nMSP-DHPLC检测粪便SEPT9基因甲基化及其在结直肠癌诊断中的应用

目的探讨粪便SEPT9(septin 9)基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的应用价值。方法常规提取87例结直肠癌手术切除癌组织、癌旁正常结肠组织及其术前粪便DNA,应用巢式甲基化特异性PCR(nested methyl-ation specific PCR,nMSP)结合变性高效液相色谱(denatured high performance liquid chromatography,DHPLC)技术检测结直肠癌组织、癌旁组织及粪便SEPT9基因甲基化水平;比较结直肠癌组织和粪便中SEPT9甲基化检测在结直肠癌诊断中的敏感性和特异性。结果在87例结直肠癌中,癌组织SEPT9检出率为80.5%(70/87),癌旁组织检出率为8.0%(7/87),二者比较差异有统计学意义(P<0.01),特异性为91.9%;结直肠癌粪便SEPT9基因甲基化检测结果与组织检测结果基本一致。SEPT9基因甲基化与大于65岁老年患者和右半结肠癌显著相关。结论结直肠癌组织SEPT9基因甲基化异常发生率高,尤其是老年和右半结肠癌患者;粪便SEPT9基因甲基化异常可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物。     

单胺氧化酶B基因微卫星多态与帕金森病的相关分析

目的 研究上海地区汉族人群中单胺氧化酶B(MAOB)基因第二内含子中鸟嘌呤、胸腺嘧啶(GT)二碱基重复的微卫星多态位点与帕金森病(Parkinson’s disease，PD)易患性之间的关系。方法 采用扩增片段长度多态法(Amp—FLP)，在上海汉族人群中选择67例散发PD患者为PD组和204名健康者为对照组，运用微卫星荧光标记—半自动基因分型技术精确计算出微卫星等位基因片段大小，进而分析该多态在PD易患性中的作用。结果 该位点短片段(≤170bp)等位基因的分布在：PD组中明显高于与对照组(x^2=11．28，P=0．001)，而172bp等位基因在PD组中亦明显低于与对照组(x^2=5．16，P=0．023)。结论 MAOB基因GT二碱基重复多态位点与本组PD患者的易患性有关。     

转录水平RNA干扰肝素酶基因对肝癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨转录水平基因沉默（TGS）技术和转录后水平基因沉默（PTGS）技术对肝素酶（HPA）基因干扰效果及其对肝癌SMCC-7721细胞侵袭能力的影响。方法 从HPA基因启动子区和编码区分别设计并合成TGS和PTGS的小干扰RNA（siRNA）,并转染肝癌细胞SMMC-7721;实时半定量PCR和Western blotting检测TGS和PTGS siRNA转染后48、72和96h HPA的表达,并设空白组作为对照;Transwell小室实验检测干扰后SMMC-7721细胞的侵袭能力。结果 TGS和PTGS两种技术在转染48h后,从mRNA和蛋白水平上均能成功干扰HPA表达;转染后72h,PTGS组HPA恢复表达,而TGS组仍保持沉默;转染后96h,两组HPA均恢复表达。Transwell小室实验表明,TGS和PTGS组HPA基因均能使SMCC-7721的穿膜细胞数减少,TGS组效果更明显。结论 TGS技术沉默肝癌SMMC-7721细胞中HPA基因的能力优于PTGS技术,并使肝癌细胞的侵袭能力显著降低。     

肝转移性恶性间质瘤1例

胃肠道恶性间质瘤以向肝脏转移较为常见,但在无明确原发病灶的情况下,以肝脏占位为首发表现的病例却很容易被误诊.现将恶性间质瘤肝转移1例的诊断经验报告如下.     

阿霉素诱导Egr-1启动子调控的造血因子GM-CSF基因表达对荷瘤小鼠造血功能恢复的影响

本研究探讨阿霉素（ADM）诱导早期生长因子（Egr-1）启动子调控的造血因子基因表达对荷瘤小鼠化疗后造血功能恢复的作用。将构建的携带有Egr-1启动子的粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）cDNA和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）cDNA双顺反子真核表达载体导入基质细胞HFCL后,输入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内。实验小鼠随机分4组：①ADM诱导的HFCL／EG组（HFCL／EG＋ADM组）,②ADM诱导的HFCL组（HFCL＋ADM组）,③单纯输注HFCL／EG组（HFCL／EG组）和④单纯输注HFCL组（HFCL组）,每组6只动物。观察外周血象动态改变,用流式细胞术检测eGFP^＋人基质细胞,用RT-PCR和Westernblot分别检测GM-CSFmRNA及其蛋白的表达。结果表明：化疗组与未化疗组相比外周血白细胞降低,而且下降幅度较低,恢复加快;各组间CFU-GM数无显著性差异;肿瘤抑制率与化疗相关,而与外源基因表达不相关;ADM处理后实验组小鼠骨髓可见绿色荧光阳性的基质细胞;RT,PCR和Westernblot显示GM-CSFmRNA和GM-CSF蛋白表达增强。结论：ADM诱导的Egr-1启动子造血因子基因疗法具有化疗后促进造血恢复作用。     

替莫唑胺联合生物疗法预防晚期黑色素瘤脑转移临床分析

目的 评价接受替莫唑胺+铂类+生物治疗及传统药物达卡巴嗪+铂类+生物治疗不同方案治疗晚期黑色素瘤1年中脑转移情况; 探讨O6－甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶(MGMT)表达与替莫唑胺疗效的关系。方法 88例晚期黑色素瘤患者中52例接受替莫唑胺+顺铂化疗6周期,36例患者接受达卡巴嗪+顺铂化疗6周期,观察治疗1年后两组脑转移发生率及MGMT表达与替莫唑胺疗效的关系。结果 替莫唑胺组治疗1年后仅有2名患者发生脑转移,发生率为3.85%;达卡巴嗪组6名患者发生脑转移,发生率为16.67%。MGMT (-)组疾病控制率为80％,MGMT（+～++）组40.91％。结论 替莫唑胺治疗组脑转移率明显下降。MGMT表达与替莫唑胺药效有关,MGMT表达阴性治疗有效率更高。治疗前检测MGMT的表达情况,可预测化疗敏感性,制定个体化治疗方案,克服耐药,提高治疗效果。     

多巴胺β羟化酶基因内含子5区A1/A2多态与帕金森病的相关研究

帕金森病 (ＰＤ)作为一种危及人类生存生活质量的老年神经退行性疾病 ,其多种临床表现均与脑区黑质纹状体多巴胺浓度的降低有关 ,故与多巴胺系统代谢相关的基因已成为ＰＤ临床分子遗传学研究的热点。本研究主要探讨多巴胺β羟化酶 (ＤＢＨ)基因内含子 5区Ａ1/Ａ2多态在ＰＤ发病风险中的意义 ,并试图为ＰＤ的早期诊断提供可靠的生物学标记。1 研究对象 :原发性ＰＤ患者 35例 (男 16例 ,女 19例 ) ,年龄 4 3～ 79岁 ,平均 (6 2 3± 14 1)岁 ,源于我院神经内科门诊病人 ,诊断符合全国第一届锥体外系疾病会议制定标准。对照组 5 0例 (男 2 3例…     

α1-抗糜蛋白酶信号肽基因及载脂蛋白E基因多态性与帕金森病的关系

目的 探讨α1－抗糜蛋白酶（AACT）信号肽基因多态、载脂蛋白E（ApoE)基因多态与帕金森病（PD)发病风险间的关系。方法 采用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性方法（PCR－RFLP）,在64例PD患者、101例健康老人对照中观察AACT信号肽基因多态、ApoE基因多态的分布,并通过比值比（OR）对AACT多态、ApoE多态与PD作相关分析。结果 (1)PD患者与正常老人间不存在AACT各等位基因多态分布的差异（X^2=0．83,P＝0．363＞0．05）,但PD患者AACT－AA纯合子基因型与PD正关联（OR＝2．68,X^2＝4．31,P＝0．038＜0．05）。（2）ApoE基因多态性与PD之间不存在任何关联（等位基因：X^2＝2．85,P＝0．241＞0．05）;基因型：X^2＝9．25,P＝0．099＞0．05）。（3）非ApoEε4型AACT－AT杂合子基因型与PD负关联（OR＝0．47,X^2 =4．10,P＝0．043＜0．05）。（4）AACT－AT杂合子型PD与ApoEε4等位基因正关联（OR＝3．26,X^2＝5．53,P＝0．019＜0．05）。结论 AACT－AA纯合子基因型、ApoEε4型AACT－AT杂合子基因型均可能是PD发病的风险因子。     

Reversal of multidrug resistance in renal cell carcinoma by short hairpin RNA targeting MDR1 gene

目的 研究RNA干扰（RNA interference,RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对化疗药物敏感性的变化。方法 根据MDRl基因设计3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT-PCR法分析转染前后MDR1 mRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT-PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Western bolt法检测MDR1蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后多种化疗药物对细胞半抑制浓度（IC50）的变化;相关数据统计通过SPSS10.0软件进行。结果 3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDR1基因的表达,其中siRNA-1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRl mRNA表达水平下降;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDR1蛋白表达量明显下降,并使多种化疗药物对细胞的IC50明显降低。结论 RNAi技术可有效抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达,并可显著增加其对多种化疗药物的敏感性,从而使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。     

CREB1蛋白在大鼠急、慢性吗啡依赖和戒断中的表达变化

目的 研究急、慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织cAMP反应元件结合蛋白（CREB1）的表达调节作用。方法 雄性SD大鼠36只，随机分为急性对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性对照组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组，每组6只。采用免疫组化方法测定不同脑区和核团CREB1蛋白表达水平。结果 急性吗啡依赖和戒断抑制蓝斑CREB1蛋白表达。慢性吗啡依赖和戒断增加皮质、海马、蓝斑等脑区核团CREB1蛋白的表达，但是在慢性吗啡依赖和戒断时，伏隔核CREB1蛋白表达下降。结论 急、慢性吗啡依赖和戒断时CREB1在大鼠皮质、海马、下丘脑、蓝斑、伏隔核等脑区的表达存在差异，可能与介导阿片类药物依赖信号转道通路的反应性不同有关。