趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达

背景：趋化因子受体7（chemokine receptor-7,CCR7）是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的：构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法：采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒（重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG）共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论：实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。     

血清总胆固醇水平与MELD评分评估失代偿期乙肝肝硬化患者预后

目的 探讨血清总胆固醇(TC)水平与终末期肝病模型(MELD)评分对乙肝肝硬化失代偿期患者的短中期预后的预测价值.方法入选77例乙肝肝硬化失代偿期患者,分别根据随访3个月、6个月的存活情况分组,对死亡组与存活组中血清总胆固醇值、MELD评分及CTP分值进行比较;应用ROC曲线评价血清总胆固醇浓度、MELD评分及CTP评...     

加速折旧法回收医疗设备成本的研究--以浙江大学医学院附属第二医院血透机为例

目的：鼓励临床科室延长设备使用年限的同时，加速医院回收设备成本，为临床科室增加收入，为医院节省成本。同时，减轻临床科室购买新设备的压力和提高购置新设备积极性，使医院硬件提升的脚步跟上医疗界科技发展的步伐。方法：以血透机为例，采用加速折旧法进行折旧计算。结果：血透室的收益比使用平均法扣除成本时的收益要高。结论：该方法适合在收入稳定的大型医院内进行大型医疗设备成本计算和成本扣除，确实能鼓励临床科室尽可能延长设备使用年限，减轻临床科室购买新设备压力。     

基于肠肾轴概念从肾-肺-大肠轴谈孙伟教授治疗慢性肾脏病的经验

基于西医肠肾轴概念从中医脏腑理论谈孙伟教授治疗慢性肾脏病经验,孙伟教授早在肠肾轴提出前已应用"补益肺肾,活血清利法"论治慢性肾脏病,为临床治疗慢性肾脏病指出了新方向。     

虚拟现实全景术野融合手术示教直播系统构建与评价

目的：设计一种虚拟现实(VR)全景术野融合手术示教直播系统,并评价其应用效果。方法：构建VR全景术野融合手术示教直播系统,该系统由视频采集模块、流媒体服务模块和终端播放模块3部分组成,具备全景呈现、多画面融合、实时交互等技术特点,可实现全景手术直播、手术示教及远程医疗会诊。选取24名在校临床医学生,采用研究后系统可用性问卷(PSSUQ)评价VR全景术野融合手术示教直播系统的可用性及满意度。结果：在示教直播系统的评价中,PSSUQ单项题目平均得分及99%置信区间均低于平均数3.5分的分界点,单项题目平均得分和4个维度得分均低于PSSUQ最佳基准。结论：VR全景术野融合手术示教直播系统具有较高的体验度,可用性及满意度较高,能够实现手术示教直播技术上的创新与突破,具有良好的应用前景。     

红色荧光蛋白标记的小鼠白血病模型的建立

 目的　利用红色荧光蛋白（DsRed）标记的小鼠淋巴瘤EL4细胞株,建立荧光标记的小鼠白血病模型,并对模型进行分析和鉴定。方法　将EL4／DsRed细胞以低剂量（5×102／只）、中剂量（5×103／只）、高剂量（2.5×104／只）经尾静脉注入经清髓照射的C57BL／6小鼠体内,同时接种骨髓细胞5×106／只,采用流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、组织病理等方法鉴定小鼠成模情况。结果　C57BL／6小鼠接种不同剂量EL4／DsRed细胞后白血病发病率达100 %,移植后第2周FCM示受鼠肝、脾、骨髓和外周血中有大量EL4／DsRed细胞;各组组织器官病理检查呈现出不同程度的肿瘤细胞浸润。结论　用DsRed标记的EL4细胞以5×102／只植入C57BL／6小鼠,即可成功建立荧光标记的小鼠白血病模型,可为白血病发病机制、微小残留病检测等研究提供有价值的动物模型。     

趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达**

背景：趋化因子受体7(chemokine receptor-7, CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。 目的：构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。 方法：采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7 DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒     ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。 结果与结论：实验成功扩增出小鼠CCR7 DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293 FT细胞后,24 h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108 U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。 关键词：趋化因子受体7;未成熟树突状细胞;慢病毒载体;真核表达;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.01.029     

MRI-三维重建动态测量颅脑创伤模型大鼠的空腔变化

BACKGROUND: Currently, morphological observations of brain cavity after traumatic brain injury (TBI) via cadavers or animal specimen are difficult to obtain dynamic changes.     

慢病毒介导的B区缺失的人凝血因子Ⅷ在NOD/SCID小鼠中的持续表达

近年来,基因治疗作为一种新的治疗方法给血友病A的治疗提供了新的思路.本研究旨在探讨在体外和NOD/SCID小鼠中应用慢病毒载体介导的血友病A基因疗法的可能性.构建含有B区缺失的人凝血因子Ⅷ(BDDhFⅧ)基因和IRES-eGFP编码序列的慢病毒表达载体pXZ9/BDDFⅧ.通过3质粒共转染293FT包装细胞,包装后感染293FT,HLF,Chang-liver和人骨髓间充质干细胞.在感染后分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA),一期法,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和聚合酶链反应(PCR)法检测凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性,FⅧ抗原,FⅧ的mRNA转录和基因整合情况.超速离心收集病毒颗粒,并通过门静脉注射感染NOD/SCID小鼠.ELISA分析小鼠血浆FⅧ抗原,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,转导后1个月RT-PCR分析小鼠肝脏人FⅧ的转录情况.结果表明:成功制备高浓度的重组慢病毒,并能在体外高效转导靶细胞.感染后72 h能检测到高水平的FⅧ活性和FⅧ抗原.RT-PCR和PCR法能敏感检测到人FⅧ基因特录和整合至感染后的细胞中.在所有接受重组慢病毒颗粒注射后的NOD/SCID小鼠肝脏中均能检测到人FⅧ基因的转录,同时重组慢病毒也能在体内高效转导小鼠肝细胞.在感染后72 h小鼠血浆中人FⅧ水平为(49±6) mU,1周后为(54±8) mU,1个月后为(23±4) mU.结论:携带BDDhFⅧ基因的慢病毒颗粒在体内外能高效转导靶细胞,且所有被转导的靶细胞都能有效的分泌人FⅧ.经过门静脉注射慢病毒颗粒的NOD/SCID小鼠可以持续表达人FⅧ.     

2011～2019年广州地区无偿献血者血液检测结果分析

目的 对2011～2019年广州地区无偿献血者血液检测结果进行分析,为本地区采供血工作提供科学依据.方法 选择2011～2019年广州地区2918469例无偿献血者为研究对象,对其常规检测数据进行统计分析.结果 2011～2019年2918469例无偿献血者血液检测总的不合格率平均为3.01％(87988/291846...