人表皮干细胞在不同培养基中生长状态的观察及其生物学性状的初步探讨

目的筛选合适的保持人表皮干细胞特性的体外培养基,并观察其生物学性状. 方法按不同培养基分组,配制FAD培养基和FAD加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的培养基,即FAD、FAD1、FAD2、FAD3等组,以及角质化细胞专用无血清培养基(keratinocyte-SFM,K-SFM),同时应用同一个体的成纤维细胞经丝裂霉素处理后作滋养层,培养人表皮干细胞.通过细胞生长曲线及MTT检测,观察细胞的生长状态.在体外培养扩增表皮干细胞后,利用透射电镜、流式细胞仪分析、BrdU检测,观察细胞的生长状态;结合流式细胞仪分析,观察细胞周期的变化. 结果人表皮干细胞在FAD组中生长良好,加入bFGF可进一步改善细胞的生长状态.扩增后细胞检测提示,人表皮干细胞在体外培养过程中呈典型的克隆性生长,生长周期长.流式细胞仪检测表明,人表皮干细胞80.2%处于G0/G1期;透射电镜观察见其细胞器少,细胞核浆比大. 结论加入bFGF的FAD培养基并同时利用滋养层,更适合人表皮干细胞的生长,在稳定状态下是一种处于静止期的幼稚细胞.     

核桃楸青果皮的生药鉴别

核桃楸青果皮系胡桃科植物核桃楸未成熟果实的果皮。 8月上旬采摘果实 ,剥下果皮 ,晒干或阴干。在古今医药书中有记载。1　性味功能种仁 :甘 ,温。敛肺定喘 ,温肾润肠。青果 :辛 ,平。有毒 ,止痛。树皮 :苦 ,辛 ,平。清热解毒。2　主治用法种仁 :体质虚弱 ,肺虚咳嗽 ,肾虚腰痛     

构建一种新型牙周膜牙囊复合细胞膜片的研究

目的：拟构建一种牙周膜牙囊复合细胞膜片,并比较其与单一膜片的性能差异,以期寻找一种更加优越的牙周缺损修复材料。方法：将第三代牙周膜干细胞及牙囊干细胞直接混合共同培养,将牙周膜牙囊混合细胞、牙周膜干细胞及牙囊干细胞分别制备成细胞膜片,应用HE染色,扫描电镜比较三种膜片形态学差异,应用茜素红染色,RT—PCR比较三种膜片成骨能力差异。结果：扫描电镜结果显示,牙囊牙周膜混合细胞膜片分泌更多的细胞外基质。HE染色结果也显示牙囊牙周膜混合细胞膜片细胞层数更多,基质分泌量更大。同时,牙囊牙周膜混合细胞膜片AIJP、Runx2、OCN表达显著高于单一细胞膜片。成骨诱导21天后,茜素红染色结果显示,与单一细胞膜片相比,牙囊牙周膜混合细胞膜片染色更深。结论：牙周膜牙囊复合细胞膜片较单一细胞膜片,细胞层数更多,基质分泌量更大,骨向分化能力更强,为牙周再生提供了新的思路。     

载rhBMP2凝胶微球控释系统的设计与合成实验

目的:设计与合成rhBMP2新型控释载体,初步探讨其载药及降解性能。方法:用右旋糖酐 (dextran,dex)与甲基丙烯酸缩水甘油酯(glycidylmethacrylate,GMA)合成甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐 (dex GMA),测定该凝胶微球溶胀系数Q,并对其载药、降解性能进行初步研究。结果:dex GMA在一定条件下可以成球,粒径与制备工艺密切相关;该凝胶微球溶胀参数 10. 9±5. 3;载药性能良好,在葡聚糖酶的作用下 20~40d内可以完全降解。结论:右旋糖酐基凝胶微球具有良好的溶胀性能,可生物降解,其粒径可控,作为生长因子载体,有望达到控释给药的目的,其制备工艺及理化性能有待进一步研究。     

雌激素剂量依赖性促进小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景：绝经后骨质疏松的发病与雌激素水平的下降关系密切。 目的：观察不同浓度雌激素对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响,及其与微小RNA-26a的关系。 方法：取小鼠股骨与胫骨骨髓,全骨髓贴壁法获得并纯化骨髓间充质干细胞,分别以0,10-10,10-9,10-8,10-7,10-6 mol/L的雌二醇对其成骨诱导过程进行干预。 结果与结论：雌二醇对骨髓间充质干细胞的增殖能力影响不明显,但可明显提高其成骨能力;同时雌二醇可促进骨髓间充质干细胞成骨基因RUNX2,OCN mRNA及RUNX2,SP7蛋白的表达,以10-9 mol/L雌二醇的作用最明显,但10-9 mol/L雌二醇促进微小RNA-26a mRNA表达的能力最弱。说明雌二醇可剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,微小RNA-26a可能在此过程中发挥作用。关键词：微小RNA-26a;雌激素;骨髓间充质干细胞;成骨分化;小鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.003     

Beagle犬的埋植型与非埋植型种植义齿骨组织界面改建的组织形态学定量测定

目的：研究对比埋植型与非埋植型种植体在义齿修复受载后，种植体-骨组织界面动态变化的异同、方法：选用纯系动物Beagk犬8只，在其下颌分别植入埋植型与非埋植型种植体，采用固定金属全冠行种植义齿修复，不同程期处死动物。采用组织形态学定量测定的方法．对埋植型与非埋植型种植义齿种植体-骨界面改建过程进行动态观察，比较两者骨界面改建的异同，从定量的角度分析其变化的异同、结果：埋植型种植义齿修复受载后2、8、12周，骨结合率略高于非埋植型种植义齿，而4周则略低于非埋植型种植义齿，但它们之间无统计学差异。结论：非埋植型种植体尽管植入后基桩在整个愈合过程中承受了一定的咬合力，但它能与埋植型种植体一样获得良好的骨结合。埋植型和非埋植型种植义齿受载后，其界面的改建之间无显著差异。     

转染突变的BMPsII型受体使NIH3T3细胞的增殖活性降低

目的 :探讨转染BMPsII型突变受体对NIH3T3细胞生物学行为的影响。方法 :用携带BMPsII型突变受体的cDNA的真核表达载体转染NIH3T3细胞 ,对NIH3T3细胞进行生长曲线、MTT比色、流式细胞仪分析、BrdU检测。结果 :转染细胞的增殖活性和DNA合成下降。结论 :转染的突变受体使被转染细胞的增殖活性降低     

口腔鳞状细胞癌中RhoA的表达及作用

目的探讨口腔鳞状细胞癌组织及其转移灶、癌旁组织、增生鳞状上皮和正常口腔黏膜中RhoA的表达及其意义。方法采用免疫组化检测40例口腔鳞状细胞癌,RT-PCR技术分析口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织、口腔鳞状细胞癌转移灶、鳞状上皮增生和正常口腔黏膜组织中RhoA的表达情况。结果RhoA在非癌组织均不表达或弱表达,40例口腔鳞癌中25例表达RhoA,阳性率为62.50%;两者之间具有显著差异(P<0.05)。低分化鳞癌中RhoA的阳性率为66.67%,中、高分化鳞癌中RhoA的阳性率为60.71%;两者之间有统计学差异(P<0.05)。16例有淋巴结转移的鳞癌组织中13例表达RhoA,阳性率为81.25%,24例无淋巴结转移的鳞癌组织中12例表达RhoA,阳性率为50%;两者之间有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR检测RhoA mRNA的表达水平,鳞癌组织中RhoA mRNA光密度相对值明显高于癌旁组织、增生鳞状上皮和正常口腔黏膜组织(P<0.01),低于转移灶(P<0.05)。结论RhoA的表达与鳞状细胞癌分化程度、转移程度有关,有望作为鳞状细胞癌预后和转移的参考指标。     

牙周组织工程研究进展

牙周骨移植、引导组织再生 ( guidedtissueregeneration ,GTR)为牙周病治疗和牙周缺损修复带来新的希望 ,但在恢复牙周组织的生理结构和功能上还远未达到所期望的目标。组织工程学是近年来发展起来的一门新兴边缘学科 ,其基本方法是将体外培养的高浓度、功能相关的活细胞种植于具有良好生物相容性和生物降解性的细胞外基质材料上 ,经过一段时间的培养 ,将这种细胞与生物材料复合体植入机体病损部位以形成新的具有其原来特殊功能和形态的相应组织和器官 ,达到修复创伤和重建功能的目的。将组织工程技术引入牙周组织再生治疗 ,为牙周病的治…     

氯化锂对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin通路激活剂—氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:低密度多克隆法分离培养人PDLSCs,分别与不同浓度的LiCl(5、10、20、40 mmol/L)共同培养。分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙化结节形成量以及Col-1、OCN、Runx-2等成骨相关基因的表达水平。结果:LiCl无促细胞增殖作用,且高浓度LiCl能明显抑制细胞的增殖。浓度为5 mmol/L的LiCl可促进hP-DLSCs成骨性分化,表现为提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调Col-1、OCN、Runx-2的mRNA表达水平,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而高浓度(≥10 mmol/L)LiCl则对成骨分化具有抑制作用。结论:终浓度为5 mmol/L的LiCl可明显促进hPDLSCs的成骨分化。