尘螨变应原皮肤点刺试验与血清特异性IgE的相关性研究

目的 探讨尘螨变应原皮肤点刺试验(skinprick test,SPT)结果与血清特异性IgE(specific IgE,S-IgE)检测值之间的相关性.方法 分析170例接受尘螨变应原SPT和相应的血清S-IgE检测的变应性鼻炎患者不同皮肤风团直径和不同皮肤反应指数(skin index,SI)对应的血清S-IgE的差异.结果尘螨变应原SPT不同皮肤风团直径和不同SI对应的血清S-IgE存在显著性差异,随着皮肤风团直径或SI的增加,血清S-IgE阳性率和级别也显著增加.结论尘螨变应原SPT结果和血清S-IgE结果存在相关性.     

Nd：YAG激光间质热疗在肝癌治疗中的应用

Nd：YAG激光是一种近红外激光，产生于60年代。常用的Nd：YAG激光其波长为1064cm，在组织中穿透达8mm。它具有脉冲能量大，不易被水和血红蛋白吸收，穿透组织较深，可以通过光束输进或通过光纤间质植入组织中等特点，因而广泛应用于体表及腔内肿瘤治疗。     

激光功率密度对HMME-PDT的视网膜和脉络膜生物学效应的影响

目的观察激光功率密度对血卟啉单甲醚(HMME)的视网膜和脉络膜的光动力效应的影响。方法以新西兰兔正常脉络膜毛细血管层为实验对象,HMME注射剂量为5mg/kg,波长532nm激光作为激发光源,眼底光斑能量密度为20J/cm2,功率密度分别为100、200、300和400mW/cm2,相匹配的照射时间分别为200、100、66和50s,照光时机为注射药物结束后5min之内。在PDT后第6小时和12小时,1、3和5天进行眼底观察、荧光眼底造影,并在眼底造影出现脉络膜毛细血管闭塞时取照光部位进行组织学检查。结果激光功率密度为100mW/cm2,PDT后第5天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为200mW/cm2时,PDT后第3天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为300mW/cm2时,PDT后第1天出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第3天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管闭塞;功率密度为400mW/cm2时,PDT后第6h出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第5天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管和大部分脉络膜大血管的闭塞。结论在激光能量密度相同时,其功率密度是影响生物学效应的重要因素。即随着功率密度的增加,生物学效应出现的时间提前,照射部位的视网膜和脉络膜大血管受累的可能性越大。     

ICG在PDT中对HPD光敏反应作用机制的研究

本文通过化学发光法测定ICG在630nm和514.5nm激光照射下对HPD光敏产生化学发光的影响。发现ICG可减少由HPD光敏产生的化学发光量,这种对光敏反应的抑制作用与光波长和剂量无关,与ICG的浓度有关。认为ICG作用的机制是降低HPD光敏产生的’O~2和ROS的氧化作用,从而抑制了化学发光反应。     

一种新型亚苄基环戊酮类光敏剂在不同生长阶段真菌生物膜内的结合规律

目的:通过研究一种新型阳离子亚苄基环戊酮类光敏剂P2在临床耐药白念珠菌中的结合特性和在生物膜内分布情况,初步了解该光敏剂在真菌生物膜内的吸收和分布特点。方法:(1)体外构建白念珠菌生物膜:以耐氟康唑白念珠菌临床分离株1 411～13 149为实验对象,挑取适量菌落,用RPMI-1 640培养基配制～106cfu/ml的菌悬液,移入培养皿中,1.5 h后PBS清洗去未粘附细胞,加入新的培养液,35℃培养箱分别培养3、6、12、24、48和72 h,结晶紫染色观察各阶段生物膜的形成及24 h后是否形成孢子、菌丝和胞外基质组成的成熟生物膜;(2)激光共聚焦显微镜观察P2在生物膜内的分布:以浓度为10、25、50、100μM的P2分别与24和48 h白念珠菌生物膜避光孵育60 min,将处理后的生物膜用培养基漂洗2遍,用共聚焦激光扫描显微镜观察,采集照片。(3)定量检测生物膜与P2的结合:以浓度为10、25、50、100μM的P2分别与48 h白念珠菌生物膜避光孵育0、10、30、60和240 min,PBS清洗后用移液器洗头均匀刮擦皿底并吹打均匀,用多功能酶标仪测定细胞上结合的光敏剂含量,即选取498 nm的光激发生物膜悬液,记录630 nm处的荧光强度值,每组设3个平形孔,实验重复3次取平均值。结果:(1)3 h可见芽管萌发,6 h假菌丝生成,12 h菌丝形成微菌落,24 h可见孢子和菌丝被少量胞外基质包绕,48h可见菌丝长度增加,胞外基质继续增多,72 h时胞外基质更加浓稠,菌丝和孢子几乎完全被包绕。(2)生物膜与P2的结合是浓度依赖的;随着浓度增加,更多的真菌细胞与P2结合;48 h生物膜在低浓度与高浓度下结合模式不同:10μM和25μM时,只有个别孢子和芽管结合P2;50μM和100μM时,菌丝才与光敏剂P2结合,浓度增加至100μM时,生物膜内大量的菌丝上都结合了光敏剂P2。(3)生物膜结合的光敏剂数量呈浓度依赖,随浓度增加,各时间点的结合量均增加;低浓度与高浓度下结合模式不同:在低浓度时,结合量随时间基本呈线性增加;在高浓度时,前期结合速度快,1 h后结合量趋于稳定。结论:光敏剂与成熟白念珠菌生物膜的结合呈浓度依赖;随浓度增加,各时间点的结合量均增加;低浓度与高浓度结合模式不同,高浓度时生物膜内的孢子和菌丝都能与光敏剂结合,低浓度时只有孢子结合光敏剂:胞外多糖的物理屏障作用和所带负电荷对阳离子光敏剂P2的吸附作用可能是导致结合模式不同的原因之一。     

新型亚苄基环烷戊酮化合物介导的光动力对铜绿假单胞菌的体外杀伤效应

目的:研究新型亚苄基环烷戊酮化合物P2介导的光动力(P2 mediated Photodynamic therapy,P2-PDT)对4株离体铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa,PA)的杀伤作用,为探索PDT抗耐药铜绿假单胞菌感染提供实验依据。方法:分离培养铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27 853和临床分离的多重耐药菌3株(PA1、PA2和PA3),制备成～108CFU/ml的细菌悬液。实验分组:每株菌株均分为4组,分别为PDT组、单纯光敏剂组、单纯照光组和空白对照组。(1)PDT组:采用光敏剂+激光照射。不同浓度P2光敏剂(终浓度为2.5、5、10、20和25μM)与细菌悬液混合后,避光孵育30 min,采用波长532 nm激光照射,光剂量(功率密度40 m W/cm2,照射时间10 min,能量密度24 J/cm2)。(2)单纯光敏剂组:仅进行光敏剂孵育,不予激光照射。P2光敏剂浓度为50μM与细菌悬液避光混合,孵育时间30 min。(3)单纯照光组:仅进行激光照射,不予光敏剂孵育。同浓度细菌悬液与PBS混合后避光孵育30 min后,进行激光照射,激光照射方法同PDT组。(4)空白对照组:不加入光敏剂,不予激光照射。细菌悬液与PBS混合后,孵育时间30 min。每组样本处理后即刻,采用稀释平板法进行菌落计数,每组3个样本,重复3次取平均值,评价杀伤效果。结果:在一定光照条件下,不同浓度的P2-PDT对耐药性不同的4种菌株的杀伤效果略有差别,但总体趋势基本一致,PDT的杀菌效果随光敏剂浓度的增加而增强。P2光敏剂在浓度10μM时,4种铜绿假单胞菌株活性均降低3 Log以上,相当于99.99%的细菌丧失了活性。单纯光敏剂组或单纯照光组对细菌活性无影响。结论:体外实验表明,新型P2-PDT能够有效地杀伤铜绿假单胞菌标准菌株和耐药菌株,其对抗生素敏感菌与耐药菌的杀菌效果无差别。     

光动力学疗法治疗过程中鲜红斑痣病变组织内光敏剂含量检测的初步研究

目的 应用荧光光谱技术监测光动力学疗法治疗过程中鲜红斑痣病变组织内光敏剂含量的变化，分析光漂白产物的生成情况。 方法 鲜红斑痣患者静脉推注光敏剂PSD-007，即刻以532nm倍频Nd：YAG激光器作为光动力治疗光源照射病变组织，同时又作为光敏剂荧光激发光源。在不影响光照的前提下，应用光学多通道分析仪实时采集同一治疗区域不同时间点的荧光光谱。经过光谱分析与处理，得到治疗区局部组织光敏剂含量以及光漂白产物含量随治疗时间变化的曲线图。 结果 不同患者治疗区局部组织光敏剂荧光变化存在较大的个体差异，但是各病例均呈现先上升后降低的趋势，第1治疗区的最大荧光强度高于第2治疗区域，第1治疗区出现最高荧光峰的时间为治疗开始后的5-15min。 结论 通过荧光手段监测光动力治疗时鲜红斑痣病变局部组织内光敏剂荧光的变化可有效地反映光敏剂含量的变化，对于了解光动力反应的进行情况以及预测反应效果具有一定的指导意义，并为制定个性化的光动力治疗方案提高疗效提供依据。     

低强度激光对脂质体介导的心肌细胞基因转染的影响

目的观察低强度激光对脂质体介导的心肌细胞基因转染的影响.方法采用阳离子脂质体Lipofectamin介导外源性Lac-Z基因转染体外培养的大鼠心肌细胞,在基因转染过程中给予低强度激光照射,激光波长510.6nm和627.8nm,功率密度为1、5、10mW/cm2,照射时间为10、20min,调节能量密度分别为0.6、1.2、3、6、12J/cm2.激光照射于基因转染后即刻进行,同时设对照组1为转染不照射,对照组2为不转染不照射.于转染后48h用邻硝基苯-D-吡喃半乳糖苷(O-nitrophenyl-D-galactopyra-noside,ONPG)检测细胞内Lac-Z基因表达产物β-半乳糖苷酶(galactosidase)的产量.结果所有照射剂量均能显著提高实验组心肌细胞β-半乳糖苷酶的产量,其中以510.6nm、1.2J/cm2组的效应最明显,其光密度(opticaldensity,OD)值较转染未照射组提高了15倍(0.718±0.088/0.048±0.008,P＜0.01);其余各组效应较弱,其OD值只提高了1.75～3.77倍(P＜0.05).结论低强度激光能促进脂质体介导的心肌细胞的基因转染,这一作用与低强度激光波长及能量密度有密切关系.     

光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的实验研究

目的探讨光敏剂亚细胞分布位点光漂白作用的发生特点。方法将血卟啉单甲醚（hematoprophyrin monomethyl ether，HMME）与传代培养ECV304细胞共同孵育12h后，采用荧光探针标记技术和细胞器．细胞荧光强度比值法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析。应用荧光显微镜汞灯照射以激发光敏剂产生光动力效应，并加入ROS探针H2DCF-DA检测单线态氧的产生。分别在光照前后采集四种细胞器及DCF的荧光图像并进行荧光强度的定量分析。结果细胞总荧光光强在光照后较光照前降低26．4％；以每种细胞器光照前的平均荧光光强比值为基准，则光照后线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体分别降低了31．1％、23．4％、5．8％和5．0％。线粒体区域在单纯光照和有HMME存在情况下后均检测到DCF荧光的增强。结论光动力效应可能导致亚细胞结构内产生不同数量的单线态氧，会引起不同程度的光漂白作用，线粒体区域HMME光漂白速率较快；线粒体区域产生数量较多的单线态氧，可能是光动力效应的主要作用靶点之一。