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改良一步法制备人外周血白细胞线粒体DNA 总被引:11,自引:4,他引:7
目的建立从少量外周血中提取白细胞线粒体DNA(mtDNA)的快速、简便方法.方法 58份抗凝血静置后取白细胞层,采用碱变性法裂解细胞,酚/氯仿/异戊醇抽提,RNA酶消化后再抽提及沉淀,PCR扩增产物电泳鉴定.结果获得的mtDNA样品不存在蛋白质等污染,用特异性mtDNA PCR引物从58例核酸样品中均能扩增出1 528bp的mtDNA基因片段.结论改良一步法是一种省时、经济、实用、重复性好、能满足常规分子生物学和遗传学分析需要的mtDNA制备新方法. 相似文献
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目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据.方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性.结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低.低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降.结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性.AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控. 相似文献
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目的:构建CXCR4基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-CXCR4,并转染PC-3细胞,探讨趋化因子受体CXCR4对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响.方法: 分离健康人外周血单个核细胞,提取总RNA,以其为模板, RT-PCR法扩增CXCR4,获取CXCR4基因全长序列,装入带有绿色荧光蛋白(GFP)的逆转录病毒质粒pLEGFP-N1,用脂质体法转染PC-3细胞,采用实时定量PCR和Western blotting观察CXCR4表达情况,并通过体外细胞-基质粘附试验和Transwells小室检测肿瘤细胞体外侵袭能力的变化.结果: 成功构建pLEGFP-CXCR4载体,转染人前列腺癌细胞 72h后,CXCR4 mRNA及蛋白质水平明显上调,细胞的体外侵袭力明显增强,增殖活性增强.结论: CXCR4转染能够明显提高CXCR4基因mRNA及蛋白水平,提高人前列腺癌细胞体外侵袭能力. 相似文献
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非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子C的水平及临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
目的: 本研究探讨非小细胞肺癌患者(NSCLC)血清中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达水平及其与患者临床病理特征之间的关系。 方法: 收集20例体检正常健康者、30例肺炎患者及60例NSCLC患者血清,用ELISA方法检测血清VEGF-C表达水平。 结果: NSCLC、肺炎患者和正常健康者血清VEGF-C表达水平分别为124.8±95.4、78.1±55.2和63.8±46.2pg/ml,NSCLC患者表达水平与肺炎患者和正常健康者相比,差异具有显著统计学差异(P<0.05),后二者之间无显著统计学差异(P>0.05);NSCLC患者血清中VEGF-C表达水平与TNM分期及淋巴结转移具有显著相关性,与其它因素无明显相关性;NSCLC患者血清VEGF-C与患者存活时间密切相关,生存时间大于6个月患者35例,其血清VEGF-C平均表达水平为97.5±85.3pg/ml,而生存时间小于6个月的25例患者平均表达水平为161.4±145.2pg/ml,二者比较具有显著统计学差异(P<0.05)。 结论: NSCLC患者血清VEGF-C的表达较正常人群及肺炎患者明显升高,并与NSCLC患者病情进展密切相关,可作为一种辅助诊断及有价值的预后参考指标。 相似文献