“方法学比较”法评价临床检验定量测量方法正确度时应注意的问题与对策

摘要： 探讨“方法学比较”法评价临床检验定量测量方法正确度时存在的问题,以帮助临床实验室正确评价这类方法的正确度。本文从实验方案的设计、实验准备、实验、数据处理、实验结果表述等五方面分析目前国内外临床实验室常用的“方法学比较“法在评价定量测量方法正确度时面临的问题,提出目前我国临床实验室采用该方法评价正确度时应注意的问题及解决的方法。严密的实验设计、恰当的实验样本、运行稳定的测量程序、训练有素的技术人员、适当的数据处理方法和评价标准是获得定量测量方法正确度评价正确结论的基础。行业标准的制定有助于临床实验室建立规范的评价定量测量方法正确度的“方法学比较”方法并获得可靠的评价结论。     

临床检验结果量值溯源存在的问题与思考

量值溯源是近年临床检验领域的研究热点之一。本文从量值溯源及相关术语的定义、量值溯源方法、存在的问题及应如何解决四方面进行阐述,旨在帮助读者了解现阶段各类临床检验指标特别是临床生化检验指标量值溯源的情况,建立适合自己实验室临床检验结果量值溯源的方法。     

重组腺病毒pAd/Pri-miR-21可促进HeLa细胞和树突状细胞及Raw264.7细胞增殖

<正>microRNA在肿瘤细胞的发生、发展过程中均发挥着重要作用,包括控制其增殖与凋亡[1-2]。microRNA-21(miR-21)是具有自主转录单位的微小RNA[3],已有研究表明肿瘤组织miR-21的高表达与疾病的预后呈负相关[4]。为深入发掘miR-21其他的靶基因及其生物学作用,前期的研究中我们构建了可高表达miR-21小分子的重组腺病毒载体[5],本研     

胆碱酯酶德国参考方法基础性能研究

目的：研究胆碱酯酶德国参考方法性能,并对其进行确认试验和基础性能研究。方法采用混合人血清为基质,制备具有良好稳定性和互通性的不同浓度血清标本,按德国参考方法配制试剂,并在日立全自动生化分析仪7170A上进行精密度试验和线性分析试验。结果精密度试验低值血清标本变异系数（CV）为0．83％,高值血清标本CV为1．07％,两种浓度标本所有测量结果均落在各自均值±3％范围内;线性分析试验直线回归函数方程为Y＝2659X＋4435,r^2＝0．998。结论胆碱酯酶德国参考方法性能良好,可用于全自动生化分析仪胆碱酯酶试剂盒的研制及作为对胆碱酯酶参考方法研究开发的基础。     

胆碱酯酶测量系统不精密度与线性范围评价

目的观察胆碱酯酶(ChE)检测系统的不精密度、线性范围与ChE试剂盒说明书范围是否一致。方法收集患者血清标本,制备活性水平分别为2 673、7 345、12 645 U/L的标本组1及活性水平分别为845、14 004 U/L的标本组2。以标本组1为不精密度评价标本,优选Roche(A)、迈瑞(B)、九强(C)、利德曼(D)、威特曼(E)、夸克(F)公司ChE试剂盒,分别与日立7170A全自动生化分析仪组成检测系统,按EP15-A2文件评价各检测系统测量ChE的不精密度。以标本组2按比例配制活性水平分别为845、1 785、2 725、3 665、4 605、5 545、6 485、7 425、8 364、9 304、10 244、11 184、12 124、13 064、14 004 U/L的标本组3,按EP6-A文件评价A~F检测系统的线性范围。结果 A~F检测系统在重复性条件下测量低、中、高活性水平标本的变异系数(CV)分别是1.34%、0.88%、0.50%、0.89%、1.21%、1.14%;0.98%、0.44%、0.63%、0.77%、1.03%、0.87%;0.78%、0.43%、0.68%、0.73%、0.84%、0.96%。在实验室内复现性条件下测量相同标本的CV分别是1.61%、1.25%、0.86%、1.06%、1.32%、1.29%;1.09%、0.94%、0.90%、0.97%、1.15%、0.93%;1.23%、1.22%、0.84%、0.91%、1.00%、1.20%。A~F检测系统线性范围分别为1 785~13 064 U/L、1 785~9 304 U/L、1 785~9 304 U/L、1 785~14 004 U/L、1 785~10 244U/L、2 725~10 224 U/L。结论 A~F检测系统的不精密度均符合公认的临床检验技术指标(CV2.7%)。除A测量系统与厂家声称不精密度范围不符外,其他系统均符合要求。     

临床生化检验反应面法（RSM）及其常用设计方式浅析

反应面法(response surface methodology,RSM)可应用于临床生化检验方法学的开发及研究,优化检验测量程序,了解测量程序中各检验影响因子的相互作用关系,以较少的实验成本及时间,获得较好的效果,可作为传统的单因素分析法的补充。本文介绍完整的RSM实验设计流程,并总结常用实验设计方式:3k因子设计、Box-Behnken设计、中央合成设计(central composite design,CCD),进行3种设计方式实验次数的比较,为在临床生化检验科研设计中选择合适的反应面设计方式提供参考。     

实验室光强度对Doumas血清总胆红素参考方法测量结果的影响

目的探讨实验室光强度(简称"光强")对Doumas血清总胆红素参考方法测量的影响。方法收集高、中、低3个浓度水平的总胆红素新鲜混合血清样本。将样本在A~F共6种不同的实验室光强下分别放置2 h。其中,A为完全避光,即实验室避光的极限条件;B~F光强为常见的各种实验室光强。采用Doumas血清总胆红素参考测量程序测量每一浓度水平样本,每份样本重复2次。同时测量国际参考实验室外部质量评估的RELA-A样本作为正确度质控样本。以A光强下测量结果均值为基准值,计算B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移。结果低值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为-0.81%、-2.90%、-9.52%、-7.59%、-11.79%;中值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为-1.00%、-1.96%、-3.49%、-7.51%、-10.34%;高值样本B~F光强下测量结果均值与A光强下测量结果均值的相对偏移分别为+0.26%、-0.74%、-0.93%、-4.04%、-6.15%。结论光强对不同浓度的血清总胆红素样本测量均有明显影响,且影响程度不一致,在用Doumas参考测量程序进行血清总胆红素测量时,应严格避光。在B~F 5种常见实验室光强中,宜选用B"关闭普通窗帘和避光窗帘,关闭两盏日光灯"光强[(0.09~0.13)Lux]条件。     

冰冻混合人血清酶校准品的赋值

目的探讨用酶学参考实验室网络为冰冻混合人血清酶校准品赋值以获得具有互通性与溯源性的酶校准品。方法根据要求收集患者血清,按酶学校准品制备程序制备所需浓度水平的混合人血清酶校准品。由北京市临床检验中心(BCCL)组织国内6家候选酶学参考实验室组成实验室网络,用国际临床化学和检验医学联合会(IFCC)推荐的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)参考测量程序,按照BCCL拟定的赋值程序,为冰冻混合人血清酶校准品赋值。结果 6家实验室ALT、AST、GGT、CK、LDH 5项酶赋值结果分别为(112.16±1.94)、(101.37±0.37)、(175.74±1.82)、(370.92±4.48)、(309.69±1.78)U/L;室内质控变异系数(CV)分别为0.33%~1.40%、0.50%~1.24%、0.37%~1.49%、0.50%~1.30%、0.61%~1.11%;冰冻混合人血清赋值的室间CV分别为1.73%、0.36%、1.04%、1.21%、0.58%。5项酶的室间变异与同期国际参考实验室室间质评计划(RELA)的室间变异相近或比其略小。结论 BCCL组织的酶学参考实验室网络血清酶校准品赋值结果满意。     

血清总胆红素测量原理与测量结果正确度的相关性研究

目的 研究国内临床实验室常用血清总胆红素(T-Bil)测量原理与测量结果正确度的相关性.方法 优选11个国内外厂家13种T-Bil试剂盒,涉及矾酸盐氧化法(5/13)、重氮法(3/13)、化学氧化法(3/13)、酶法(2/13)4种测量原理,复现13种厂家配套系统,分别测量冰冻人血清基质T-Bil国家一级标准物质GBW09184和GBW09185 3次,计算各系统和相同测量原理的各系统测量平均值,绘制测量结果Youden图,依据WS/T 403-2012卫生行业标准判断测量结果的正确度.结果 (1)13种T-Bil厂家配套系统测量标准物质GBW09184和GBW09185的结果与标准物质认定值的偏移分别为:-6.07%、6.2 3%、5.30%、1.39%、-9.22%、9.22%、7.68%、16.74%、-4.69%、-5.61%、-12.18%、0.63%、6.58%;-5.68%、4.78%、5.46%、2.32%、-8.37%、10.01%、9.27%、17.26%、-5.53%、-4.78%、-14.2%、1.19%、9.99%.采用卫生行业标准判断只有15%(2/13)T-Bil厂家配套系统的测量结果能满足量值溯源要求.(2)矾酸盐氧化法、重氮法、化学氧化法和酶法4种测量原理厂家配套系统测量标准物质GBW09184和GBW09185的结果与标准物质认定值的平均偏移分别为:2.96%、6.94%、-2.78%、-5.74%;3.59%、6.73%、-0.90%、-6.50%.矾酸盐氧化法和化学氧化法测量原理的各系统测量结果均值能满足量值溯源要求.结论 (1)目前国内市场血清T-Bil厂家配套系统测量结果的正确度不容乐观,实验室在建立、更新T-Bil常规测量系统前应进行正确度评价.(2)T-Bil测量结果正确度与测量原理不存在因果关系.     

CRP定量检测异常在感染及肿瘤诊断中的意义

目的探讨CRP定量检测在感染及肿瘤诊断中的价值。方法用免疫沉淀法定量测定376例感染患者及295名恶性肿瘤患者（其中血液系统肿瘤123例、实体瘤172例）血液中CRP水平,以CRP〉10mg/L设为阳性。结果感染组及肿瘤组阳性率分别为87.8%,65.8%（血液系统肿瘤组及实体瘤组的阳性率分别为67.5%、64.5%）;患者的CRP定量均值分别为：感染组58.79mg/L、肿瘤组51.05mg/L,血液系统肿瘤组48.53mg/L,实体瘤组52.93mg/L。结论感染及肿瘤的CRP阳性率无显著性差异,感染患者CRP定量检测均值高于肿瘤患者,但血液系统肿瘤与实体瘤之间差别不大,CRP定量检测对恶性肿瘤及感染的诊断具有一定的意义。