CIITA反义RNA抑制MHC Ⅱ类分子表达

为探索利用CIITA(MHC eclass Ⅱ transactivator)基因反义RNA抑制MHC Ⅱ类分子表达的可能性，为CIITA的应用研究奠定基础。利用RT-PCR扩增能与CIITA cDNA第95至500bP互补的片段，并构建成pcDNA3/CIITA，重组质粒，脂质体转染法将其转入人HeLa／Raji细胞和猪PIEC／L23细胞，流式细胞术动态检测反义RNA对人／猪MHCⅡ类分子的抑制率和抑制程度。结果显示HeLa、Raji、PIEC和L23四种细胞MHC Ⅱ类分子受抑制率分别为46．7％(7／15)，40％(6／15)，46．7％(7／15)和33．3％(5／15)。典型受抑克隆细胞MHC Ⅱ类分子受抑程度高达85％，反义RNA对MHC Ⅱ类分子的抑制时间持续35-50d。CIITA反义RNA能有效抑制人／猪MHC Ⅱ类分子的表达，它在自身免疫和移植免疫中有一定的应用前景。     

GAP- 43干扰RNA表达载体的构建与鉴定

目的：构建GAP-43小干扰RNA（SiRNA）的表达载体并在大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12中验证其抑制效果。方法：利用设计软件根据GAP-43 mRNA序列没计特异性SiRNA插入序列，体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT HL1／Neo。以Lipofectamine^TM2000试剂转染GAP-43-SiRNA表达载体至PC12细胞中，以NGF诱导PCI2细胞GAP-43的表达，以免疫组化方法鉴定GAP-43-SiRNA对GAP．43表达的抑制效果。结果：DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pRNAT HL1／Neo的SiRNA插入序列完全正确，GAP-43-SiRNA表达载体转染PC12细胞后可特异性抑制NGF诱导的PC12细胞的GAP-43的表达。结论：GAP-43-SiRNA表达载体构建成功，为后期研究GAP-43在少突胶质细胞前体上表达的意义奠定了基础。     

中国汉族人HLA纯合细胞及狨猴细胞系DP基因结构分析

应用聚合酶链反应、基因克隆和末端终止技术，测定了分属ＤＲ９、ＤＲ１１和ＤＲ１２的６个中国汉族人ＨＬＡ纯合细胞ＤＰＢ１基因第二外显子的核苷酸序列。结果表明，６个纯合细胞分别带有４种等位特异性ＤＰＢ１＊０２０１２、ＤＰＢ１＊０２０２、ＤＰＢ１＊０５０１、ＤＰＢ１＊１３０１，基因结构和白种人相同，因而采用国外参考试剂和探针对中国人标本作ＤＰＢ１基因分型是可行的。同时，首次揭示了狨猴ＤＰＢ１基因第二外显子序列，该序列和人类ＤＰ基因同源性为６９．９％。     

天花粉蛋白抑制TCR介导的Jurkat T细胞蛋白酪氨酸磷酸化以及PLCγ1磷酸化

目的研究天花粉蛋白（Ｔｋ）抑制Ｔ细胞增殖的作用机理。方法以抗ＣＤ３的ＭｃＡｂ刺激ＪｕｒｋａｔＴ细胞增殖，以３Ｈ－ＴｄＲ同位素掺入法观察Ｔｋ对其抑制作用。用免疫沉淀和免疫印迹法测定胞浆蛋白酪氨酸磷酸化情况。结果Ｔｋ能够抑制ＣＤ３ＭｃＡｂ刺激的ＪｕｒｋａｔＴ细胞的增殖，并且经Ｔｋ脉冲处理后的ＪｕｒｋａｔＴ细胞对ＣＤ３ＭｃＡｂ活化作用的反应降低。深入分析后发现，在Ｔｋ作用下胞浆蛋白酪氨酸磷酸化水平降低，经ＰＬＣγ１免疫沉淀后，发现ＰＬＣγ１的磷酸化也能够被Ｔｋ作用所抑制。结论Ｔｋ对Ｔ细胞活化的抑制涉及并经由ＴＣＲ的激活信号传导，其机理与阻断胞浆蛋白酪氨酸激酶磷酸化有关     

CIITA反义RNA抑制MHCII类分子表达

为探索利用CIITA (MHCclassIItransactivator)基因反义RNA抑制MHCII类分子表达的可能性 ,为CIITA的应用研究奠定基础。利用RT PCR扩增能与CIITAcDNA第 95至 5 0 0bp互补的片段 ,并构建成pcDNA3/CIITAa 重组质粒 ,脂质体转染法将其转入人HeLa/Raji细胞和猪PIEC/L2 3细胞 ,流式细胞术动态检测反义RNA对人 /猪MHCII类分子的抑制率和抑制程度。结果显示HeLa、Raji、PIEC和L2 3四种细胞MHCII类分子受抑制率分别为 4 6 7% ( 7/ 15 ) ,4 0 % ( 6 / 15 ) ,4 6 7% ( 7/ 15 )和33 3% ( 5 / 15 )。典型受抑克隆细胞MHCII类分子受抑程度高达 85 % ,反义RNA对MHCII类分子的抑制时间持续 35～ 5 0d。CIITA反义RNA能有效抑制人 /猪MHCII类分子的表达 ,它在自身免疫和移植免疫中有一定的应用前景     

肽库在抗原表位研究中的应用

肽库分为化学合成肽库和噬菌体显示肽库,在生物学诸多方面有广泛应用。在免疫学领域已用于研究抗原抗体反应,确定各类抗原表位序列,推测自身免疫病抗原性质,预测抗原表位三维结构等方面。本文就肽库在抗原表位序列及构象研究中的应用作一综述     

单核细胞和血浆免疫调节功能的异常与病毒性心肌炎患者免疫低反应性的关系

用体外PHA 淋转试验表明病毒性心肌炎患者中,过半数(有51.2％)呈现明显低反应性,进而逐项分析淋转中各要素,发现除部分重症病例淋巴细胞功能有改变外,血浆和粘附性单核细胞免疫调节功能异常是造成低反应性的主要原因。同时部分非低反应患者也可表现血浆和粘附细胞的异常,以致整个免疫反应异常者的比例升至68.3％(对照7.5％)。这一异常与严重心电图改变及临床症状相一致,但异常者中柯萨奇B组病毒中和抗体阳性率却远低于反应正常的患者。此外,发现体外淋转低反应性可以区分为格局不同的三种类型,这除了涉及淋巴细胞以外,主要与粘附性单核细胞调节异常的不同表现有关,其中包括辅佐功能不良和明显的免疫抑制。     

酵母双杂交文库筛选及N型钙离子通道与BART相互作用的初步分析

目的应用酵母双杂交技术筛选N型钙离子通道相关蛋白,并对候选蛋白BART(binder of arltwo)进行初步分析。方法用N型钙离子通道α1亚基C端630个氨基酸残基肽段(Calcium channel630a-mino acids,CaCh630)作为探针,运用酵母双杂交技术筛选出与之相互作用的基因。通过PCR扩增并克隆候选基因BART,然后分别构建带有红色荧光蛋白标签的表达载体pDsRed-BART和带绿色荧光蛋白标签的pEGFP-CaCh630,共转染海马神经元后,用激光共聚焦扫描显微镜观察这两个外源蛋白在细胞中的定位情况。结果应用酵母双杂交技术筛选出6个相关基因,体外共转染试验发现BART和CaCh630分子在海马神经元内有共定位现象,进一步证明其可能存在相互作用。结论BART可能在维持钙离子通道细胞骨架中定位起重要作用。     

嗅神经鞘细胞及其在脊髓损伤中的应用前景

成年中枢神经系统(central nerve system，CNS)损伤后，由于内部微环境不适合，神经元轴突往往不能再生，而成年嗅觉系统中嗅感觉神经细胞却终生具有增殖、更新能力，新生成的轴突能长入嗅球并建立功能联系。研究发现，嗅觉系统这种独特的特点可能与一种特殊的大胶质细胞——嗅神经鞘细胞有关。     

他克莫司的促神经再生作用

目的 综述近年来免疫抑制剂他克莫司在神经再生方面的作用.方法 对近年国内外相关文献进行分析和归纳.结果 他克莫司的促神经再生作用是通过与FK506结合蛋白FKBP52的结合实现的.大鼠的体内实验表明,它对脊髓的运动和感觉神经元、少突胶质细胞都具有保护作用,同时可以促进中枢和外周神经元轴突的再生.结论 在采用同种异体(神经或细胞)移植治疗脊髓损伤时,可以综合发挥其对宿主的免疫抑制和促神经再生的双重优点,具有良好的应用前景.