重组幽门螺杆菌粘附素工程菌高密度发酵条件的研究

目的研究重组幽门螺杆菌粘附素基因工程菌的发酵工艺.方法采用德国B.Brau公司C-10型15 L发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白的表达条件进行了优化.结果在优化的条件下,15 L发酵罐发酵工程菌,菌体收获量可达48.2g/L,目的蛋白表达量约占总蛋白的31.5%.结论此发酵工艺可以提高工程菌收获和目的蛋白的表达.     

治疗性单克隆抗体研究进展及临床应用现状

19世纪末,动物来源的抗血清用于肺炎、白喉、麻疹等传染病的早期治疗,显示了一定效果,但毒副作用大,特别是异源蛋白易产生过敏反应.1975年杂交瘤技术问世,开创了抗体技术的新时代.单克隆抗体(以下称单抗)高度的特异性和均一性使其在实验研究和临床检测中得到了广泛应用.自1982年单抗首次应用于人体治疗以来,应用单抗治疗肿瘤、自身免疫疾病,组织器官移植排斥反应等疾病的报道渐多,同时鼠单抗用于人体的毒副作用也越来越明显,使单抗在人体治疗中的应用受到很大限制.随着分子生物学技术的发展,尤其是抗体库技术、鼠抗体人源化改造技术以及近年利用转基因技术研制完全人抗体的突破,为单抗进入临床治疗提供了良好的应用前景.本文就单克隆抗体人源化改造、抗体库技术、转基因小鼠技术研究进展及目前单抗在临床治疗中的应用现状予以综述.     

CpG基序对幽门螺杆菌疫苗的免疫佐剂效应实验研究

目的　探讨CpG在幽门螺杆菌疫苗研究中的佐剂效应。方法　将 60只BALB c小鼠分为 4组 ,分别以H .pylori尿素酶B亚单位 (rUreB) CPG、rUreB CT、单独UreB以及PBS进行口服免疫 ,ELISA检测胃、肠、气管冲洗液sIgA以及血清IgG亚类 (IgG1,IgG2a) ,RT PCR差异显示T淋巴细胞IFN γ、IL 4mRNA。结果　①CpG rUreB组在胃、肠、气管和血清产特异性抗体水平显著高于PBS组和单独rUreB组 (P <0 0 1) ,与CT UreBs组差异不显著 (P >0 0 5 ) ;②抗原刺激后CpG rUreB组T淋巴细胞表达的IFN γ、IL 4mRNA显著高于PBS组和rUreB组。结论　①CpG可能是H .pylori疫苗研究中有效的粘膜佐剂 ;②CpG rUreB组诱导的可能是Th1 Th2型免疫应答。     

人幽门螺杆菌尿素酶抗体诊断试剂盒的研制

幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)为慢性胃炎、消化性胃溃疡的致病菌 ,并且与胃癌的发生密切相关 ,世界卫生组织 (ＷＨＯ)将其列为一级致癌因子 ,早期诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染并对其治疗和预后的观察具有重要意义。目前 ,临床上用于诊断Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ感染的方法主要有胃镜下组织活检、细菌培养、13 Ｃ呼气试验等 ,前者需活检组织 ,病人痛苦大 ,且阳性率低 ,后者需特殊性设备 ,不易推广 ,细菌培养则阳性检出率低 ,而血清学诊断具有灵敏、快速、准确、简便、费用低等优点 ,易在临床上广泛使用。但是 ,…     

人白细胞介素2受体α链cDNA导入哺乳细胞及其克隆与稳定表达的研究

按DNA—磷酸钙共沉淀法将人白细胞介素2受体α链cDNA转染中国仓鼠卵巢细胞(CHOdhfr~-)及小鼠成纤维细胞(L929),获得稳定表达人IL-2Rα链的CHOdhfr~+细胞克隆。经RNA点渍杂交分析、荧光标记IL-2染色法、特异性ELISA和玫瑰花环试验检测证明,哺乳细胞表达的重组IL-2Rα链具有结合IL-2和抗Tac McAb的能力。还报道了T细胞白血病Jukat及Molt-4等细胞系异常表达IL-2R的结果,并作了分析讨论。     

幽门螺杆菌诱导蒙古沙鼠胃上皮细胞凋亡可能涉及线粒体途径

目的建立幽门螺杆菌(Hp)感染蒙古沙鼠模型,探讨线粒体途径在Hp诱导胃上皮细胞凋亡中的作用。方法 48只雄性蒙古沙鼠均分为Hp感染组和对照组,每组分别于1、3和6个月3个时相点各处死8只动物,取胃黏膜行组织学检查:用Warthin-Starry银染、PCR和快速尿素酶法检测 Hp;通过H-E染色,光镜下观察胃黏膜病理变化;流式细胞仪测定细胞凋亡、线粒体膜电位及胞内游离 Ca2+含量。结果 Hp感染蒙古沙鼠后,胃黏膜出现慢性胃炎、肠化生及异型增生改变,而对照组胃黏膜基本正常,Hp感染组肠化生及异型增生发生率明显高于对照组(P<0．05)。Hp感染胃上皮细胞1、3、 6个月后的凋亡率分别为(16．71±3．30)％、(5．90±0．82)％、(5．69±0．70)％,而对照组的凋亡率分别为(4．20±0．94)％、(3．17±0．43)％、(4．70±0．55)％。其中Hp感染1个月后胃上皮细胞的凋亡率高于其他各组(P<0．05)。Hp感染胃上皮细胞1、3、6个月后的线粒体膜电位分别为43．10±17．62、 71．19±38．03、80．56±32．90,而对照组分别为84．70±23．50、84．39±37．51、79．54±30．24,其中Hp 感染1个月后胃上皮细胞的线粒体膜电位低于其他各组(P<0．05);Hp感染1、3、6个月后胃上皮细胞内游离Ca2+含量分别为18．60±9．32、5．18±2．06、4．94±3．25,而对照组分别为4．82±3．70、6．86 ±2．34、5．28±3．13,Hp感染1个月后胃上皮细胞内游离Ca2+含量高于其他各组(P<0．05)。结论 Hp诱导蒙古沙鼠胃上皮细胞凋亡主要发生在Hp感染早期;线粒体膜电位的下降和胞内游离Ca2+含量的升高参与了Hp诱发蒙古沙鼠胃上皮细胞凋亡的过程。     

13C-尿素呼气试验在蒙古沙鼠幽门螺杆菌感染检测中的应用

目的　应用13 C -尿素呼气试验检测蒙古沙鼠幽门螺杆菌感染 ,从而建立一长期监控小型试验动物幽门螺杆菌感染无创检测技术。方法　分别在蒙古沙鼠感染幽门螺杆菌后第 2 0 ,5 0 ,10 0及 2 0 0d用13 C -尿素呼气试验进行检测 ,并对检测后沙鼠以细菌分离培养、ELISA、PCR、快速尿素酶试验、病理切片等五种常规方法检测幽门螺杆菌。结果　在上述不同检测时期 ,用13 C -尿素呼气试验所得蒙古沙鼠幽门螺杆菌感染阳性率分别为 77 78% ,83 33% ,84 2 1%和 80 0 0 % ,而应用常规方法检测结果阳性率为 83 33% ,88 88% ,94 2 1%和 85 0 0 %。比较两组试验结果发现 ,13 C -尿素呼气试验比常规检测方法检出阳性率相对偏低 ,但统计学分析发现其具有一致性。结论　13 C -尿素呼气试验用于幽门螺杆菌感染蒙古沙鼠模型检测是一种可行的无创检测方法 ,可作为评价Hp感染的重要参考指标之一     

幽门螺杆菌外膜蛋白18的克隆表达及纯化研究

目的克隆表达幽门螺杆菌（HP）外膜蛋白,为HP的疫苗开发及诊断试剂盒的研究奠定基础。方法用PCR方法从HP临床分离株9806的染色体DNA中扩增出OMP18基因片段,将目的基因插入表达载体pQE30中,重组载体pQE30-OMP18经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌E．coli．M15,IPTG诱导表达。采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定其表达。结果PCR扩增出长度为537bp的OMP18基因,片段测序分析其与Gen—Bank公布的核苷酸序列相似性达99％;SDS—PAGE显示,重组工程菌经IPTG诱导表达了分子量为20．0kDa的目的蛋白,占总蛋白的20％,经纯化后,目的蛋白纯度达85％以上;Western blot结果表明,该蛋白可与兔抗HP的多克隆抗血清发生特异的抗原抗体结合反应。结论成功构建了OMP18表达载体pQE30-OMP18,并在大肠杆菌中获得高效表达,为HP疫苗有效抗原筛选及诊断试剂的开发奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli．EHEC）是出血性肠炎的主要病原体．其主要血清型是O157：H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157：H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），还可在5％～10％的病例中引发溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7Tir细胞骨架偶联蛋白（TeeP）基因，并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC0157：H7Sakai菌株基因组扩增TeeP基因，构建TeeP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗TeeP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Westernblotting法进行测定和分析。结果从EHECO157：H7Sakai菌株中克隆出了1014bp的TeeP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达；以TeeP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Westernblotting分析此抗体能与TeeP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TeeP基因，所获TeeP具有良好的抗原性，为进一步研究TeeP在EHECO157：H7致病机制中的作用奠定基础。