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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位H-2d限制性TH表位的预测与鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 鉴定幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(ureB)的H-2^d限制性TH表位,为研究场表位疫苗奠定实验基础。方法 用RANKPEP软件预测尿素酶B亚单位可能的H-2^d。限制性TH细胞表位,合成表位肽,采用淋巴细胞增殖试验、流式细胞分析及CD4^+T淋巴细胞增殖试验进行表位鉴定。结果 经软件预测获得7条可能的H-2^d限制性TH细胞表位,多肽合成经分析各表位肽纯度均〉85%,其中3条表位肽U546-561,U229-244,U237-251能够刺激rUreB致敏的BALB/c(H-2^d)小鼠的CD4^+T淋巴细胞增殖(SI〉2)。结论U546,561,U229-244,U237-251是UreB的H-2^d限制性TH细胞表位,可进一步用于Hp表位疫苗的研究。 相似文献
142.
肠出血性大肠杆菌O157:H7溶血素保护性片段(HlyAN436)克隆、表达、初步纯化与生物学活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素(Ehx)保护性片段,并研究其基本的生物学及免疫学特性。方法PCR法从EHECO157-SMR2菌株克隆O157:H7的HlyA亚单位的N端片段(436个氨基酸),T-A克隆后构建表达载体pET-28a(+)-HlyAN436,测序鉴定后转化到E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,初步纯化后免疫动物。结果Hly-AN436成功地在大肠杆菌表达系统表达,动物实验证实其具有良好的免疫原性和反应性以及一定的免疫保护性。结论Hly-AN436蛋白有可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。 相似文献
143.
幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB基因融合及表达的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
目的 构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .2载体中与ltB基因融合 ,将ltB ureB融合基因插入改造后的原核表达载体PinPointTMXa Ⅱ ,并在工程菌E .coliJM10 9中诱导表达。结果 经序列分析 ,ltB ureB融合基因由 2 10 3个碱基组成 ,为编码 70 1个氨基酸残基的多肽。SDS PAGE和Westernblot检测发现 ,融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 75× 10 3 ,并与幽门螺杆菌感染的阳性血清发生抗原抗体反应 ,ELISA检测显示 ,融合蛋白中存在LTB组分。同时发现所表达的融合蛋白无尿素酶活性 ,但保持与LT受体 神经节苷脂GM1结合的活性。结论 LTB UreB融合蛋白有可能用于幽门螺杆菌基因工程疫苗的研究 相似文献
144.
目的:获得大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)与幽门螺杆菌保护性抗原热休克蛋白A亚单位(HspA)的融合蛋白。方法:PCR扩增ltB和hspA基因,依次构建至表达载体pIM-1,转化大肠杆菌,SDS-PAGE、免疫印迹分析目的蛋白表达情况。采用GM1ELISA和D( )-半乳糖亲和层析方法检测重组LTB-HspA融合蛋白LTB组分与GM1神经节苷脂结合活性。结果:重组LTB-HspA融合蛋白表达量最高可达细菌总蛋白的25%。免疫印迹检测结果证实为重组LTB-HspA融合蛋白。GM1ELISA和D( )-半乳糖亲和层析方法检测结果证实重组LTB-HspA融合蛋白具有与GM1神经节苷脂结合的活性。结论:LTB-HspA融合蛋白的表达研究,为研制幽门螺杆菌分子内佐剂疫苗打下了基础。 相似文献
145.
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148.
O157:H7大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的一个主要菌型。其被确认为一种新型肠道致病菌。是近年来食品卫生及肠道感染领域最重要的研究进展之一。感染该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎(HC),也可引发溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)等严重并发症。O157:H7被发现以来的20余年,该菌引发的食物中毒在世界各地包括我国都有不同规模的暴发流行。如2000年5月份,江苏省丰县由O157:H7引起的Hc占腹泻病患者0.98%。6月份铜山县由O157:H7引起的HC患者占腹泻病患者5.89%。该菌长期驻留于牛、羊、猪、鸡等家 相似文献
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