应用完整外显子2/3序列解决HLA-DRB1座位基因分型的歧义结果

背景：人类白细胞抗原基因测序分型中，当等位基因的差异碱基位于测序范围之外或不同等位基因对的杂合序列相同时，无法得到清晰的结果。 目的：通过完整外显子2/3序列的测定，解决常规HLA-DRB1基因分型中的高比例歧义结果。 方法：初次分型采用常规的测序方法检测320份样本的HLA-DRB1外显子2第一高变区以外的序列，测序反应设置codon86。后期采用一次性扩增外显子2/3，测序反应针对外显子2设置组特异性引物：DRB1*04/07/09为一组，其它基因家族为一组，设置conden86，对初次分型后为歧义结果的样本重新分型。 结果与结论：初次分型有180份样本为歧义结果，占总样本数的56.25 %。其中A类为差异碱基位于测序范围之外，共114例；B类为等位基因对的杂合序列相同，共17例；C类为两种情况同时存在，有49例。3种类别的歧义等位基因数分别为119个、34个、98个，占等位基因总数的33.06%、9.44 %、27.22%。完整外显子2/3序列的测定使歧义结果比例从56.25%下降到14.37%，其中A类103例、B类8例、C类23例样本的等位基因得到确认。此次研究中发现了一个新等位基因，与跟它最相近的等位基因DRB1*110101相比，其外显子3的第381位碱基G>T，导致第98位氨基酸AAG(赖氨酸 Lys)>AAT(天冬酰氨 Asn)。序列已提交Genbank，编号HM807583，2010-08被世界卫生组织HLA因子命名委员会命名为HLA-DRB1*1197(编号HWS10010999)。提示，完整外显子2/3序列的测定能大幅降低歧义分型结果的比例。     

Flow—rSSO与PCR—SSP方法在骨髓库HLA基因分型中的应用比较

目的比较流式反向序列特异性寡核苷酸探针方法(Flow-rSSO)与聚合酶链式反应-序列特异性引物方法(PCR-SSP)在骨髓库人类白细胞抗原(HLA)分型中的应用价值。方法4769例中华骨髓库质控样本中,已采用PCR-SSP方法分型的3509例标本应用FLOW-rSSO方法复检,而1260例已采用FLOW-rSSO方法分型样本则应用PCR-SSP方法复检,结果不一致样本采用PCR-测序分型方法(SBT)进行确认。结果PCR-SSP方法HLA分型错误率(6.84‰)明显高于Flow-rSSO方法(1.59‰),其中PCR-SSP方法中75%的错误结果是由于漏检造成;PCR-SSP方法的模棱两可分型结果比例(2.56‰)明显低于Flow-rSSO方法(16.67‰)。结论PCR-SSP方法和FLOW-rSSO方法均适合应用于中华骨髓库供者的HLA分型,但HLA分型实验室有必要同时建立两种HLA分型方法。     

输注保养液过剩的血液可能导致受血者低血钙

输注保养液过剩的血液可能导致受血者低血钙１６１００６齐齐哈尔市红十字中心血站邹红岩王可鹏胡太灵在实际工作中，经常遇到各种原因造成献血者采血量不足，以致供采４００ｍｌ全血的血袋只采了２００ｍｌ，甚至只采了５０ｍｌ。这样的血供临床输注，笔者认为有引起受血...     

中国南方汉族人群HLA-A，B，DRB1基因测序分型模棱两可结果的分布及其解决方案

背景：聚合酶链式反应-直接测序分型技术被誉为HLA分型的金标准，在临床移植配型和骨髓库供者的大规模HLA分型中逐渐被广泛采用，但该方法的最大缺点是存在较高比例的模棱两可分型结果，故亟待寻找并建立适合中华骨髓库大规模供者HLA-测序模棱两可分型结果的解决方案。 目的：调查中国南方汉族人群HLA-A，B，DRB1基因测序分型中模棱两可结果的分布状况，评估其可能的解决方案。 设计、时间及地点：观察测量实验，2007-08/2008-08在深圳市血液中心输血医学研究所免疫遗传重点实验室完成。 对象：选择深圳骨髓库的汉族骨髓供者416名，供者民族和籍贯按照自述原则确定。 方法：采用聚合酶链反应-直接测序分型方法对416名汉族供者的HLA-A，B，DRB1基因进行测序分型，分析3个基因座模棱两可分型结果的分布情况，并分别采用高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法和杂合性模棱两可引物分离法进行解决；采用直接计数法统计基因频率，计算真实等位基因的相对概率。 主要观察指标：416名供者HLA-A，B，DRB1基因直接测序分型结果的分布。HLA-A，B，DRB1基因测序模棱两可分型结果的分类及分布。序列特异性引物法及杂合性模棱两可引物分离法对模棱两可分型结果的解决能力。 结果：80.29%的标本其HLA-A，B，DRB1基因出现模棱两可结果。80%左右的HLA-A，B基因和不足40%的HLA-DRB1基因模棱两可分型结果可以采用杂合性模棱两可引物分离法解决，其他则需要高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法解决。根据等位基因频率计算553个模棱两可等位基因组合中，75%的真实等位基因组合的相对概率大于98%。 结论：杂合性模棱两可引物分离法和高分辨聚合酶链反应-序列特异性引物法分别对位于HLA-A，B和HLA-DRB1基因检测区内、外的模棱两可分型结果具有较高的解决能力，二者互为补充；在大规模供者HLA分型中应用频率数据解决模棱两可结果有一定的应用价值。     

流式磁珠反向SSO法HLA分型结果判读影响因素及解决对策的研究

目的研究流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1分型结果判读中出现的常见问题,并提出相应的解决策略。方法对3 219名随机抽取的深圳市无关造血干细胞供者及组织配型患者的DNA采用流式磁珠反向SSO法进行HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,模棱两可结果用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)法及PCR-SBT测序方法等方法复核确认。结果3 219份样本中发现有95份(95/3 219)28种类型的模棱两可结果,其中HLA-A位点有3(3/28)种,HLA-B位点有25(25/28)种,91.6%的模棱两可结果其样本的荧光值在阳性控制线上,本研究观察到的模棱两可结果通过基因频率分析、PCR-SSP法及PCR-SBT基因测序等方法得以定型。结论建立流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1基因分型模棱两可结果解决策略,对提高HLA数据分析的速度和分型的准确性有重要的意义。     

新的HLA等位基因B~*5610的发现和序列分析

目的　识别确认中国人群的HLA新等位基因。方法　经基因克隆和DNA测序 ,分析该基因和B 5 6 0 2基因序列的差异。结果　该基因和B 5 6 0 2基因序列的差异只是在外显子 3区域中 5 5 9C >A以及 5 6 0T >C 2个碱基取代 ,并导致相应的密码子 187由亮氨酸变为苏氨酸。结论　该基因为HLA新等位基因 ,2 0 0 2年 9月已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA B 5 6 10。在大约 30 0 0名随机献血者中 ,未发现其他带有B 5 6 10基因的个体。     

深圳汉族人群HLA-Cw,-DQB1基因座等位基因的多态性

背景:HLA复合体是极其复杂的遗传系统,对其多态性的研究在法医学个体识别和亲权鉴定、群体遗传学、移植免疫、疾病相关等医学领域有重要的应用价值。目的:了解HLA-Cw,-DQB1基因座的等位基因在深圳汉族人群中的分布规律。设计、时间及地点:样本基因型的统计学分析,于2007-01/2008-06深圳市血液中心免疫遗传研究室完成。材料:样本来自中国造血干细胞捐献者资料库深圳地区志愿捐献者,使用EDTA-K2抗凝管采集外周血。方法:采用聚合酶链式反应-序列测定方法对深圳地区226名无关供者HLA-Cw,-DQB1基因座的2,3外显子进行序列测定与分析。等位基因频率采用直接计数法计算,Hardy-Weinberg平衡检验采用x2检验。主要观察指标:样本HLA-Cw,-DQB1基因座的基因型。结果:226个样本中共检测到25个Cw等位基因。其中Cw*0102,Cw*0702的频率最高(0.1881),其他频率较高的等位基因依次为Cw*0304,Cw*0302,Cw*0401及Cw*0801,Cw*0303,Cw*0602。该位点基因型观察值与期望值经χ2检验符合Hardy-Weinberg平衡定律(x2=116.00,...     

HLA-A、B和DRB1流式微珠高分辨分型方法结果分析

目的 分析流式微珠高分辨分型试剂检测样品HLA-A、B和DRB1的结果.方法 用美国one lambda公司流式微珠高分辨分型试剂对631例骨髓库样品进行HLA-A、B和DRB1三个位点的检测,计算用此试剂最终能得出高分结果 的比率.结果 631份样本中,三个位点均仅出现一组结果的只有3例,占0.475%.出现多组结果,但根据ASHI及NMDP标准能判为高分辨的,A位点有489例,占77.50%;B位点有520例,占82.41%;DRB1位点有582例,占92.23%;A、B和DRB1三个位点均能得出高分辨结果的有374例,占59.27%.结论 使用流式微珠高分辨试剂指定高分辨结果是可行的,大多数标本可获得高分辨结果.     

血小板经不同活性基团mPEG修饰后功能变化的研究

目的:观察血小板经不同mPEG修饰后功能变化情况,并分析其原因.方法:分别用mPEG-BTC、mPEG-SPA对血小板进行化学修饰;流式法检测修饰前后血小板CD62P荧光强度变化;并对血小板的聚集、黏附及释放功能进行检测.结果:经mPEG-BTC、mPEG-SPA修饰后,血小板CD62P表达率由修饰前的(12.77±2.87)%分别降至0和(4.12±1.28)%;聚集能力由修饰前的(1.43±0.74)%分别升至(3.86±1.21)%和(3.84±1.12)%;黏附能力由修饰前的(30.2±5.59)%分别升至(45.5±2.72)%和(45.2±3.99)%;而血小板Ca2 释放能力修饰前后差异无统计学意义.结论:使用mPEG-SPA对血小板进行化学修饰可影响血小板的功能,是一种较为理想的修饰剂.     

全血抽提基因组DNA数量与纯度影响因素的探讨

目的研究全血标本在反复冻融后对抽提基因组DNA数量和纯度的影响。方法本研究随机抽取100份样本，相隔24小时连续进行反复冻融四次，将每次融化的样本抽提基因组DNA，并用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度。结果全血样本反复冻融组间比较抽提基因组DNA的数量检测结果比较提示均有显著差异（P〈0．01），但纯度反复冻融组间比较的检测结果提示均无统计学意义（P〉0．05）。结论反复冻融对全血标本抽提基因组DNA的数量有使其下降的作用，对纯度则无影响。