在Hela细胞中验证miRNA-21对TLR4的调控

背景：miRNA通过调节特异靶基因的表达,在疾病的发展及预后中起着重要作用。 目的：探索miRNA-21在宫颈癌Hela细胞中对TLR4基因的调控关系。 方法：通过miRNA靶基因预测网站寻找可能与miRNA-21相互作用的靶基因,利用已构建的携带pri-miRNA-21基因重组腺病毒载体,包装并大量扩增病毒感染Hela细胞,检测荧光蛋白的表达水平,提取感染48 h蛋白,通过Western印迹检测TLR4蛋白表达。从蛋白水平验证在Hela细胞中miRNA-21与靶基因TLR4的靶向调控关系。 结果与结论：100 MOI的重组腺病毒pAd/pri-miRNA-21、pAd/neg可以成功感染Hela细胞。生物信息学方法显示miRNA-21和TLR4存在可能的结合位点。发现感染pAd/pri-miRNA-21组与对照组pAd/neg及空白组相比,TLR4蛋白的表达量明显降低。证实了miRNA-21可以负调节靶基因TLR4的表达。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

日立7170A全自动生化分析仪反应槽温度准确性及波动的检测

目的:检测日立7170A全自动生化分析仪反应槽温度准确性及波动。方法:用精度为0.001℃的Fluke点温计测定反应槽水浴温度,共测10min,每隔18s记录一次温度,计算所有次温度值的平均值和最大值与最小值之差。平均值(T)为温度准确性;最大值与最小值之差(△T)为温度波动。结果:T=36.960℃;△T=0.064。结论:所检测的日立7170A全自动生化分析仪反应槽温度准确性及波动符合国家标准。     

参考实验室外部质量评估计划样品天冬氨酸氨基转移酶稳定性评价

摘要：目的：评价2014年参考实验室外部质量评估计划（RELA）样品天冬氨酸氨基转移酶（AST）的稳定性。 方法：按说明书要求溶解2014年RELA-A样品,用棕色小瓶分装后立即－80 ℃冻存。将分装后的样品从－80 ℃低温冰箱取出,置于2~8 ℃冰箱1、2、4、6、8、16、24、48 h,用国际检验医学溯源联合委员会（JCTLM）列表AST一级参考方法测量样品,每份测量3次,以1 h结果均值为基准值,计算2、4、6、8、16、24、48 h AST结果均值相对1 h结果均值的偏移。 结果：2、4、6、8、16、24、48 h AST结果均值相对1 h结果均值的偏移分别为+0.39%、+0.96%、+0.80%、+1.72%、+2.21%、+3.04%、+4.47%。 结论：2014年RELA-A样品2~8 ℃保存时AST催化活性呈逐渐增加趋势,建议各实验室尽量缩短RELA样品在2~8 ℃的存放时间。     

响应面分析法在胆碱酯酶测量条件优化中的应用

目的筛选胆碱酯酶(ChE)的最佳测量条件。方法选择5,5'-二硫双(2-硝基苯甲酸)法(DTNB)测量ChE的关键影响因子,用单因素分析法确定响应面分析法(RSM)的理想实验区域,用RSM的中央合成设计建立相应的反应面模型,获得影响因子响应值的关系方程。用Minitab 15软件进行RSM测量条件优化,筛选出ChE最佳测量条件并进行验证。结果 ChE测量的关键影响因子为缓冲液pH值(A)、丁酰硫代胆碱浓度(B)、DTNB浓度(C)。RSM的理想实验区域为缓冲液pH值7.6~9.2;丁酰硫代胆碱浓度6.7~20.1 mmol/L;DTNB浓度0.2~0.4 mmol/L。各影响因子与响应值(Y)的关系方程为Y=8 476.13-73.29A+20.00B-4.56C-126.86A2+32.85B2+71.48C2-55.47AB-1.06AC-16.34BC。ChE的最佳测量条件为缓冲液pH值8.10;丁酰硫代胆碱浓度13.40 mmol/L;DTNB浓度0.29 mmol/L,此条件下ChE催化活性为8 755 U/L,相当于理论最高酶活性的95%以上。结论用RSM成功筛选出ChE最佳测量条件,建立了合理可行的ChE测量影响因子的RSM多因子分析模型。