外释药特征进行常规检测,建立兔后肢缺血模型后,分为以下几组(每组6只):安慰剂治疗组(注射磷酸盐缓冲液)(A组);bFGF治疗组(B组);载bFGF纳米微球组(C组),分别于治疗后7、21 d用99mTc标记的sestamibi对后肢血流进行分析,并于21 d将动物处死,取局部肌肉组织切片进行免疫组织化学染色,镜下对毛细血管计数.结果 合成的纳米微球外形圆整,无相互粘连,包封率高达80.9%,并能较好地控制bFGF的释放,持续释放时间超过25 d.后肢缺血模型治疗第7天,B组和C组能量计数分别为(130.95±14.59)、(127.60±11.36),明显高于A组(27.65±6.82)(P＜0.05),但B组和C组间差异无统计学意义(P＞0.05),第21天,C组能量计数增加到(450.69±21.06),明显高于A组(39.89±8.45)和B组(165.34±15.88)(P＜0.05).免疫组织化学染色结果显示C组毛细血管密度是(99.00±5.44)/mm2,明显高于其他两组2.00±0.59(A组)、13.00±1.35(B组)(P＜0.05).结论 载bFGF纳米微球可以控制bFGF长时间释放,对缺血组织新生血管形成有优于单纯bFGF的诱导和促进作用.     

RGD及EC防钙化处理后介入心脏瓣膜表面的生物学特性

目的 应用自主研发的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(RGD)涂层技术以及环氧氯丙烷(EC)防钙化处理技术于介入瓣膜材料表面改性,探讨其对介入瓣膜组织结构及表面生物学特性的改进.方法 将骨髓间质干细胞(MSCs)种植于不同防钙化处理的心脏瓣膜上,分别采用扫描电镜技术、TUNEL染色法、细胞计数法及荧光免疫组织化学法观察其形态学特点、凋亡率、细胞黏附性能及MSCs的细胞骨架蛋白Vinment的表达.结果 心脏瓣膜GA-EC、RGD-EC表面改性处理后,MSCs形态发生变化;MSCs凋亡率减少显著;MSCs细胞黏附性增高;MSCs的细胞骨架蛋白Vinment表达增高,与传统防钙化处理GA组相比较,RGD-EC组各项检测指标差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GA-EC、RGD-EC防钙化介入心脏瓣膜可有效地改善心脏瓣膜组织表面生物学特性.     

不同剂量的重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠心脏移植排斥反应的抑制作用

目的 观察不同剂量的重组人粒细胞集落细胞刺激因子(rh-G-CSF)对大鼠心脏移植排斥反应的抑制作用.方法 建立大鼠异位心脏移植模型,于术后当天起分别给予各组受体鼠rh-G-CSF每日0、125、250、500μg/kg体重,共6 d.术后第6天行供心组织学检查、混合淋巴反应实验(MLR)、细胞因子检测、外周血流式细胞仪检测,并观察各组供心存活时间.结果 250μg组与500μg组在体内、外均显示排斥反应减弱,并伴随外周血CIM+CD25+T细胞和MLR中自细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)的增加.125 μg组中以上各指标与对照组比较差异无统计学意SL(P>0.05).结论 rh-G-CSF的抗排斥作用与其剂量有关.rh-G-CSF增加外周血的CD4+Cff25+T细胞是其发挥抗排斥作用的重要机制,其中IL-10和TGF-β1是重要的效应细胞因子.     

环氧氯丙烷在组织工程心脏瓣膜构建中对基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨环氧氯丙烷对组织工程心脏瓣膜构建中基质金属蛋白酶－1（matrix metalloproteinase-1 MMP-1）表达的影响。方法采用去垢剂和胰蛋白酶消化制备的脱细胞猪主动脉瓣膜支架作为对照组,用加用3％环氧氯丙烷处理24小时的去细胞支架材料作为实验组。将培养的人骨髓基质干细胞（human bone maiTow derived stroma cells BMSCs）种植于脱细胞支架上构建组织工程心脏瓣膜（tissue engineering heart valve 1EHV）,分别行石蜡包埋切片、HE染色和扫描电镜观察TEHV的组织结构,并行逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定BMSCs分泌MMP-1的功能。结果BMSCs在实验组脱细胞瓣膜表面生长良好,MMP-1的表达比对照组降低。结论环氧氯丙烷处理的脱细胞猪主动脉瓣膜支架,可以抑制BMSCs的MMP-1表达。     

梗死心肌组织裂解液对鼠骨髓间充质干细胞诱导分化作用的体外研究

 目的 探讨梗死心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞（MSC）向心肌细胞分化的诱导作用。 方法 取 SD 大鼠梗死区心肌组织及其周围区域正常心肌组织分别制备梗死心肌组织裂解液和正常心肌组织裂解液；用 Balb/c 小鼠骨髓细胞进行 MSC 培养，取生长较好的第 2 代 MSC 制备 MSC 贴片，分别用 DMEM 培养基（空白对照组）、加入正常心肌组织裂解液的 DMEM 培养基（正常心肌组织裂解液组）和加入梗死心肌组织裂解液的 DMEM 培养基（梗死心肌组织裂解液组）培养。取各组培养 14 d 的 MSC，透射电镜下观察细胞超微结构；并进行免疫细胞化学染色，观察 α-肌动蛋白（actin）、心肌特异性转录因子 4（GATA-4）、心肌特异性肌球蛋白重链（MHC）、心肌特异性肌钙蛋白 T（cTnT）、心肌特异性肌钙蛋白 I（cTnI）、心肌增强因子 2（MEF-2）、连接蛋白（Cx）43 和 Cx45 的表达情况。 结果 超微结构观察显示空白对照组细胞器结构正常；正常心肌组织裂解液组细胞内未见明显的肌丝样结构；而梗死心肌组织裂解液组部分细胞内可见细小的肌丝样结构。免疫细胞化学染色分析显示，空白对照组 MSC 不表达心肌细胞特异性蛋白；正常心肌组织裂解液组 MSC 仅表达 α-actin；而梗死心肌组织裂解液组 MSC 表达 α-actin、GATA-4、MHC、cTnT、cTnI 和 MEF-2 等心肌特异性标志蛋白，但不表达 Cx43 和 Cx45。 结论 梗死心肌组织裂解液可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。     

环氧氯丙烷改性戊二醛处理对猪主动脉根部构型的影响

但仅R和N之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 EC改性GA处理对瓣膜主动脉壁尺寸的改变不明显,但对瓣叶尺寸的改变差异有统计学意义.     

低氧对小鼠骨髓间质干细胞增殖及黏附的影响

目的 观察低氧环境对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、黏附及分泌的影响.方法 采用细胞增殖实验、细胞黏附实验及Western blot分别观察小鼠MSCs在低氧(6%O2)和常氧(21%O2)的增殖、黏附,及纤连蛋白(FN)和玻璃粘连蛋白(VN)的表达.结果 低氧组10d内培养即可扩增到(1.20±0.19)×105细胞/孔,明显高于常氧组(0.65±0.08)×105细胞/孔(P<0.05);低氧组24 h细胞黏附率(88.64±1.4)%高于常氧组(60.83±1.6)%(P<0.05),同时FN和VN的蛋白表达显著增加.结论 低氧作为体外的一种可控制因素,调节MSCs的增殖及黏附功能,对于MSCs的组织工程的应用具有一定的意义.     

小儿全胸腔镜与常规开胸室间隔缺损修补术的比较研究

目的通过与正中开胸室间隔缺损修补术比较,研究小儿全胸腔镜室间隔缺损修补术的安全性和优缺点。方法选取2004年7月～2005年8月53例行全胸腔镜下室间隔缺损修补术(TTS)和50例行正中开胸室间隔缺损修补术(MS)的小儿分为TTS组和MS组。比较两组间住院相关时间、肺功能以及血常规主要指标变化和出血、输血量。结果两组间在主动脉阻闭时间、住院时间和呼吸机辅助呼吸时间方面差异无显著性(P>0.05)。TTS组与MS组在术后早期的血红蛋白、白细胞及血小板的计数改变上差异无显著性(P>0.05)。TTS组手术时间长于MS组,而其ICU滞留时间短(P<0.01)。两组患儿手术后3个月复查肺功能指标与术前差异无显著性(P>0.05)。TTS组患儿手术后失血及输血量与MS组差异无显著性(P>0.05)。结论TTS可同MS一样安全、有效地进行室间隔缺损手术,且术后早期恢复快。     

大鼠骨髓间充质干细胞与成纤维细胞差异蛋白质组学研究

目的：进行大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）与成纤维细胞（FBs）细胞的蛋白质组学研究，寻找出重要的差异蛋白质。方法：采用二维电泳的方法（2DE）分别分离两种细胞的蛋白质，用PDQuest软件分析蛋白表达差异，并采用质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定。结果：发现了MSCs和FBs之间存在差异表达的15种蛋白质，其中4种蛋白质差异显著且与细胞功能密切相关，即SM22-α、鸟嘌呤脱氨基酶（Guanine deaminose，GD）、膜联蛋白（Annexin A5）、过氧化物岐化酶-2（superoxide dismutase 2，SOD-2）。MSCs的SM22-α和Annexin A5的表达分别比FBs低26倍和8倍，而MSCs的GD和SOD-2表达分别比FBs高16倍和21倍。结论：与大鼠FBs相比，MSCs存在更多防止细胞损伤相关的蛋白质和更少的与细胞衰老过程密切相关的蛋白质，具有高分化潜能，更适合于作为组织工程种子细胞。     

婴幼儿体外循环心脏手术中奥美拉唑对胃肠道保护作用的临床观察

目的探讨奥美拉唑对婴幼儿体外循环（CPB）心脏手术中胃肠道的保护作用。方法45例在CPB下行先心病手术患儿,（年龄≤3岁）随机分为3组:实验A组在CPB预充液中即给予奥美拉唑10 mg,实验B组于CPB结束时给予奥美拉唑10 mg,对照组注入等量生理盐水。3组均于术前、CPB 30 m in、CPB结束后、术后4 h、24 h进行胃液常规检查,并采集血液标本,ELISA法测定血清促胃液素。结果与CPB前比较:A组胃液pH于CPB结束后有明显升高,B组胃液pH于术后4 h有明显升高,C组胃液pH变化不明显。A、B、C 3组胃液红细胞计数及血清促胃液素与本组CPB前相比均有明显上升。与对照组（C组）相比:A组胃液pH于CPB结束后各时间点较对照组明显上升,而胃液红细胞计数则有明显下降,血清促胃液素于CPB 3 m in后较对照组有明显降低。B组胃液pH于术后4、24 h较对照组有明显升高,同时间点胃液红细胞计数与促胃液素则有明显降低。结论在CPB心脏手术中预充液中即加入奥美拉唑对胃肠道有明显的保护作用。