李氏5号方水提液对神经元游离钙浓度的影响

目的观察李氏5号方水提液(LQET)对神经元游离钙浓度的影响。方法取出生1天内的SD大鼠,分离培养海马神经元,用阿糖胞苷抑制胶质细胞生长,细胞培养到第9~12天进行细胞内钙荧光测定。用荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞45min,借助共聚焦显微镜钙成像技术测定在30mmol/L的KCl作用下,不同干扰因素下培养的海马神经元胞浆游离钙荧光强度。结果正常条件下培养的神经元,细胞内游离钙浓度为75.67±8.65nmol/L,LQET使细胞内游离钙浓度提高到126.35±9.35nmol/L,但仍在正常上限范围内;L-型钙通道阻断剂硝苯地平预处理24h,30mmol/LKCl激活的细胞游离钙浓度降低到40.65±5.65nmol/L,与正常对照组比较差异显著。LQET与硝苯地平共同预处理后细胞游离钙浓度降低到90.75±10.15nmol/L,与单纯LQET预处理组和单纯硝苯地平组比较差异显著。10μmol/LNMDA能明显增加细胞内钙荧光强度,且能在某一强度稳定,NMDA受体阻断剂MK-801可显著阻断这一效应。LQET预处理后,NMDA导致的胞浆钙荧光强度的增强效应明显降低,MK-801预处理后,LQET降低NMDA增强细胞内荧光的效应显著降低。结论LQET能通过L-型钙通道和NMDA受体对神经元细胞内钙浓度进行双向调定。     

短暂陛全脑缺血/再灌注损伤致大鼠海马组织BNIP3表达水平的改变

目的 观察全脑缺血/再灌注损伤后大鼠海马组织Bc12/腺病毒E1819kD相互作用蛋白3(BNIP3)表达水平的改变. 方法 取10只成年雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为假手术组和全脑缺血/再灌注72h组,每组5只.通过尼氏染色检测缺血模型是否引起海马神经元死亡.另取14只成年雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组(4只)、全脑缺血/再灌注1h组(5只)、全脑缺血/再灌注6h组(5只).在全脑缺血/再灌注后,于对应时间点取三组大鼠海马组织制备蛋白样品.western blot检测各时间点BNIP3表达水平的改变. 结果 (1)与假手术组比较,全脑缺血/再灌注72 h组中海马CAI区神经元形态不规则.细胞皱缩.胞核碎裂消失,表明海马神经元死亡.(2)大鼠海马组织BNIP3单体表达水平在全脑缺血/再灌注后上调,与假手术组相比.全脑缺血/再灌注1 h组(2.543±0.473)与全脑缺血/再灌注6 h组(2.942±0.777)的海马组织BNIP3单体蛋白表达水平都升高,差异有统计学意义(P<0.05).但全脑缺血/再灌注1 h组与全脑缺血/再灌注6 h组间比较差异无统计学意义(P>0.05).BNIP3双聚体在各时间点表达水平差异无统计学意义(P>0.05). 结论 全脑缺血/再灌注损伤可以引起大鼠海马组织BNIP3单体表达水平上调.     

Effect of Qigong Waiqi on the Ultraviolet Spectrum of Alcoholic Solution of Colchicine

Colctnane ( Fluka, AG) was dissohed in 95% alco-hd(}Y }.fi}8)to make a 3 x 10-'md/L sdu-tion anin 16 tubes Each of此tubes was packedin a black paper bag to shelter fran the tight and thenthese tubes were dividod at random into 4 groups.rmoup     

Ⅱ型肺上皮细胞钠通道的研究进展

Ⅱ型肺上皮细胞膜上的阳离子通道主要是阿米诺利敏感性钠通道 ,它可表达α rENaC ,β rENaC和γ rENaC三个亚基。这些离子通道至少可以分为钙激活的钠离子选择性通道和钙不敏感的高度钠离子选择性通道 ,对阿米诺利具有高度的亲和性。通道的表达和活动受激素、氧分压和一些内源性物质等因素的影响。钠通道的正常功能活动对肺的正常功能活动具有重要作用。     

L型钙通道在"李氏方"水提液保护神经元过程中的作用及该水提液最佳剂量

目的:观察L型钙通道在“李氏方”保护神经元中的作用,并找出“李氏方”水提液最佳作用剂量。方法:实验于2004-09/2005-08在南方医科大学神经生物学教研室完成。①用MTT法观察不同质量浓度0(对照组),0.0625,0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0g/L“李氏方”(主要成分有龟甲、地龙、石菖蒲、当归及酸枣仁等)水提液分别作用正常条件下培养了9d的新生大鼠海马神经元24h的细胞成活率;用Hoechst33258荧光染料标记凋亡的细胞,镜下数三四个视野的总细胞及凋亡细胞数,计算细胞凋亡率(凋亡细胞数占细胞总数的百分比)。②借助于共聚焦显微镜和钙荧光指示剂Fluo-3/AM,在海马神经元细胞培养至第8天加处理因素[单纯加入5μmol/L的L型钙通道阻断剂尼氟的平;单纯加入不同质量浓度的“李氏方”水提液及尼氟的平(5μmol/L) 不同质量浓度“李氏方”水提液共同作用]继续培养24h用于实验和细胞培养至第9天观察干扰因素的急性作用。用钙成像技术测定培养的神经元胞浆的荧光值(用30mmol/L的氯化钾诱导细胞内钙的变化)及钙浓度。③借助于膜片钳全细胞记录技术,观察“李氏方”水提液对L型钙电流的影响。④计量资料差异性比较采用方差分析中的LSD和SNK分析。结果:①0.0625～2g/L的质量浓度范围“李氏方”水提液明显提高正常培养下的海马神经元的成活率,浓度为0.5g/L细胞成活率增加最大。经5μmol/L的尼氟的平预处理后,“李氏方”水提液增加神经元成活率的效应明显降低。②“李氏方”水提液明显增加L型钙电流,经尼氟的平预处理后,“李氏方”水提液增加L型钙电流的效应显著降低。③正常培养条件下的海马神经元胞浆游离钙浓度在(75.67±8.65)nmol/L(对照组)。“李氏方”水提液作用24h后,细胞内游离钙浓度提高到(126.35±9.35)nmol/L,明显高于正常培养条件下的(P<0.05)。经尼氟的平作用24h,游离钙降到(40.65±5.65)nmol/L,明显低于正常培养条件下的(P<0.05)。“李氏方”水提液与尼氟的平共同作用24h后,细胞游离钙浓度降到(90.75±10.15)nmol/L,明显低于单纯“李氏方”水提液作用(P<0.05)。④对正常培养的细胞负载Fluo-3/AM45min后,加尼氟的平预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比尼氟的平预处理前明显降低,而“李氏方”水提液预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比“李氏方”水提液预处理前明显升高。尼氟的平预处理10min后,“李氏方”水提液再预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比“李氏方”水提液预处理的降低,与单纯“李氏方”水提液预处理比较,差异明显(P<0.05)。结论:“李氏方”水提液可通过增加L型钙通道活动,导致胞浆游离钙增加而促神经元的成活,且效果最佳的浓度为0.5g/L。     

血清肿瘤标记物联合检测在非小细胞肺癌中的临床价值

目的：探讨血清肿瘤标记物联合检测对非小细胞肺癌（NSCLC）的诊断、分型、病情估价中的作用。方法：对69例不同TMN分期的NSCLC患分别检测血清恶性肿瘤转异性生长因子（TSGF）、癌胚抗原（CEA）、细胞负质蛋白19（CYFRA21－1）、癌抗原（CA125）水平。结果：各型肺癌早期TSGF水平皆升高；CEA、CA125和CYFRA21－1水平分别在腺癌和鳞癌早期即可增加；各型肺癌晚期4项指标进一步增高；CEA、CA125、CYFRA21－1的联合检测可提高诊断的敏感性、准确性。结论：TSGF、CEA、CA125、CYFRA21－1联合检测可提高NSCLC的诊断率，对推测病理类型、判断病期有较高价值。     

氯通道阻滞剂对N-甲基-D-天冬氨酸诱导离体海马神经元凋亡的保护作用

目的：观察氯通道阻断剂4-乙酰氨基-4’-异氰酸芪-2，2乙二磺酸（SITS）对N-甲基-D-天冬氨酸诱导大鼠离体海马神经元凋亡的保护作用。 方法：实验于2004—09／12在南方医科大学神经生物教研室完成。新生1dSD大鼠64只，无菌断头取双侧海马，胰酶消化，离心，筛网过滤，把神经元种植在967L或247L培养板内。取离体培养12d的神经元，随机分为正常对照组、N-甲基-D-天冬氨酸组、N-甲基-D-天冬氨酸处理时加SITS组和N-甲基-D-天冬氨酸处理后加SITS组。除正常对照组外，其他各组均加入含有N-甲基-D-天冬氨酸300μmol／L、甘氨酸5μmoL／L的培养液，作用10min后更换培养液，N-甲基-D-天冬氨酸的作用时间是10min。N-甲基-D-天冬氨酸处理时加SITS组、N-甲基-D-、天冬氨酸处理后再加SITS组分别于N-甲基-D-天冬氨酸作用时及作用10min后使用氯通道阻断剂SITS，SITS的作用终浓度是0．5mmol／L，作用时间18h。正常对照组神经元用DMEM／F12培养基换液。18h后进行Hoechst荧光染色和MTT实验，定量检测神经元凋亡数目和神经元存活率的变化。并对SITS抗凋亡的浓度效应（0-1000μmol／L）作以观察。 结果：①SITS抗N-甲基-D-天冬氨酸作用的浓度效应：SITS浓度低于100μmol/L时，保护作用不明显，当浓度达到250、500、1000μmol／L时具有明显保护作用（P〈0．05）。②神经元细胞核形态的观察：经Hoechst33258染色后，正常神经元的细胞核呈卵圆形，荧光显微镜下呈现均匀的淡蓝色荧光，凋亡的细胞皱缩变圆、染色质浓集或断裂或出现凋亡小体，呈强亮的蓝色荧光，凋亡计数显示，N-甲基-D-天冬氨酸可诱导31．44％左右神经元凋亡，与正常对照组相比差异有显著性（P〈0．05），在N-甲基-D-天冬氨酸作用细胞的同时使用SITS，细胞的凋亡数目减少为19．23％，N-甲基-D-天冬氨酸作用10min后再使用SITS，细胞的凋亡数目升高为31．64％，两组相比差异有显著性（P〈0．05）。③SITS在对N-甲基-D-天冬氨酸处理神经元前后神经元存活率的影响：N-甲基-D-天冬氨酸处理后的细胞存活率明显下降，在N-甲基-D-天冬氨酸作用细胞的同时使用SITS，细胞存活率为93．44％，与对照组相比差异有显著性（P〈0．05）；N-甲基-D-天冬氨酸作用10min后再使用SITS，细胞存活率为73．95％，与N-甲基-D-天冬氨酸处理时加s1TS组相比差异有显著性（P〈0．05）。 结论：SITS作为氯通道阻断剂能抑制N-甲基-D-天冬氨酸诱导的神经元凋亡，对N-甲基-D-天冬氨酸诱导的海马神经元死亡有保护作用，且在N-甲基-D-天冬氨酸处理神经元前后使用作用效果不同，作用机制可能与N-甲基-D-天冬氨酸的效应和氯通道活动均被阻断有关。     

大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法的改进

目的:改进培养大鼠海马神经细胞体外缺糖缺氧模型制备方法,并通过兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂进行验证。方法:实验于2004-09/2005-06在南方医科大学基础医学院神经生物学教研室进行。实验材料:出生1d内清洁级SD大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供(合格证号为粤证监字2004B023号)。N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801)和D-2-氨基-5-磷酰基戊酸(d-APV)购自Sigma公司。实验方法:取新生1dSD大鼠海马组织作神经细胞分散细胞原代培养,培养到13d时进行氧/葡萄糖剥夺模型的制备:将neurobasal培养基更换为不含葡萄糖的BSSo培养基,连续充以50mL/LCO2 950mL/LN2(体积比)混合气体。缺氧30,45,60,90min后取出细胞,更换为正常neurobasal培养基,恢复正常条件继续培养。将神经细胞随机分为正常对照组、单纯缺氧组、无糖缺氧组、MK-801组和d-APV组。将10μmol/LMK-801和500μmol/Ld-APV在通50mL/LCO2 950mL/LN2混合气前加入到BSSo培养基,缺氧结束后随BSSo培养基一起去掉。复氧24h后采用MTT比色法测神经细胞成活率及Hoechst荧光染料法测神经细胞凋亡率。结果:①随着氧/葡萄糖剥夺时间延长,神经细胞存活率下降。氧/葡萄糖剥夺30,45,60,90min再复氧24h,神经细胞存活率分别为(81.48±3.84)%、(63.14±3.14)%、(41.73±2.97)%和(16.78±2.12)%。②N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂MK-801(10μmol/L)和d-APV(500μmol/L)均能明显增加神经细胞存活率(P<0.05),并且两组细胞存活率与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:实验制备的海马神经细胞短时间氧/葡萄糖剥夺模型可对神经细胞造成迟发性死亡,兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂可保护氧/葡萄糖剥夺诱导的神经细胞损伤,说明本实验建立的缺氧模型有效并简便可靠,并且缩短了缺氧时间。