光敏剂亚细胞定位研究方法的应用比较

目的 探讨不同光敏剂亚细胞定位方法的应用特点。方法 应用电感耦合器材（CCD）荧光显微成像系统，选择细胞器荧光探针BODIPY标记细胞内高尔基体。分别采用直接观察法、伪彩色融合法、波形比较法、相关系数法及细胞器一细胞荧光强度比值法，对光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）进行细胞内分布的定性与定量研究。结果 采用直接观察法比较光敏剂和细胞器探针荧光图像，发现HMME和BODIPY的荧光分布模式有相似之处，采用伪彩色融合法得到的二者融合图像，显示存在黄色的空间重叠区域。应用波形比较法发现，直线路径上所有像素在HMME荧光图像与BODIPY荧光图像中的灰度值相对空间坐标的曲线波形相似。应用相关系数法得出，各像素的HMME荧光灰度值与细胞器探针荧光灰度值之间的相关系数值为0．6024。采用细胞器一细胞荧光强度比值法发现，随着参数m的增大，即细胞器聚集程度的降低，高尔基体聚集区域的平均荧光强度比值（J1／J2）呈下降趋势，二者具有明显的相关性（P〈0．05）。结论 通过直接观察、伪彩色融合及波形比较的方法，基本可以判定HMME在高尔基体聚集区域有分布；采用相关系数法．尤其是细胞器一细胞荧光强度比值法能得到更为精确的量化结果，以弥补定性方法的不足。     

激光共聚焦显微成像技术对亚细胞位点光动力损伤的动态观察

目的探讨应用激光共聚焦显微成像技术对光动力效应所致亚细胞位点损伤进行动态观察的可行性。方法实验分为HMME＋Rhodamine-123组、单加HMME组、单加Rhodamine-123组和单纯细胞组，后3组作为对照组。传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞，将血卟啉单甲醚（HMME）与内皮细胞共同孵育24h后，加入细胞探针Rhodamine-123对线粒体进行染色。应用激光共聚焦显微镜并采用细胞器-细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位，随后采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列。结果HMME＋Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像在光照过程中逐渐发生变化：典型的线粒体形态特征逐渐消失，并伴有荧光强度下降，荧光在胞浆内趋于弥散分布，细胞核内出现Rhodamine-123的荧光；而单加Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像未发生明显变化。结论应用激光共聚焦显微成像技术能实现亚细胞水平光敏损伤位点的动态光学检测，线粒体和核膜可能是HMME介导的光动力损伤亚细胞位点。     

用LDH释放法判断细胞病变程度确定干扰素生物活性

目的：应用ＬＤＨ释放法测定干扰素生物活性。方法：通过检测ＷＩＳＨ细胞裂解后释放出的ＬＤＨ活性判断细胞病变的程度,确定干扰素效价。对ＬＤＨ释放法进行改进,与结晶紫染色法和ＭＴＴ比色法进行灵敏度、重复性和相关性比较。结果和结论：该法减少了实验步骤和时间,成本低,敏感性高,重复性好,与其他方法所测结果无显著差异,简便实用,优于结晶紫染色法和ＭＴＴ比色法。     

高功率CO2激光心肌打孔机的研制及临床应用

目的：研制用于激光心肌打孔血运重建术（TMLR）的高功率CO2激光治疗仪，并对其生物学效应及临床应用效果进行评价。方法：采用激光合成方法研制产生大功率CO2激光的心脏打孔机，分别在有机玻璃块，犬离体心脏和活体心肌缺血模型上进行激光心肌打孔实验，以检验合成光束的生物物理特性，选择安全有效的激光心肌打孔参数。在此基础上，使用该仪器为65例冠心病病人行TMLR手术并观察效果。结果：在有机玻璃和离体猪心打孔显示孔道孔径，深度可以满足TMLR的使用要求，使用该仪器在犬缺血心肌打孔形成透壁孔道，1周年镜下可见孔道通畅，65例接受TMLR手术患者，3例分别于术后第3天、第4天及第8天因呼吸衰竭、心力衰竭及心律失常死亡，其余病人均顺利院，随访6－30个月，50例患者心绞痛明显减轻，其中37例较术前减少2级，15例减少1级，7例变化不明显，失访5例，26例术后行心肌放射性核素断层扫描，有21例心肌的孔区域的血流灌注比前术前明显增加。结论：合成高功率CO2心脏激光打孔机治疗仪在TMLR的动物实验及临床应用中安全有效。     

血卟啉单甲醚蛋白结合状态对其亚细胞分布的影响

目的探讨在不同种类血浆蛋白的条件下血卟啉单甲醚向细胞内转运及分布的特点.方法在不同种类血浆蛋白条件下,将血卟啉单甲醚(HMME)与传代培养HeLa细胞共同孵育2 h和12 h.采用荧光探针标记技术和细胞器-细胞荧光强度比值分析法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析.结果孵育2 h与12 h比较,不含血清组中4种细胞器内HMME的平均荧光光强比值都有升高,以线粒体、内质网和高尔基体较显著,溶酶体稍有升高;白蛋白(Alb)组中4种细胞器中溶酶体的HMME平均荧光光强比值升高较显著,其他3种细胞器则略有升高;低密度脂蛋白(LDL)组中4种细胞器中溶酶体内HMME的平均荧光光强比值升高更加显著,其他细胞器的HMME平均荧光光强比值升高幅度明显大于Alb组.结论在短时间内进入细胞的主要为游离型HMME,转运形式以单纯被动扩散为主,以高尔基体、线粒体和内质网等细胞器为主要分布位点,溶酶体次之.随着孵育时间的延长,HMME可以和白蛋白、低密度脂蛋白结合形成结合型HMME,以胞吞形式进入细胞,二者相比,和LDL结合的HMME更易穿过细胞膜,溶酶体吸收HMME能力增强.     

光动力疗法治疗脉络膜新生血管的研究进展

随着眼科疾病检查手段的不断更新，脉络膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)的检出率逐渐增高，对其发病原因和治疗的研究也日益深人，现已知道很多因素能导致CNV。CNV尤其是黄斑处的脉络膜新生血管容易出血、渗出，继而机化和瘢痕形成，病情反复发作，最终导致视力下降，甚至失明。目前治疗CNV的方法主要有激光照射、放射、药物     

光动力疗法封闭兔耳缘静脉的实验研究

目的：探讨光动力疗法封闭小静脉所需光敏剂和激光照射的剂量，为临床应用光动力疗法封闭小静脉提供依据。方法：以兔耳缘静脉为研究对象。实验动物注射血啉甲醚或竹红菌乙互后用铜蒸气激光照射耳缘静脉。选择不同的功率密度、照射时间、光敏剂及其剂量，比较各组兔耳缘静脉血栓形成比率。结果：在血啉甲醚剂量为10mg/kg时，150mW/cm^2激光照射40min(能量密度为360J／cm^2)的血兔耳缘静脉血栓形成比率高于180J/cm^2和240J/cm^2(P=0.040,P=0.167)。180J／cm^2激光照射剂量时，30mg/kg血啉甲醚组血栓形成比率高于10mg/kg和20mg/kg(P=0.014,P=0.214).功率密度同为150mW/cm^2，血啉甲醚剂量为30mg/kg激光照射20min与10mg/kg激光照射40min的血栓形成比率相当（P＝0．556）。功率密度为150mW/cm^2激光照射时，竹红菌乙素剂量为1mg/kg激光照射5min，与血啉甲醚剂量为10mg/kg激光照射40min的血栓形成比率相当（P＝0．714）。结论：在一定范围内局部激光照射能量越高、光敏剂的剂量越大，越容易形成血栓。光动力疗法封闭小静脉形成血栓比较合适的条件是血啉甲醚剂量10mg/kg，功率密度150mW/cm^2，照射时间40min。光动力疗法对小静脉的封闭作用使之有可能成为治疗食管、胃静脉曲张的新方法。     

超声引导经皮Nd:YAG激光肝组织光凝固术的基础研究

作者等采用Nd：YAG激光以2～5W输出功率，照射5～20分钟，对离体猪肝、狗肝进行了体外光凝固实验，并在超声引导下对犬、小型猪肝脏进行了经皮穿刺组织间光凝固的在体实验。激光照射中实时监测了受照组织的温度变化及其范围，观察了超声影像与肝组织改变的对应关系，对比了激光照射能量与肝组织温度变化、热损伤程度的关系。实验结果表明，超声引导下经皮Nd：YAG激光肝肿瘤凝固术是可行的，并为进一步的临床研究提供了有参考价值的实验数据。     

治疗视网膜脉络膜新生血管的竹红菌乙素光动力学疗法实验系统的建立

目的 建立一种治疗视网膜脉络膜新生血管的竹红菌乙素光动力学疗法实验系统。方法 1.在裂隙灯显微镜下开创激光窗口，光纤连接激光器和裂隙灯显微镜，使激光和裂隙灯照明同光路到达眼底，作为照射系统；2．通过四甲偶氮唑盐(MTT)法检测光敏剂竹红菌乙素(HB)体外光敏性，和苯并卟啉衍生物单酸A环(BPD-MA)相比，初步判断其光敏性；3．以光敏剂HB为例，青紫蓝兔为实验对象，进行PDT治疗，通过眼底观察，荧光眼底造影、光学显微镜和电子显微镜检查照光部位的生物学效应，检测建立的实验系统的实用性，可靠性。结果 照射系统输出稳定，由激光器发出的功率和裂隙灯显微镜的激光窗口末端的输出的功率的耦合率为60％。国产HB体外光敏性和BPD-MA相似。HB-PDT仅对脉络膜毛细血管造成损伤而对周围正常组织损伤小，达到选择性治疗目的，有进一步研究价值。结论 新建立的照射系统和光敏剂光敏性体外评价系统，以及体内观察生物学效应的方法，可作为初步判定光敏剂是否适合治疗视网膜或脉络膜新生血管的方法。     

血管内激光光凝治疗大隐静脉曲张的超微结构观察

背景：血管内光凝治疗大隐静脉曲张的机制研究尚少。目的：探讨血管内光凝对曲张大隐静脉超微结构的改变。设计：观察性研究。单位：解放军总医院激光科。对象：2004—01／04，解放军总医院门诊大隐静脉曲张并行血管内激光治疗的患者42例。纳入标准：取踝部明显曲张而无明显血栓形成，表面皮肤完好，无明显营养性障碍的大隐静脉，患者均自愿参加，纳入9例。干预：采用810nm波长激光器，功率为12W，暴光时间1s，血管内光凝治疗曲张大隐静脉，3h后取踝部光凝血管。主要观察指标：行组织病理学检查观察光凝后血管超微结构变化。以正常静脉和治疗前曲张静脉作为对照。结果：正常静脉分三层，内膜为单层血管内皮细胞，中膜为平滑肌细胞、弹力纤维和胶原纤维等，外膜为一疏松排列的结缔组织。曲张静脉组织学检查见内膜不完整，内皮细胞之间连接疏松，平滑肌细胞增生，肥厚或萎缩，弹力纤维减少，胶原纤维增多。光凝后管腔内可见大量血细胞，血小板扁平，伸出伪足，贴附于胶原表面。血管内皮细胞和靠近管腔部位的平滑肌细胞结构破坏，细胞浆外溢，和细胞外基质融合；靠近血管腔部位的弹力纤维和胶原纤维断裂，部分脱落于管腔；靠近外膜部位的弹力纤维和胶原纤维和外膜结构没有改变。结论：激光光凝治疗静脉曲张引起内膜和部分中膜结构破坏，大量血细胞聚集于管腔，促进血小板附着于血管壁。