复合可降解基质膜片制备及血管内皮细胞在其吸附生长的实验研究

目的　制备几种复合可降解基质膜片 ,观察血管内皮细胞在其上的生长情况。方法　用胶原酶消化法分离牛主动脉血管内皮细胞 (VEC) ,另采用两步盐析法提取牛骨 型胶原。将交联胶原包埋处理聚羟基乙酸 (PGA)、聚乳酸 (PL A)及聚β羟基丁酸 (PHB)形成可降解基质材料膜片 ,并接种牛 VEC,采用 MTT法比较 VEC在几种可降解基质材料膜片的生长情况。结果　胶原、PGA/胶原、PL A/胶原膜质地均匀柔韧 ,固定成形 ,具有一定弹性和吸水性 ;MTT比色实验表明 VEC在胶原、PGA/胶原、PL A/胶原上均生长良好 ,优于 PHB/胶原组。尤以 PGA/胶原所形成的基质材料固定成形 ,弹性和韧性好 ,VEC在其上贴附生长良好。结论　通过生物材料与人工可降解材料有机结合 ,PGA/胶原物理性能互补 ,是组织工程再造血管较理想的基质材料之一。     

外源性NO对成纤维细胞影响的研究

目的:探讨一氧化氮(Nitric Oxide,NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对成纤维细胞形态及凋亡的影响。方法:将NO供体SNP制成5个不同浓度(100、200、300、400、500)μmol/L作用于成纤维细胞,观察不同时间的细胞形态变化及细胞凋亡。结果:随SNP作用浓度增高及时间延长,成纤维细胞形态呈逐渐老化状态,且数量明显减少,呈显著性负相关(y=28.943-0.858x)。成纤维细胞凋亡率300和500μmol/L组(25.67±0.36和56.38±2.18)%明显高于空白对照组(1.35±0.26)%,具有显著性差异(P<0.001)。结论:NO对成纤维细胞具有时间浓度依赖效应,可致细胞数量减少、形态老化及凋亡增加,为瘢痕防治提供了一种新的理论思路。     

荧光皮肤血流仪在兔皮瓣血循环

目的 探索荧光皮肤血流仪在兔皮瓣血循环判断中的应用规律. 方法 以新西兰兔为实验动物,于背部设计一16cm×4cm任意型皮瓣,切取、剥离皮瓣后原位缝回.术后荧光素钠4mg/kg耳缘静脉注射,20min后用荧光皮肤血流仪依次测定皮瓣不同部位荧光强度,计算荧光强度指数(DFI).1周后观察皮瓣成活情况,测算皮瓣成活与坏死面积,分析DFI数值与组织活力间的关系. 结果 1周后皮瓣远端发生坏死,近端成活良好,平均坏死面积54%,平均成活面积46%;成活区域DFI平均值为66%,坏死区域DFI平均值为16%,二者比较有统计学意义(n=7,P<0.01).统计分析显示,DFI≤25%时,组织可能发生坏死. 结论 荧光皮肤血流仪DFI与兔皮瓣血循环灌注有良好的对应关系,通过荧光皮肤血流仪可以对皮瓣组织活力进行较为准确的判断.     

血管内皮细胞对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：观察人脐静脉血管内皮细胞对增生性瘢痕成纤维细胞增殖活性的影响。方法：收集培养的人脐静脉血管内皮细胞上清条件培养液，加入培养的增生性瘢痕成纤维细胞之中，采用MTT法检测增生性瘢痕成纤维细胞增殖率，利用流式细胞仪分析细胞周期。结果：加入内皮细胞上清液的增生性瘢痕成纤维细胞增殖比对照组明显增加，且S期比例增高。结论：在瘢痕形成的过程中，内皮细胞被激活，激活的内皮细胞可能分泌某些活性物质，促进成纤维细胞增殖，刺激其进入细胞DNA合成期S期。     

The effect of transforming growth factor—β1 on expression of SMAD3 and SMAD7 in keloid—derived fibroblasts

AIM:To study the expression of SMAD3 and SMAD7 of transforming growth factor-β1(TGF-β1)on keloid-derived fibroblasta.METHODS:The expression of SMAD3(at 1,2,4,24,48h) and SMAD7(at 0.51,1.5,2,4,24h) were added to the monolayer culture system.RESULTS:The level of SMAD3 were down regulated at 24h and the SMAD7 were maximum up regulated at 4h when TGF-β1 were used .CONCLUSION:TGF-β1 may down regulate the expression of SMAD3,but up regulate that of SMAD7.     

转化生长因子—β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的 研究转化生长因子—β1(TGF—β1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)Smad3，7mRNA表达的调控机制。方法 用放线菌酮(CHX)种放线菌素D预处理KFB，以分别阻断KFB内源性蛋白质的合成及mRNA合成。采用逆转录PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3，7mRNA表达水平。结果 经CHX预处理后，KFB的Smad3 mRNA表达轻度上调，并完全抑制了TGF—β1对KFB Smad3 mRNA的下调作用，而CHX预处理对KFB的Smad7 mRNA表达及TGF—β1上调Smad7 mRNA的作压并无明显影响。经放线菌素D预处理后，随TGF—β1作用时间延长，KFB的Smad3 mRNA表达水平无明显下降。结论 TGF—β1对KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与；但对Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与，KFB细胞中的Smad7可能也是活化的Smads的直接靶基因。     

皮肤软组织扩张修复头面部外伤性缺损的早期应用

目的:常规应用植皮或单纯的皮瓣修复头面部皮肤软组织缺损从美学角度讲存在一定的缺点.总结皮肤软组织扩张器在头面部外伤性缺损早期修复中的应用情况.方法:①对象:选择2005-09/2007-10在解放军第四军医大学西京医院整形外科住院的部分外伤性头面部皮肤软组织缺损患者15例.其中男12例,女3例;年龄5～51岁.面部缺损4例,头皮缺损7例,面部并头皮缺损4例,缺损面积3 cm×5 cm～ 7 cm×11 cm.②方法:积极改善患者全身情况,加强局部创面处理,待全身情况稳定、创面肉芽组织新鲜的情况下,行清创、刃厚植皮术,覆盖除骨外露以外所有创面.同时或延期于缺损周围正常组织下埋置一至数枚容量不等(80～450 mL)的扩张器.皮片成活并稳定后,开始扩张器注水,约两三个月注水完成后行扩张器二期术,切除骨外露周围不稳定的瘢痕组织(包括早期植皮部分),用设计的扩张皮瓣覆盖缺损,完成修复.结果:1例头皮扩张器在扩张后期出现了外露,及时进行二期手术修复缺损.所有患者头面部皮肤软组织缺损在短期内均得到了有效修复,2例患者在二期术后出现了轻度的器官移位,术后半年症状消失,所有病例无瘢痕性秃发发生.结论:皮肤扩张可用于头面部外伤性缺损的早期修复,合理的选择、正确的应用可以获得满意的效果.     

大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因

目的 探讨大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.方法 实验分为3组,每组受者均为8只,以股动、静脉为蒂进行下腹部皮瓣移植.A组:以BrownNorway(BN)大鼠为供者,Lewis(LEW)大鼠为受者,移植术后2周内使用免疫抑制剂西罗莫司4mg·kg-1·d-1腹腔注射;B组:以BN大鼠为供者,LEW大鼠为受者,移植后不使用任何药物;C组:为LEW大鼠自体移植对照组,术后不使用任何药物.术后观察各组移植物的大体变化,并取移植物进行病理学检查,比较各组的病理学变化.结果 A组自术后17 d起,陆续出现皮瓣红斑,表皮脱落,真皮及皮下组织则最后坏死;B组受者排斥反应进展迅速,表皮不出现脱落现象,皮瓣直接完全发黑、坏死.C组移植物长期存活,未见排斥反应征象.A、B两组从出现排斥反应迹象到组织完全坏死的时间分别为(16.7±3.0)d和(5.4±1.1)d.病理检查显示:A组表皮组织首先被排斥,真皮和皮下组织由于大量淋巴细胞浸润而坏死.B组则为移植皮瓣真皮下血管网内皮细胞坏死,血管栓塞,皮肤内细胞缺血而坏死.结论 微血管栓塞是大鼠异体皮瓣移植后不应用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.     

谈异体颜面移植的一些关键问题

从2006年至2009年,包括我们的论文,《柳叶刀》（Lancet）杂志上共有4篇有关异体颜面移植的论著发表。对此4篇论文进行研读后,结合我们的经验,提出目前异体颜面移植临床开展应用面临网个最主要的关键问题,即供受体的选择、外科技术、心理问题及免疫治疗问题。以此为观点,我们撰写的Comment于2009年7月14日发表在《Lancet》杂志上。     

bFGF微球对大鼠背部任意皮瓣存活的影响

目的：研究局部注射碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）复合明胶微球对SD大鼠背部任意皮瓣存活的影响。方法：采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF明胶缓释微球,将其注射于大鼠背部任意皮瓣,24只SD大鼠随机分为bFGF微球组（A组）、bFGF治疗组（B组）和对照组（C组）,术后7天分别进行皮瓣存活率、新生血管计数的检测。结果：术后7天皮瓣的存活率分别为（65.42±2.19）%,（54.38±4.52）%,（45.43±2.71）%,微球组存活率显著高于对照组（P〈0.05）且存活质量最好;皮瓣内新生血管计数分别为28.75±2.36,21.28±3.82,18.68±5.44,具有显著性差异。结论：bFGF缓释微球可以促进缺血皮瓣的血管新生,提高皮瓣存活率。