HLA-B*2705-β2 m-多肽复合物的制备及纯化

目的:制备并纯化HLA-B*2705-β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)-多肽复合物.方法:将pET21a-HLA-B*2705和pET21a-β2m质粒在宿主菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达,高效表达的HLA-B*2705蛋白与β2m,在HLA-B*2705限制性抗原肽[来源于人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120蛋白的九肽NH2-GRAFVTIGK-COOH]存在的情况下,通过稀释复性折叠成HLA-B*2705-β2m-多肽复合物单体,经Western印迹鉴定,分子筛纯化.结果:成功地制备出HLA-B*2705-β2m-多肽复合物.结论:HLA-B*2705-β2m-多肽复合物的成功制备及纯化,为进一步研究HLA-B*2705与NK细胞Ig样受体(killer Ig-like receptor,KIR)之间的相互作用奠定了基础.     

脂联素在小鼠肝脏的高效稳定表达

目的：获得小鼠脂联素（adiponectin，ADPN）在肝脏的高效稳定表达，方法：构建含肝脏特异性启动子hAATp和增强子ApoEHCR的小鼠脂联素基因（mAd）的真核表达载体pAA-neo-mAd。以绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）为报告基因证明该载体在COS-7细胞中表达后，流体动力法（hydrodynamics-based procedure）通过尾静脉注射将其导入小鼠肝脏。通过肝脏mAdmRNA定量（半定量RT-PCR法）、免疫组织化学检测及血清脂联素水平测定（定量ELISA法）鉴定脂联素在肝脏的表达及表达效率。结果：肝组织RT—PCR的结果显示，注射后12h肝脏内即可检测到mAd mRNA的表达，且能持续表达6周以上。24h后血清脂联素水平显著升高，48h达到峰值，一直持续6周后仍明显高于正常水平。肝脏脂联素免疫组化染色呈阳性。结论：流体动力法能有效地将质粒载体pAA-neo-mAd导入小鼠肝脏，并能在小鼠肝脏高效稳定地表达重组小鼠脂联素。     

DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger转染HCV RNA效率比较

目的比较和优化DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger3种转染试剂的转染效率,选择适合建立丙型肝炎病毒（HCV）复制子或感染克隆的转染试剂和条件。方法将含有萤火虫荧光素酶报告基因的HCVRNA,分别通过上述3种转染试剂转染Huh7和Huh7.5.1细胞系,于转染24h后裂解细胞,测定荧光素酶活性。2~3周后,结晶紫染色细胞集落。结果在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipofectamine2000和TransMes-senger的转染效率高。在Huh7细胞中,4μlDMRIE-C转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高（P〈0.05）。在Huh7.5.1细胞中,3μlDMRIE-C转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高（P〈0.05）。在细胞集落形成实验中,DMRIE-C组的细胞克隆数多于其他两种转染试剂组。结论在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipo-fectamine2000和TransMessenger的转染效率高。当建立HCV复制子或感染克隆试验时,既要选择合适的RNA转染试剂,又要考虑细胞生长状态的影响。     

不同尺寸、形貌金纳米粒子小鼠体内急性毒性研究

目的 考察不同尺寸、不同形貌的金纳米粒子的急性毒性.方法 采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEC)对系列不同尺度、不同形貌的金纳米粒子进行修饰,通过测定zeta电位及表面等离子共振谱对修饰后纳米粒子的电性质及在生理盐水中的稳定性进行考察,最后将4种修饰后的金纳米材料通过腹腔注射入小鼠体内并在24h后进行血常规及急性时相反应蛋白检查.结果 PEG修饰后的金纳米颗粒能够在生理盐水环境中稳定存在.血常规结果表明,50 nm粒径的棒状金纳米粒子会引起白细胞数量的明显下降,50 nm粒径的球形金纳米粒子则引起血小板数量的减少,而粒径为10 nm及90nm的球形金纳米粒子组血常规指标无明显变化.而且,4种纳米粒子均不会引起小鼠体内急性时相反应蛋白的明显升高.结论 对于金纳米粒子来说,产生急性毒性与否似乎与其尺度之间并不存在所谓的线性依赖关系,而50 nm可能是生物体产生急性毒性的敏感尺度.     

海带多糖的免疫调节作用

目的观察海带多糖 (BSP)对正常及免疫低下小鼠免疫功能的影响。方法BSP经腹腔注射给药后 ,测定了各组小鼠胸腺、脾指数 ,外周血白细胞数 ,脾的T、B细胞增殖能力 ,脾细胞产生IL 2能力 ,以及血清和脾细胞溶血素含量等的变化。结果BSP 10 0mg/ (kg·d)× 10d能显著提高免疫低下小鼠胸腺、脾指数及外周血白细胞数 ,还能提高正常小鼠胸腺、脾指数 ;明显促进正常及免疫低下小鼠脾的T、B细胞增殖能力和脾细胞产生IL 2能力 ;BSP还能增加正常及免疫低下小鼠血清和脾细胞溶血素的含量。结论BSP是一种免疫调节剂 ,对正常及免疫低下小鼠的免疫功能具有促进作用。