BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的　构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法　用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果　用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论　成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 ,为进一步研究MHC分子在移植免疫中的作用奠定了基础     

Tju103和CTLA4-Ig联合诱导主要组织相容复合物半相合小鼠骨髓移植耐受

目的观察吲哚亚甲基异烟腙(Tju103)和细胞毒性T淋巴细胞相关性抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)联合应用，对主要组织相容复合物(MHC)半相合小鼠骨髓移植的植入以及移植后移植物抗宿主病(GVHD)、移植物抗白血病(GVL)和抗感染的影响；探索一条既能降低GVHD能保留GVL和抗感染能力的移植途径。方法体外以受者(正常CB6F1鼠，H-2^bd)抗原为特异性免疫耐受诱导原，MHC半相合的供者(C57BL／6鼠，H-2^b)T淋巴细胞经和Tju103、CTLA4-Ig共育后，与供者骨髓细胞混合输入经预处理的受者体内。观察Tju103和CTLA4-Ig联合作用对移植后造血重建、GVHD、GVL和抗感染的影响。结果单纯照射组(A组)：全部(10只)白血病小鼠于照射后11d内死于造血功能衰竭，大部分(8只)死于照射后4～7d。环磷酰胺(CTX)治疗组(B组)：全部(10只)小鼠于接种白血病细胞后16～23d(移植后11～18d)死于白血病，但CTX治疗延长了白血病小鼠存活期。单纯移植组(C组)：全部(10只)小鼠于移植后21d内死亡，均死于GVHD。CsA预防组(D组)：4只小鼠于移植后8～22d内死亡，其中1只死于白血病，2只死于感染，1只死于GVHD；6只存活超过30d。Tju103处理组(E组)：4只小鼠于移植后9～26d内死亡，其中1只死于白血病，1只死于感染，2只死于GVHD；6只存活超过30d。CTLA4-Ig处理组(F组)：3只小鼠于移植后14～23d内死亡，其中1只死于感染，2只死于GVHD；7只存活超过30d。Tju103 CTLA4-Ig处理组(G组)：仅1只小鼠于移植后第19d死于GVHD；9只存活超过30d。结论CsA、Tju103或CTLA4-Ig单独处理均可以明显延长小鼠移植后生存期，降低GVHD的发生和程度；CTLA4-Ig有抗感染和GVL作用，而Tju103和CsA则没有此作用；CTLA4-Ig和Tju103两者联合处理供者T淋巴细胞对延长受者生存期和降低GVHD作用更明显。     

MHC半相合骨髓移植后慢性GVHD小鼠模型的建立

目的建立MHC半相合异基因骨髓移植(allo-BMT)后慢性GVHD小鼠模型。方法以(Balb/c×C57BL/6)F1H-2d/b(CB6F1)雌性小鼠为受者,预处理条件为不同剂量的全身照射(TBI,60Co照射),输注MHC半相合Balb/cH-2d雄性小鼠骨髓细胞与不同数量脾细胞,观察移植后小鼠体质量变化,靶器官病理变化,血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体。结果在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠至实验结束(移植后100d)全部存活,体质量减轻与对照组和其它实验组相比差异显著(P<0.05)。血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体较对照组和其它实验组显著升高(P<0.05)。该组皮肤、肝脏等病理改变明显。结论在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠成功诱导出半相合allo-BMT慢性GVHD,为进一步研究慢性GVHD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

γ射线照射预防供者淋巴细胞输注相关移植物抗宿主病的实验研究

作者通过观察６０Ｃｏγ射线照射对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖活性的影响,借助于动物模型证实了γ射线照射对供者淋巴细胞输注（ＤＬＩ）相关ＧＶＨＤ的预防作用,试图探索γ射线照射能够最大程度地去除Ｔ细胞增殖活性,避免移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）发生而不损害ＤＬＩ抗白血病作用的适宜剂量和方法。材料和方法：（１）动物：近交系Ｂａｌｂ／Ｃ（Ｈ２ｄ）,８～９周龄及出生４８～７２小时的６１５Ｈ２Ｋ／Ｂａｌｂ／ＣＨ－２ｄＦ１小鼠。（２）ＧＶＨＤ动物模型：参照孟玉茹等（中华血液学杂志,１９９３,１４：５６４）方法,稍作改…     

人类G6PD cDNA逆转录病毒载体构建及表达

本实验将人类正常G6PD cDNA与逆转录病毒载体pLXSN重组获得表达载体pLG6PDSN,通过脂质体介导法转染红白血病细胞系K562,G418筛选阳性克隆细胞并测G6PD表达.该表达载体的构建成功为严重G6PD缺陷症的基因治疗奠定了基础.     

基于HPLC指纹图谱和多成分定量的玄参质量评价研究

目的 建立玄参Scrophularia ningpoensis的HPLC指纹图谱及多成分定量测定方法。方法 采用HPLC法建立浙江、湖北、四川、安徽等9个省份116批玄参指纹图谱,进行相似度评价,结合聚类分析（hierarchical cluster analysis,HCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）对玄参进行化学模式识别分析。同时对8个活性成分（桃叶珊瑚苷、哈巴苷、咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸、类叶升麻苷、安格洛苷C、哈巴俄苷）进行含量测定,分析其与生境因子的相关性。结果 建立了116批玄参的指纹图谱,相似度为0.746～0.997,共标定34个共有峰。聚类分析将116批玄参分为4类,OPLS-DA分析能有效地将3个传统道地产区玄参与非道地产区玄参进行区分（Q2>0.5）。不同产地玄参中化学成分含量存在差异,与海拔、经纬度存在相关性。结论 建立的玄参HPLC指纹图谱及多成分含量分析方法稳定、可靠,结合化学识别模式可为玄参药材的产地判别及质量评价提供参考...     

异基因供者淋巴细胞输注抗白血病作用研究进展

供者淋巴细胞输注 (DL I)目前已成为骨髓移植后复发患者的重要治疗手段 ,DL I在受者体内所介导的这种抗白血病作用 ,与输入的异基因免疫活性细胞诱导的过继性免疫反应有关 ,现就这一领域的研究加以综述。1　供者淋巴细胞输注 (DL I)的临床意义自 Kolb[1 ] 1990年报告首例异基因骨髓移植 (allo- BMT)后复发慢性髓性白血病 (CML )患者 ,采用供者白细胞输注诱导再次细胞学完全缓解后 ,人们对 DL I介导的过继性免疫反应产生了极大兴趣。临床单独应用供者淋巴细胞输注诱导抗白血病作用 ,或同时结合干扰素治疗细胞遗传学甚至血液学复发的C…     

巢式聚合酶链反应对231例白血病融合基因的检测

目的:探讨巢式逆转录聚合酶链反应(巢式RT-PCR)动态检测白血病bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因在白血病诊断、治疗、预后判断的价值。方法:应用巢式PCR法对231例急慢性白血病患者bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因作检测,同时结合患者细胞形态学及临床转归予以分析。结果:94例慢性粒细胞白血病患者中,79例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为84.0%;55例急性淋巴细胞白血病患者中,20例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为36.4%;50例急性早幼粒细胞白血病患者中,29例PML/RARa融合基因阳性,阳性率为58.0%;32例急性粒细胞白血病M2患者中,9例AML/ETO融合基因阳性,阳性率为28.2%。结论:巢式PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可为白血病患者提供分子生物学的诊断依据,并可作为微小残留病的监测指标之一。     

急性髓系白血病预后相关因素研究进展

急性髓系白血病(AML)是一种具有显著异质性的血液系统恶性克隆性疾病.细胞遗传学改变很大程度上影响了患者的治疗和预后.随着生物学和计算机技术的不断发展,越来越多的预后相关因素被确认:如KIT、FLT3、NPM1和CEBPA等基因突变:微阵列技术也确认了一些与预后相关的独特的基因表达特征;microRNA的表达、单核苷酸多态性分析和DNA甲基化特征也发现了一些重要的AML预后亚型.这些新的预后相关因素的发现不仅对AML的危险度分层、预后判断、治疗指导具有重要作用,同时结合蛋白质图谱也确定了一些新的信号通路和治疗靶点,为实现个体化治疗提供了依据.在此本文将阐述一些新的与AML预后相关的基因改变.