热疗联合阿霉素对K562/AO2细胞株凋亡及Bcl-2表达的影响

目的：观察热疗联合阿霉素对耐药慢性髓系白血病细胞株K562／AO2的体外增殖抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT法）确定阿霉素的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗联合治疗，分别选择温度40，41和42℃，体外作用于K562／AO2。采用MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2表达。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果：作用48h后IC50为53μg／ml，以此为实验的工作浓度。单纯热疗60min对K562／AO2细胞有抑制作用（P〈0．01），并随温度增高而增强；单纯化疗对K562／AO2细胞也有抑制作用；各热化疗组对K562／AO2均有明显的抑制作用（P〈0．01），随着温度的增高而增强。流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2的表达，热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间差异有统计学意义（P〈0．01）；Bcl-2蛋白的表达下降，各组之间的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对K562／AO2细胞的体外抑制作用，提高肿瘤细胞的凋亡率，下调Bcl-2蛋白的表达。     

全身热疗系统治疗恶性血液病15例:加温、测温和控温技术的安全、顺应及有效性观察

目的:探讨恶性血液病患者对于全身加温治疗的耐受性,验证全身加温治疗的顺应性、安全性及有效性。方法:实验于2005-04/2005-07在南方医科大学珠江医院血液科完成。选择恶性血液病患者15例,均自愿参加观察。应用广东威尔医学科技股份有限公司开发研制的WELLRAY光子热疗智能系统,对患者进行全身加温治疗。治疗前保留导尿,外周静脉插管,联接心电监护,固定体表等温度感受器,关舱加温至直肠内温度40～41℃,保持恒温2h,同时监测多部位体表、空气、治疗床的温度变化,同时行心电监护,加温治疗前及治疗24h后行血液常规和生化等各项指标检查。于全身热疗前及治疗24h后分别应用Karnofsky(KPS)评分评价患者的生活质量,评分范围0～100分,100分正常,无症状及体征;10分病危,临近死亡;0分死亡。结果:纳入患者15例,全部进入结果分析,无脱落。①15例恶性血液病患者均能耐受40℃,120min的加热过程,具有良好的顺应性。②全身加温治疗24h后,患者的临床症状、体征明显好转,KPS评分平均提高10分。③全身加温治疗前及治疗24h后,患者的血常规和生化等检查指标比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:全身热疗系统可以用于恶性血液病的全身加热治疗,治疗过程是安全的,值得在临床上进一步推广应用;而且能显著提高恶性血液病患者的生活质量及临床症状体征,初步显示其有效性,但长期疗效评价正在进行中。     

热疗联合化疗对K562/AO2细胞体外作用的实验研究

本研究观察热疗联合阿霉素对耐药慢性髓系白血病细胞系K562/AO2体外增殖的抑制作用、诱导凋亡及对Bcl-2及P-gp表达的影响。以MTT法确定阿霉素的工作浓度进行化疗,以40、41和42℃体外加热K562/AO2。加热前及加热后48小时采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率,MTT检测肿瘤细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、Bcl-2及P-gp表达,观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。作用48小时的IC50值作为实验的工作浓度。结果表明：与单纯培养相比,40、41和42℃热疗60分钟对K562/AO2细胞有明显地抑制作用（p〈0.01）,并随温度增高而增强;热疗＋化疗组在40、41和42℃时,K562/AO2增殖抑制明显（p〈0.01）,随着温度的增高而增强。热疗组、化疗组及热疗＋化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间均有显著性差异（p〈0.01）;Bcl-2蛋白及P-gp的表达均下降,各组之间也有显著性差异（p〈0.01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对K562/AO2细胞的体外抑制作用,提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2及P-gp的表达。     

热休克蛋白与肿瘤免疫

生物细胞在受热或其它理化因素（如病毒感染、缺氧、重金属离子、紫外线照射等）的作用下，可以启动热休克蛋白基因。选择性合成一组高度保守性的蛋白质——热休克蛋白（heat shock proteins，HSPs），又称为应激蛋白（stress protein）。HSP通过与具有不同功能的多种蛋白质在细胞中形成复合体而参与有关蛋白的折叠、装配、细胞内运输及蛋白质降解等过程。调节这些蛋白的活性和功能，而自身并不参与大分子蛋白的组成，故称为“分子伴侣（chaperone）”。HSPs在免疫应答中的作用引起了人们的广泛关注。本文就HSPs与肿瘤的关系研究进展做一综述。     

中华眼镜蛇毒组分联合活化免疫细胞对白血病KG1a细胞的杀伤作用

本研究旨在探讨中华眼镜蛇毒组分（Naja Naja Actra Venom Component,NNAVC）与活化免疫细胞联合对人急性髓系白血病系KG1a细胞的杀伤作用.采用CCK-8法检测不同浓度NNAVC对KG1a细胞的杀伤作用,乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒测定活化免疫细胞对KG1a细胞的细胞毒作用、NNAVC与活化免疫细胞联合杀伤KG1a细胞以及NNAVC作用后存活的KG1a细胞对活化免疫细胞的杀伤敏感性变化.结果显示,NNAVC对KG1a细胞的抑制率随药物浓度的增加而增高,而活化免疫细胞对KG1a细胞的杀伤活性随效靶比的升高（6.25∶1、12.5∶1和25∶1）分别达到12.30％、24.85％和52.26％.NNAVC与不同效靶比（10∶1、20∶1）的活化免疫细胞联合,对KG1a细胞的杀伤率达到56.21％和85.59％,高于两因素各自的单独作用效果.以不同浓度NNAVC杀伤后存活的KG1a细胞为靶细胞,活化免疫细胞对其杀伤活性在效靶比为10∶1时分别为25.65％、31.33％、28.63％和16.78％,在效靶比为20∶1时分别为40.62％、44.70％、44.62％、40.72％.结论：NNAVC与活化免疫细胞在体外均可以有效杀伤KG1a细胞,二者联合应用能够增强对KG1a细胞的杀伤作用.     

X射线诱导Raji细胞凋亡的实验研究

目的探讨X射线对人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖及凋亡的影响。方法用不同剂量X射线照射细胞,并在不同时间段用倒置显微镜观察照射后细胞的形态变化及生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期,并观察X射线对克隆形成的影响。结果 16Gy照射后48h对Raji细胞的抑制率(92.67±1.20)%最显著;8Gy照射后48h早期凋亡率(42.04±3.62)%最高;8Gy照射后24h细胞周期G2/M期细胞(57.86±3.31)%,明显大于正常对照组(14.54±2.32)%;8Gy照射后第7天无克隆形成,第14天克隆数为(5.33±2.40),明显小于正常对照组第7天(116.67±20.28)和第14天(263.33±20.27)。结论 X射线可抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡,照射后细胞周期阻滞在G2/M期,X射线8Gy照射后不能完全抑制Raji细胞的增殖。     

+8伴JAK2突变的骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病不能分类1例

本研究探讨1例骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病不能分类(MDS/MPD-U)患者的临床特征、染色体核型与JAK2基因突变发生的关系。利用骨髓组织学活检、染色体核型分析技术、ARMS-PCR等方法,观察该MDS/MPD-U患者的临床特征、染色体核型、JAK2基因突变情况。结果表明,患者骨髓有典型的小巨核细胞、血小板增多、8号染色体三体异常、JAK2 V617F基因突变。结论:该患者符合MDS/MPD-U的诊断,伴有+8,JAK2 V617F基因突变,为进一步研究染色体核型异常与JAK2 V617F基因突变两种分子事件之间的相关性及对MDS/MPD-U预后的影响提供依据。     

地塞米松及1α-25-(OH)2-D3体外诱导致耐受树突状细胞的特性

目的 探讨地塞米松及1α-25-(OH)2-D3体外诱导致耐受树突状细胞的特性.方法 用地塞米松及1α-25-(OH)2-D3诱导CBA/Ca小鼠骨髓来源的树突状细胞,加或不加脂多糖,观察不同树突状细胞的形态学特点,流式细胞仪检测免疫表型,ELISA法检测IL-12p70、IL-10细胞因子分泌,测定不同树突状细胞刺激异基因淋巴细胞增殖能力.结果 地塞米松及1α-25-(OH)2-D3诱导的小鼠树突状细胞毛刺少,CD80、CD86水平低,IL-12p70水平降低(P＜0.05),IL-10水平升高(P＜0.05),刺激异基因淋巴细胞增殖能力受损.结论 地塞米松及1α-25-(OH)2-D3体外诱导树突状细胞符合致耐受树突状细胞的特点,为其应用于自身免疫性疾病的治疗提供了理论依据.     

自体造血干细胞移植联合异体细胞因子诱导的杀伤细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病2例

背景：自体造血干细胞移植治疗高危急性髓系白血病的复发率极高,如何降低移植后复发率至今仍是难点。目的：观察自体造血干细胞移植联合异体细胞因子活化杀伤（CIK）细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病的临床效果。方法：2例高危急性髓系白血病患者,经诱导化疗及巩固强化治疗后,在第1次缓解期行自体造血干细胞移植,移植后1个月给予三四疗程异体CIK细胞输注,每隔半年1个疗程,每疗程分5次输注异体CIK细胞,每隔1日输注1次。每次输注CIK细胞前半小时内给予皮下注射白细胞介素2,第1次输注后隔日皮下注射白细胞介素2,半年后减为隔2日1次,1年后减为隔3日1次,1年半后减为1次/周,维持半年后结束,预防白血病复发。结果与结论：2例患者自体造血干细胞移植后输注异体CIK细胞及皮下注射白细胞介素2无发热、寒战、皮疹等不良反应,无骨髓抑制及移植物抗宿主反应,治疗安全。2例患者持续缓解时间分别为20个月及2年,目前仍无复发。首次得出对于无合适供者的高危急性髓系白血病患者,在缓解后可行自体造血干细胞移植联合异体CIK细胞及白细胞介素2治疗,有机会获得长期无病生存。     

As2O3下调KG1a细胞粘附分子CD44、CD49d表达

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对体外造血微环境中KG1a细胞粘附分子CD44和CD49d表达的影响。方法用正常人和白血病患者的骨髓基质细胞在体外模拟造血微环境,与KG1a细胞共培养。用流式细胞术检测不同条件下As2O3对KG1a细胞CD44和CD49d表达的影响。结果来源于正常人或白血病患者的骨髓基质细胞与KG1a细胞共培养都可明显增加KG1a细胞CD44、CD49d表达（P≤0.01）,但两种不同来源的骨髓基质细胞上调KG1a细胞CD44、CD49d表达无明显差异（P〉0.05）;骨髓基质细胞与KG1a细胞共培养的时间对CD44和CD49d表达无影响（P〉0.05）。在共培养体中,不同浓度As2O3均可下调KG1a细胞CD44、CD49d的表达。用1μmol/L的As2O3分别作用24h及48 h后,KG1a细胞表面CD44分别为（94.32±0.77）%和（88.97±1.74）%（P〈0.05）;CD49d分别为（41.12±0.37）%和（34.12±1.77）%（P〈0.05）,随时间延长表达下降。当As2O3浓度增高为2μmol/L时,CD44表达率由（99.08±0.29）%降至（85.6±0.88）%,CD49d表达率由（47.48±0.1）%降至（37.03±0.96）%（P〈0.01）。结论 As2O3能降低体外造血微环境中KG1a细胞表面CD44、CD49d表达,并且呈时间剂量依赖性。