补肾富钙中药对大鼠卵巢辐射损伤所致骨质疏松形态

目的 探讨补肾富钙中药对大鼠卵巢辐射损伤所致骨质疏松形态计量学的影响.方法 40只SD大鼠随机分为四组(n=10),分别为假手术组(灌服1%纤维素90 d)、模型组(以50 Gy γ射线局部照射大鼠卵巢建立卵巢辐射损伤模型,1%纤维素灌服90 d)、尼尔雌醇组(造模后给予尼尔雌醇灌胃90 d)和补肾富钙中药组(造模后给予补肾富钙中药灌胃90 d).各组大鼠于处死前第14天和第4天分别腹腔注射盐酸四环素(30 mg/kg)进行标记,处死后取右侧股骨组织和L4腰椎组织分别进行骨组织形态计量和扫描电镜观察.结果 与模型组比较,补肾富钙中药组和尼尔雌醇组的骨小梁体积显著增加,骨吸收表面减少;尼尔雌醇组的骨形成表面和矿化沉积率下降,但在补肾富钙中药组则无显著变化.扫描电镜观察显示,模型组骨小梁变细、中断、排列稀疏,而补肾富钙中药组和尼尔雌醇组上述变化较轻微.结论 补肾富钙中药可有效预防卵巢辐射损伤诱发的骨质疏松.     

"更年春"方对大鼠成骨细胞增殖与分化及矿化的影响

目的观察中药复方“更年春”药物血清对新生大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法用酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,加入含不同药物浓度的更年春药物血清条件培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照药物。MTT法测定细胞增殖率,对硝基苯酚法(PNPP)检测碱性磷酸酶(ALP)活性以观察成骨细胞活性,茜素红染色观察矿化结节个数。结果与生理盐水组相比,更年春组成骨细胞MTT值(OD570)及OD405值明显增加(P均<0.01),更年春高剂量组矿化结节数显著高于生理盐水组(P<0.01)。与雌激素组相比,中药高剂量组成骨细胞的OD570值(P<0.01)、OD405值(P<0.05)及矿化结节数均增高(P<0.05)。结论更年春在体外对成骨细胞的增殖、分化和矿化有明显促进作用,更年春高剂量明显优于雌激素,提示更年春防治骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞活性有关。     

更年春方对骨代谢相关基因表达的影响

目的:观察更年春方对去卵巢(OVX)大鼠骨髓微环境中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA表达的影响,探讨更年春抗绝经后骨质疏松骨丢失的可能分子机制。方法:取健康10月龄雌性SD大鼠42只,随机平均分为假手术组(S),生理盐水组(N)、尼尔雌醇组(E)、更年春高剂量组(H)、更年春中剂量组(M)和更年春低剂量组(L)。假手术组仅切除卵巢周围少许脂肪,其余5组均切除卵巢。灌药3d后取腰椎冲洗骨髓提取总RNA,实时定量PCR法检测上述因子mRNA的表达情况。结果:更年春高剂量组可上调OVX大鼠骨组织中OPG的mRNA的表达,下调M-CSF的mRNA的表达,使RANKL/OPG值下降。结论:更年春方抗绝经后骨质疏松骨丢失的分子机制可能与其调控OPG和M-CSF的表达,影响RANKL/OPG值有关。     

重组人甲状旁腺激素(1-34)对体外培养成骨细胞骨形成的作用

目的 体外观察重组人甲状旁腺激素[recombinant human parathyroid hormone（1-34）,rhPTH（1-34）]对成骨细胞骨形成的刺激作用。方法采用酶消化法分离获得大鼠成骨细胞,间隙加药方法给予rhPTH（1-34）,观察药物对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。结果 10^-12～10^-8mol／L浓度对成骨细胞的增殖、分化和矿化功能均显示刺激作用。10^-11～10^-8mol／L浓度组的MTT、ALP的A值及矿化结节形态计量结果与对照组比较,具有显著性增加（P〈0．05）,增加率以10^-9mol／L浓度组为最高,并呈剂量一效应关系。结论 rhPTH（1-34）对体外培养成骨细胞的增殖、分化和矿化功能具有明显促进作用。     

兔关节软骨细胞的分离培养及生物学特征

目的 探讨兔关节软骨细胞分离培养的方法和生物学特性。方法 从4周龄新西兰白兔关节分离培养软骨细胞,倒置显微镜下观察原代及传代培养的细胞形态学变化,并计数绘制生长曲线。测定细胞冻存复苏后的存活率。用甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学法了解葡萄糖胺多糖（GAGs）,Ⅱ型胶原的合成情况并鉴定细胞。结果 成功建立体外培养兔关节软骨细胞的实验方法。原代培养的软骨细胞呈多角形,传代3次后出现反分化。形态学、免疫化学染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定,冷冻复苏存活率为92％。结论 本文建立的体外培养关节软骨细胞的方法简单可行。体外培养的兔软骨细胞表型能保持3代稳定,具有良好的生物学活性,可用于实验研究,可经深低温冷冻保存。     

去势大鼠血清ALP动态及骨髓细胞骨形成相关基因表达研究

目的 了解雌性大鼠切卵去势后血清碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)变化规律及骨髓细胞的骨形成相关基因ALP、骨钙素(Bone Gla-containing protein,BGP)及核结合因子al(core bindingfactor 1,Cbf al)的mRNA表达。方法 6月龄SD雌性大鼠18只,随机分为假切卵(Sham)和切卵(OVX)组。其中每组5只大鼠于术后起每隔10d断尾采血一次至90d,用对-硝基苯磷酸盐(P-NPP)法测量血清ALP;每组4只大鼠于术后10d处死获取骨标本,用RT-PCR方法检测骨髓细胞中ALP、BGP、Cbfal mRNA表达改变。结果 OVX组大鼠血清ALP水平,10d时已较Sham组显著升高(P<0.05, 40.0％),20d时升高呈峰值(P<0.05, 63.6％),30d时则显著性降低(P<0.05,-26.1％),40d起呈回升,与Sham组比较40、50、60、70、80及90d时的ALP分别增加26.2％(P<0.05)、18.1％、16.9％、68.5％(P<0.05)、42.6％(P<0.05)与45.9(P<0.05);切卵后10d骨髓细胞中ALP、BGP、Cbfa lmRNA的表达OVX组明显高于Sham对照组(P<0.05)。结论 大鼠去势后早期血清ALP呈先增高后下降的波动性变化,以后回升呈不同程度增高;骨髓细胞的ALP,BGP和Cbf almRNA表达呈增高改变。     

富钙补肾中药对卵巢摘除大鼠骨质疏松的防治作用

目的研究补肾中药何首乌、紫河车、珍珠对骨质疏松的改善作用。方法应用卵巢摘除方法，以骨量、骨抗弯力和骨病理形态计量学为指标，制作大鼠骨质疏松模型。结果骨钙含量明显高于不用药组，股骨骨密度和抗弯力增加，椎体和胫骨骨小梁面积明显增加。结论补肾中药何首乌、紫河车、珍珠对雌激素不足造成的骨质疏松有较好防治作用。     

破骨细胞体外培养生存数的观察与鳗鱼降钙素的影响

应用改良的Ｆｅｎｔｏｎ方法由出生２４小时内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠分离破骨细胞（ＯＣ）培养于盖玻片与骨片上，并应用改良的ＶａｎＤｅＷｉｊｎｇａｅｒｔ和Ｍｏｓｔａｆａ方法对培养在骨片上的ＯＣ进行ＴＲＡＰ染色，观察体外培养ＯＣ的形态与生存时间。培养于骨片上的ＯＣ生存时间可长达２４０小时。１×１０（－９）ｍｏｌ／Ｌ鳗鱼降钙素能明显减少体外培养的多核ＯＣ生存数，但对单核前ＯＣ数没有明显影响     

大鼠破骨细胞数量和功能的增龄性变化

目的　探讨大鼠破骨细胞生物学功能的增龄变化规律。　方法　SD大鼠以月龄划分为 7组 :<2 4h及 1、3、7、12、16和 18月龄组 ,由大鼠腰椎椎体分离破骨细胞体外培养 ,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色、吸收陷窝定量分析技术和RT PCR等手段 ,比较各组大鼠破骨细胞的数量、骨吸收功能和功能酶转录水平的变化。　结果　多核破骨细胞数量呈双峰样改变 ,峰值分别为 3月龄的113～ 132个 /孔和 16月龄的 10 6～ 14 7个 /孔 ;细胞丰度于 3月龄后开始减低 ,16月龄有小幅反弹 ,由12月龄的 8%～ 9%升高至 12 %～ 35 % ;融合指数与月龄呈正相关 (r =0 73～ 0 85 ,P <0 0 5 ) ;吸收陷窝面积 3月龄后持续缩小 ;组织蛋白酶K、质子泵 116亚基mRNA水平由 3月龄峰值缓慢下调 ,基质金属蛋白酶 9转录水平维持恒定。　结论　破骨细胞数量和功能随增龄呈现阶段性特征 ,骨吸收存在 3、16月龄的 2次活跃 ,第 2次激活的特点和机制有待进一步研究。