胃黏膜特异表达JC病毒T抗原质粒构建及表达鉴定

 目的利用鼠胃黏膜上皮细胞中高活性的角蛋白19(K19)启动子构建K19-JCVT抗原表达质粒并进行鉴定。方法利用PCR方法突变JC病毒T抗原中的NdeⅠ位点,并在两端插入BclⅠ位点,通过BamHⅠ位点将DNA片段与K19启动子连接,构建K19-JCVT抗原质粒。利用酶切和DNA测序确认其DNA序列。免疫组化筛选细胞角蛋白19阳性胃癌细胞,对细胞角蛋白19表达阳性的胃癌细胞系AGS进行K19-JCVT抗原质粒转染,用Western
      blot方法检测JCVT抗原的表达情况。结果K19-JCVT抗原表达质粒成功构建,AGS胃癌细胞系高表达细胞角蛋白19并用于K19-JCVT抗原表达质粒转染,转染K19-T抗原质粒的AGS细胞系有T抗原表达。结论同义突变和相似连接在质粒构建中起到关键作用,酶切位点的甲基化也是值得注意的问题。     

上消化道内镜检查质量控制方法及标准相关研究进展

上消化道内镜检查（esophagogastroduodenoscopy,EGD）是发现上消化道早期癌及癌前病变的最主要手段。现阶段EGD对上消化道癌的漏诊率仍较高,EGD质量提升有着重要意义。本文从内镜检查前准备工作、检查时操作流程、检查后患者随访三个方面归纳EGD质量控制方法及标准,对相关研究进展作一综述,为EGD质量提高提供一定参考,力求降低上消化道癌症漏诊率。     

胃癌组织芯片快速制备及RegIV编码产物检测

目的：建立快速胃癌组织芯片（tissuemicroarray,TMA）制作方法,探讨其在RegⅣ编码产物检测和研究中的应用。方法：收集日本富山大学医学部1993-04-20-2010-11-29胃癌石蜡标本372例和相应癌旁黏膜标本（距离癌组织〉4cm）198例,应用AZUMAYA芯片机构建48阵列组织芯片,利用免疫组化和原位杂交检测RegIV蛋白和mRNA的原位表达。在OlympusBX41显微镜下选定切取部位,利用2mm的穿刺针切除供体蜡块,不用制备受体蜡块,直接将切除组织放入金属包埋皿的固定盒上制备48阵列芯片。结果：组织芯片经HE染色确定了组织病理学诊断,免疫组化和原位杂交均发现在肠上皮化生和黏液分泌性肿瘤细胞质中存在RegⅣ蛋白和tuRNA表达。胃黏膜肠化生中RegⅣ蛋白表达为100％（63／63）,高于胃炎的29．0％（27／93,χ^2=73．67,P〈0．001）、腺瘤的85．7％（36／42,χ^2=9．54,P〈0．005）和胃癌的45．2％（168／372,χ^2=65．06,P〈0．001）。胃癌组织中,印戒细胞癌阳性率为95．3％（41／43）,高于低分化癌的27．4％（32／117）,χ^2=55．89,P〈0．001。原位杂交发现,癌旁黏膜肠化生上皮细胞中RegIVmRNA表达阳性率为95．2％（40／42）,高于癌旁正常黏膜的38．6％（17／44,χ^2=30．63,P〈0．001）和胃癌的20．3％（14／69,X2=55．74,P〈0．001）。结论：制备TMA不需要制备受体蜡块,提高了TMA制作速度。异常RegⅣ表达与胃黏膜肠化生球样异型增生-印戒细胞癌的发生途径关系密切。     

地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用

目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA。杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色。结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中。ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中。NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰。结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观。     

《健康评估》课程教学中学生学习目标的SIMPP分析

学习目标明确度对于大学生课堂学习至关重要。《健康评估》作为护理学专业必修课程之一,是学生学好护理专业的基础,因此探讨影响《健康评估》课程学习目标的相关因素有其现实意义。在教学改革微观系统工程理念指导下,对高职学院护理学生《健康评估》课程的学习目标进行了 SIMPP分析。结果显示,我校高职护理专业有3种学生学习目标很明确,有4种学生学习目标比较明确,还有2种学生学习目标不明确;影响护理学习目标的主要是学生个人主观因素。教师应该注意观察《健康评估》课程中学生的学习状态,了解学生个体情况,做到对学生学习目标明确度的掌控;在开课之初做好学生思想工作,提高学生的学习目标明确度。     

加强医工交叉研究 促进临床医学协同发展

进入21世纪以来,医工交叉已成为推动临床医学进步的新引擎。医工交叉既是促进健康产业升级、实现健康中国的战略需要,又是解决临床问题、促进诊疗水平提升的技术支撑。本文综述了近代以来临床医学与工程学交叉的主要领域及代表性成果,并以磁控胶囊胃镜系统研发为例,阐述了医工交叉研究及成果转化的实现过程。此外,本文评价了我国医工交叉研究的开展现状,并对未来进一步加强医工交叉提出了几点建议。     

胃癌组织及细胞株细胞骨架蛋白Fascin-1表达临床意义分析

目的：分析胃癌组织及细胞株中Fascin-1蛋白表达的临床病理及预后意义。方法：从日本理化研究所获得胃癌细胞株MKN28、AGS、MKN45和KATO—Ⅲ。收集日本富山大学医学部1993—02—01～2006—10—01胃癌组织455例。利用实时PCR、蛋白质印迹法杂交或免疫组化检测胃癌细胞株（MKN28、AGS、MKN45和KATO-Ⅲ）和胃癌组织中Fascin-1mRNA和蛋白的表达,分析胃癌组织中Fascin-1蛋白表达与临床病理特征和预后的关系。结果：Fascin-1蛋白主要定位在胃癌细胞株的细胞质中,在MKN28和MKN45细胞株中呈强表达,在ACTS和KATO-Ⅲ细胞中弱表达。胃癌组织中Fascin-1mR—NA表达水平显著高于癌旁正常黏膜组织,t=5．267,P〈0．001;Fascin-1蛋白表达与胃癌肿块大小（rs=0．116,P〈0．001）、侵袭深度（n=0．177,P〈0．001）、淋巴管侵袭（rs=0．190,P=0．005）、静脉侵袭（^=0．131,P=0．003）、淋巴结转移（rs=0．141,P=0．013）和TNM分期（rs=0．174,P〈0．001）呈正相关。Cox风险比率回归模型显示,年龄（P〈0．001）、侵袭深度（P〈0．001）、淋巴管侵袭（P〈0．001）、淋巴结转移（P〈0．001）、TNM分期（P〈0．001）和Lauren分型（P=0．003）为独立的预后因素。结论：Fascin-1蛋白表达在胃癌细胞株的侵袭转移过程中发挥重要作用,Fascin-1蛋白表达上调参与胃癌发生和演进过程,可以作为胃癌恶性程度和预后判断的有效分子标志。