重要呼吸道病毒病原的多重RT-PCR检测

目的 建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法 通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测甲型流感病毒（IA）、呼吸道合胞病毒（RSV）和SARS冠状病毒（SARS CoV）的多重RT-PCR方法。结果 该法可同时或分别扩增IA258bp、RSV348bp和SARS-CoV438bp的基因片段。检测的敏感性分别为10^17TCID50／ml、10TCID30／ml和10^1.5。TCID50／ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒（包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型）进行扩增,均未检测出扩增产物。结论此种多重RT-PCR法可在6h内完成,适用于三种重要呼吸道病毒的快速甄别。     

泡球蚴感染小鼠肝脏自噬相关蛋白的表达及其与纤维化关系的研究

目的 通过观察泡球蚴感染不同阶段小鼠肝脏纤维化情况与自噬相关蛋白表达情况,分析在泡球蚴感染中自噬与肝纤维化的关系。方法 取雌性BALB/c小鼠45只,随机分为模型组(30只)与对照组(15只)。模型组小鼠感染泡球蚴,并分别于感染8、30、60、90、180 d处死,通过HE染色观察小鼠肝脏的组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肝脏胶原纤维变化,免疫组化法检测肝脏中Atg5、LC3与α-SMA蛋白的表达情况,qRT-PCR检测肝脏中Atg5、LC3、α-SMA mRNA表达水平。结果 模型组小鼠感染泡球蚴8～90 d, Atg5、LC3、α-SMA蛋白及其mRNA表达逐渐增加,其中感染30～90 d时与对照组相比差异均有统计学意义(均P<0.05);感染180d时Atg5、LC3表达量较之前减低,而α-SMA表达量继续增加,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 泡球蚴感染早、中期小鼠肝脏自噬相关蛋白高表达,可能促进肝星状细胞活化。     

经静脉内耳钆造影MRI对可疑梅尼埃病的诊断价值北大核心CSCD

目的探讨经静脉内耳钆造影核磁共振(MRI)检查对可疑梅尼埃病(Ménière’s disease)的诊断价值。方法回顾性分析130例可疑梅尼埃病患者的临床资料,以2017年梅尼埃病诊断和治疗指南作为诊断标准,评价经静脉内耳钆造影MRI检查对梅尼埃病诊断的价值。结果 130例可疑梅尼埃病患者中,临床确诊为梅尼埃病80例,突聋21例,前庭性偏头痛20例,迟发型迷路积水等其他疾病9例。80例梅尼埃病患者中,内耳钆造影阳性68例,阴性12例;50例非梅尼埃病患者中,内耳钆造影阳性9例,阴性41例。内耳钆造影诊断梅尼埃病的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为88.3%、77.4%、85.0%、82.0%;经静脉内耳钆造影ROC曲线下面积及95%可信区间为83.5%(76.4%~89.7%);经静脉内耳钆造影诊断结果与临床诊断结果的一致性较好(κ=0.66)。结论经静脉内耳钆造影可以作为一种诊断梅尼埃病的可靠的无创性检查方法。     

小鼠骨髓及脾脏来源的树突状细胞培养及鉴定

目的建立体外培养和扩增树突状细胞(dendritic cell-DC)的方法,为免疫耐受研究提供实验材料和奠定基础。方法在无菌条件下提取ICR小鼠脾脏淋巴细胞和骨髓细胞,以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL-4)协同诱导下培养,光镜下观察DC的形态,流式细胞仪检测CD80、CD86表达水平。结果骨髓细胞体外诱导培养3天后,光镜下显示细胞表面不规则,呈树突状突起,可见典型的树突状细胞形态,低表达共刺激分子(CD80,CD86)。结论与脾脏细胞相比,骨髓细胞中不仅富含大量的DC的前体细胞而且诱导成DC时间短。     

急性百草枯中毒患者预后影响因素的分析

目的：探讨影响百草枯中毒患者预后的因素,为其临床治疗提供救治依据。方法收集我院2011年3月至2013年3月百草枯中毒病例66例对其进行回顾性分析,其中死亡48例,存活18例;男26例,女40例。分析患者服药剂量、洗胃时间、APACHEⅡ评分、血清白细胞计数、血清肌酐、谷丙转氨酶、肌酸激酶同工酶与患者的预后关系,然后采用Logistic逐步向前回归筛选出有效指标,并通过ROC曲线评价其在百草枯中毒预后的诊断价值。结果两组患者在口服剂量、血白细胞计数、肌酐、谷丙转氨酶、肌酸激酶同工酶存在统计学意义。通过Logistic向前逐步分析后,口服剂量、APACHEⅡ评分进入Logistic回归方程。口服剂量、APACHEⅡ评分对患者死亡风险评价具有显著影响。不同时间段的APACHEⅡ评分对于患者预后的评价相关程度不同。对口服剂量、APACHEⅡ评分、口服剂量联合APACHEⅡ评分进行曲线下面积分析,其各自的曲线下面积为0.923、0.945、0.957。结论中毒剂量、APACHEⅡ评分可作为判断急性百草枯中毒病情严重程度及预后的可靠指标,口服剂量联合APACHEⅡ评分对预后评价更有意义。     

临床输血前常规检查RhE、C抗原必要性分析

目的 检测RhE、C血型在人群中的分布趋势,同时对本院近一年来鉴定为Rh血型系统不规则抗体阳性标本进行分析,探讨常规检查RhE、C血型对临床输血的必要性.方法 采用盐水法、微柱凝胶法检测RhE、C血型及不规则抗体,并对不规则抗体进行特异性鉴定.结果 18 436例住院患者中E抗原、C抗原阴性率分别为52.35%、11.73%,Rh系统不规则抗体鉴定发现6例,分别为抗-E 1例、抗-E合并抗-c 1例、抗-C 1例、抗-D 1例、抗-c 1例和类抗-C合并类抗-e 1例.结论 对有输血史、妊娠史的患者,若已检出Rh血型系统抗-E、抗-C或者曾检出此类抗体的患者,输血前须对受血者和献血者同时进行RhE、C血型的常规检测,输血时要选择无对应抗原的红细胞,在确保配血试验均无溶血、无凝集时方可输注,以达到安全、有效输血的目的 ;同时有必要通过调查,明确不同行政区域、不同种族人群红细胞血型抗原的分布情况,根据人群分布特点制定出适合国情的输血前检查规程.     

重要蚊媒黄病毒对IFN-α介导的信号转导通路的抑制作用

目的:比较并探讨日本脑炎病毒Beijing-1株和登革2型病毒43株对宿主细胞内IFN-α介导的信号转导通路抑制作用的机制.方法:采用含萤火虫荧光素酶(Luciferase,Luc)报告基因的重组载体pISRE-Luc,通过检测IFN刺激应答元件(IFN-stimulated response element, ISRE)活性对病毒感染细胞内IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路的抑制作用进行定量分析.利用间接免疫荧光法观察在IFN-α作用下病毒感染细胞内STAT1分子的分布情况.进一步采用Western印迹分别检测在这两种病毒感染状态下宿主细胞内STAT1、JAK1和TYK2的磷酸化水平.结果:感染日本脑炎病毒和登革病毒的细胞在IFN-α作用下,ISRE活性与对照组相比均显著下降,而且日本脑炎病毒对宿主细胞内ISRE活性的抑制程度明显强于登革病毒;进一步研究发现,日本脑炎病毒可通过抑制JAK1和TYK2两种激酶的活性,降低STAT1的磷酸化水平,阻碍STAT1的核转运;而登革病毒则只抑制TYK2激酶的活化,降低STAT1的磷酸化及核转运水平.结论:日本脑炎病毒和登革病毒可通过不同的作用机制抑制IFN-α介导的JAK-STAT信号转导通路.     

中毒严重度评分对急性百草枯中毒患者预后影响的分析

目的:研究中毒严重度评分(PSS)与急性百草枯中毒患者预后的关系。方法:回顾性分析56例百草枯中毒患者入院即刻PSS评分,观察预后情况。结果:PSS评分与百草枯中毒患者预后有相关性(P<0.01),PSS评分越高,病死率越高,PSS评分与APACHEⅡ评分具有显著一致性(P<0.01)。结论:入院时PSS评分可应用于急性百草枯中毒患者的病情严重程度及预后的评价。     

细粒棘球蚴绦虫感染对哮喘大鼠血清嗜酸性粒细胞趋化因子和可溶性P选择素的影响

目的 建立细粒棘球蚴绦虫感染并发过敏性哮喘实验动物模型及探讨细粒棘球蚴绦虫感染对过敏性哮喘的作用.方法 24只Wistar大鼠,随机分为3组,A组为正常对照组,B组为单纯哮喘组,C组为细粒棘球蚴绦虫感染并发哮喘组.C组大鼠经腹腔注射感染细粒棘球蚴.70d后,以卵白蛋白(OVA)分别对B组、C组大鼠进行致敏及激发,建立过敏性哮喘模型.各组大鼠取肺组织作病理切片,观察大鼠肺组织的炎症变化,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),计数淋巴细胞(Lymphocyte)和嗜酸性粒细胞(EOS)的个数,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清Eotaxin-2、Eotaxin-3及sP-selection的水平.结果 与B组比较,C组大鼠BALF中Lymphocyte和EOS数明显减少(P<0.05),血清Eotaxin-2、Eotaxin-3及sP-selection的水平明显下降(P<0.05).各组大鼠血清Eotaxin-2水平与BALF中EOS数量密切相关(r=0.829),血清Eotaxin-3和sP-selection水平与EOS数量均呈正相关关系,r分别为0.562和0.315(P<0.05).结论 细粒棘球蚴绦虫感染对过敏性哮喘的发生有抑制作用.     

siRNA沉默CEACAM1基因对人胶质瘤SHG44细胞生物学行为的作用

目的 探讨CEACAM1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胶质瘤SHG44细胞增殖、体外迁移和侵袭能力的影响. 方法 设计并化学合成针对CEACAM1的3对siRNA,脂质体法瞬时转染SHG44细胞.Western blot检测转染后细胞中CEACAM1、β-catenin和Cyclin D1蛋白表达水平变化.CCK-8法检测转染后的细胞增殖情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期的变化.通过Transwell小室迁移和侵袭实验,观察下调CEACAM1对SHG44细胞体外迁移和侵袭能力的影响.结果 三组特异性siRNA转染48 h后,Western blot的结果显示,3个siRNA转染组CEACAM1蛋白水平均低于正常对照组和阴性对照组(P＜0.01),以CEACAM1-siRNA3干扰效果最为明显.后续实验表明,与两个对照组相比较,CEACAM1-siRNA组的细胞增殖减慢,β-catenin和Cyclin D1表达水平明显减少(P＜0.05).Transwell小室迁移和侵袭实验表明CEACAM1下调后的SHG44细胞迁移和侵袭能力较正常对照组及阴性对照组明显降低(P＜0.05). 结论 CEACAM 1-siRNA能有效抑制人胶质瘤SHG44细胞CEACAM1蛋白的表达,并抑制细胞增殖,降低细胞的体外迁移及侵袭能力.