丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a的克隆表达及其cDNA序列分析

目的：从丝瓜籽中克隆核糖体失活蛋白luffin-a基因，并在原核系统进行表达。方法：根据已报道的cDNA序列设计引物，用RT-PCR的方法从成熟的丝瓜籽中克隆luffin-a基因，克隆后鉴定核苷酸序列。构建表达载体pET-28a（＋）-luffin-a，转化大肠杆菌BL21（DE3），并经IPTG诱导表达。利用金属离子亲和层析的方法纯化所得目的蛋白。结果：克隆的luffin-a基因及其所编码的氨基酸序列与国外报道的核苷酸序列及氨基酸序列同源性分别为95％和92％，因而所获得的luffin-a基因是丝瓜籽核糖体失活蛋白luffin-a一个新的cDNA序列。经SDS-PAGE分析：luffin—a主要存在于包涵体中。金属离子亲和层析可纯化目的蛋白。结论：本研究成功地克隆了luffin-a一个新的序列，并建立了该蛋白的原核表达系统，同时利用亲和层析可一步法纯化获得目的蛋白。     

丙型肝炎病毒细胞和动物模型研究

丙型病毒性肝炎是一种严重危害人类健康的常见病和多发病。全球约有1．7亿人感染丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）。我国HCV感染者已达6000万。长期以来,丙型肝炎的研究一直面临一大难题：即缺少稳定可靠的HCV感染细胞模型和动物模型,阻碍了对HCV致病机制、抗病毒药物筛选和疫苗研究等的研究进程。因此探索具有实际应用价值的HCV感染模型或HCV基因表达模型,是当今丙型肝炎防治研究的重大课题,近10年来众多研究者对此方面进行研究,本文即对此做一综述。     

高压水动力法建立肝特异性白细胞介素-6报告基因小鼠模型

目的 建立一种可实时、无创、特异监测肝白细胞介素-6(IL-6)瞬时表达的小鼠模型.方法 通过水动力高压转染法将IL-6启动子启动的萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因载体定向转染至小鼠肝,采用活体生物发光成像检测炎症刺激条件下肝Fluc的表达情况,并考察发光强度与肝IL-6表达的相关关系.结果 高压水动力法成功将pIL-6-Fluc报告基因递送至小鼠肝,约使20%肝实质细胞表达目的基因.该法可造成一过性肝损伤但可在5~7 d恢复正常.pIL-6-Fluc可被脂多糖(LPS)激活,峰值时可上升(46.80±13.35)倍,远高于ELISA检测结果[(4.09±0.96)倍].结论 通过尾静脉水动力高压转染法可将pIL-6-Fluc特异性地递送至小鼠肝进而建立活体成像法检测小鼠肝IL-6瞬时表达模型;经验证,该模型可特异性地反映IL-6激活情况,且其灵敏度高于经典的ELISA方法.     

配体指数级系统进化技术及其在实验诊断中的应用

SELEX技术是一种新的组合化学技术 ,利用该技术从随机寡核苷酸文库中筛选出与靶分子结合的寡核苷酸配基 ,具有极高的亲和力和特异性 ,在临床诊断中比蛋白类抗体有更明显的优越性 ,显示出广阔的应用前景。     

去白悬浮红细胞4℃储存不同时间的质量评价

目的 检测去白悬浮红细胞在4℃储存不同时间下的红细胞溶血率、细菌生长、生化指标、能量代谢、膜损伤及氧化应激等指标,评价其质量随储存时间的变化.方法 10份志愿者全血于采集当天留取50 mL,用一次性白细胞过滤器滤白,尽可能去掉血浆层,根据200 mL全血对应红细胞保存液量等比例加入红细胞保存液,置4℃冰箱冷藏保存至终末...     

脂肪细胞因子研究进展

脂肪组织能够分泌产生一系列细胞因子，通过自分泌、旁分泌、甚至通过血液循环作用于远处的靶器官，参与能量代谢及平衡，并可能参与糖尿病、动脉粥样硬化等一系列肥胖相关疾病的发生。本文综述脂肪细胞补体相关蛋白、抵抗素、肿瘤坏死因子-α、白介素-6、酰化刺激蛋白的研究进展。     

配体指数级系统进化技术及其在实验诊断中的应用

SELEX技术是一种新的组合化学技术,利用该技术从随机寡核苷酸文库中筛选出与靶分子结合的寡核苷酸配基,具有极高的亲和力和特异性,在临床诊断中比蛋白类抗体有更明显的优越性,显示出广阔的应用前景。     

SEN病毒H亚型中国株流行病学及进化研究

目的：了解SEN病毒H亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法：结合已知的基因序列设计引物，建立了半套式PCR检测方法，对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-H亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果：检测结果显示无偿献血者中SE-V-H亚型感染率为34％，在non-A-E肝炎患者中SENV-H亚型感染率为24％，两者间无显著差异；但在无偿献血者中的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明，各测序株均与已知的SENV-H株序列有较高的同源性，并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论：建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒H亚型检测；SENV-H亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-H株序列之间都有较大的变异。与无偿献血者相比，non-A-E肝炎患者血清SENV-H株无进化上的显著倾向性。     

活体荧光成像监测HCV NS3/4A蛋白在小鼠体内的瞬时表达

目的建立HCV NS3/4A蛋白酶在小鼠体内可视化表达模型。方法利用水动力转染技术将融合基因NS3/4A-Fluc转染至小鼠肝脏,建立目的基因的瞬时表达模型,通过RT-PCR方法检测目的基因Fluc及NS3/4A的RNA表达水平,以及通过Western blot方法检测目的基因NS3/4A-Fluc的蛋白表达水平。结果建立了通过报告基因Fluc反映HCV NS3/4A蛋白酶的瞬时表达可视化小鼠模型。结论成功建立了可用于评价NS3/4A蛋白酶的可视化小鼠模型。