不同来源成骨细胞生物学特性的比较研究

目的　比较从同一胚胎来源的骨膜成骨细胞、颅骨成骨细胞和骨髓基质干细胞的分裂增殖能力和细胞的功能状态。　方法　从人5个月龄胚胎骨膜、颅骨和骨髓组织中分离培养出骨膜成骨细胞（periostealosteoblast,POB）、颅骨成骨细胞（cranialosteoblast,COB）和骨髓基质干细胞（marrowstromalcell,MSC）,用第6代细胞进行比较研究。观察细胞形态和超微结构;通过细胞生长曲线和     

组织工程化人工肌腱修复喙锁韧带损伤及其体内检测

目的总结组织工程化人工肌腱修复喙锁韧带的早期临床效果。方法用自愿中止妊娠健康妇女捐赠的 12周引产健康胚胎肌腱分离培养肌腱细胞,以 5× 106／ ml细胞密度种植在碳纤维和聚羟基乙酸的复合支架材料上,体外培养 5～ 7 d后植入体内,修复 5例锁骨外端Ⅱ、Ⅲ度骨折和肩锁关节Ⅲ度脱位伴喙锁韧带损伤。全部病例随访 7～ 13个月,平均 9.3个月。其中 2例分别于术后 3个月、 6个月行内固定取出术时,取微量组织行组织学检查及短串联重复位点检测。结果全部病例早期均无局部及全身反应,伤口一期愈合,上肢功能恢复正常,可从事原工作。组织学检查证实无明显淋巴细胞浸润,细胞呈梭形,纤维组织排列整齐、均匀,可见毛细血管增生。用法医物证技术检测 D3S1754、 Cyar04, TH01基因座,发现 2例均存在非自体组织等位基因,表明植入细胞保持了活力。结论用组织工程学原理构建的人工肌腱修复喙锁韧带损伤是可行的手术方法,植入的同种异体细胞至少在 6个月内保存了活力,无明显排斥反应。     

组织工程学研究现状及前景

１９世纪 ４０年代现代外科学奠基以来,对外科病的治疗主要采用病变组织切除及重建术。自体组织移植是以牺牲健康组织为代价的,虽然临床效果满意,但增加了病人的创伤,且供区极为有限;有血供的同种异体组织移植尚少有成功的报道。为挽救生命的同种异体器官移植随着对移植免疫研究的深入,目前已有心、肺、肝、肾等实质器官移植长期成活的报道。然而供器官的严重不足,使不少病人在等待器官移植中死亡。２１世纪８０年代,由Ｌａｎｇｅｒ和Ｖａ－ｃａｎｔｉ提出的组织工程学是利用工程学和生命科学的原理和技术,在体外预先构建一个有生…     

Ⅰ型胶原及其受体系统在成骨细胞内的表达

目的 研究Ⅰ型胶原及其受体系统在不同代次成骨细胞内的表达情况。方法 选用原代,第６代及第１５代人胚骨膜成骨细胞,Ｓ－Ｐ免疫组织化学染色观察Ⅰ型胶原及整合率α２β１的表达情况,定量ＲＴ－ＰＣＲ技术检测１型胶原及整合素α２β１的ｍＲＮＡ表达情况。结果 １型胶原及其受体在不同代次成骨细胞内均有表达,免疫组织化学未发现各代次间表达量的差异,不同代次的人胚成骨细胞都有１型胶原及其受体－整合素α２β１的ｍＲＮ     

Tet基因表达调控系统及其应用

 基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要。哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关，如热休克蛋白（Hsp）启动子可在高温下被诱导，还有重金属、糖皮质激素诱导的启动子等，但这些系统均存在着诱导表达不具备特异性、系统处于关闭状态时表达有遗漏以及诱导剂本身具有毒性会对细胞造成损伤等缺陷。如果设置一种导入基因的“开关”，能调控基因的表达，则有望大幅度提高基因治疗在临床应用的安全性。1992 年，Gossen 和 Bujard^[1]首次成功地利用原核基因调控元件构建了真核细胞基因表达调控系统——四环素基因表达调控系统（Tet 系统），该系统能通过在培养基中加入或者去除四环素或其衍生物（如强力霉素）诱导或抑制所感兴趣基因的表达，故被广泛应用于基因表达调控、蛋白质功能和基因功能研究以及基因治疗研究中。本文就近年来 Tet 系统的研究进展等做一综述。 1 Tet 系统概述 1.1 Tet 系统作用原理 大肠杆菌转座子 Tn10 中 Tet 阻遏因子（TetR）负性调节四环素抗性操纵子，TetR 与四环素有很高的亲和性，在无四环素时，TetR 与 Tet 操纵因子序列（TetO）结合而阻断四环素抗性基因的表达；当四环素存在时，TetR 对 TetO 的阻遏解除，转录启动，从而调控基因的表达。....     

动态应变下肌腱细胞三维培养的初步研究

目的　研究三维培养条件下机械应变对肌腱细胞形态、排列、增殖及代谢的影响。方法　采用自行研制的动态应变三维细胞培养装置 ,将机械应变作用于肌腱细胞 -支架材料复合物。结果　机械应变对肌腱细胞分裂、DNA合成和代谢的影响与应变作用的强度、频率、周期及作用时间有关。采用特定的应变 (10 %伸长、0 .2Hz、每小时作用 15分钟 )作用 48小时 ,加载组肌腱细胞数和 3H标记的胸腺嘧啶核苷掺入量都明显高于对照组(P<0 .0 5 ) ;在应变作用下 ,其细胞形态呈扁平形 ,沿应变方向延伸 ;机械应变还引起 型胶原合成增加 (P<0 .0 5 )。结论　周期性机械应变直接作用于肌腱细胞可以刺激其生长 ,这对于应用机械应变促进组织工程化肌腱的构建具有重要应用价值。     

人端粒酶逆转录酶真核表达质粒转染人成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究

目的　　分析人端粒酶逆转录酶 (h TERT)真核表达质粒 p GRN14 5转染人成纤维细胞的生物学特性。方法　体外分离培养小儿包皮成纤维细胞 ,脂质体法将构建的 p GRN14 5转染人成纤维细胞 ,经潮霉素 B筛选 ,扩增培养阳性克隆。 RT- PCR法、TRAP- PCR法分析细胞端粒酶活性。流式细胞术检测细胞增殖周期及细胞凋亡率 ,对转染后细胞行染色体核型分析及免疫组织化学法检测胶原分泌能力。结果　转染后培养的人成纤维细胞形态与转染前相比无明显改变 ,转染细胞稳定地表达端粒酶活性 ,流式细胞术分析转染前后成纤维细胞的增殖周期无明显改变 ,细胞凋亡率较转染前降低。经 p GRN14 5转染的人成纤维细胞保持正常的二倍体核型 ,具有正常分泌 、 型胶原的能力。结论　 p GRN14 5转染的人成纤维细胞稳定地表达端粒酶活性 ,细胞寿命明显延长。初步证实了用这种方法建立组织工程标准化种子细胞系的可行性     

小肠黏膜下层复合上皮细胞及成肌细胞构建组织工程食管的初步研究

目的初步探索利用小肠黏膜下层(smallintestinalsubmucosa,SIS)作为支架材料,复合食管鳞状上皮细胞与成肌细胞构建组织工程食管的可行性。方法4周龄无胸腺小鼠20只,体重20.0±2.5g,雌雄不限。体外分离、培养人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞,并行5-BrdU标记;制备SIS材料并切割成1cm×1cm大小,在SIS材料同一表面接种两种细胞,待细胞在材料表面贴附后将其植入裸鼠体内深筋膜下,于术后第3天及1、2、3周取材行组织学和抗角蛋白、平滑肌肌动蛋白(smoothmuscleactin,SMA)免疫组织化学观察,以了解食管鳞状上皮细胞、成肌细胞在SIS材料上的增殖、分化情况和复合物在裸鼠体内的血管化情况。结果人胚胎食管鳞状上皮细胞、成肌细胞能够渗透、生长于SIS材料中,并形成数层结构。植入体内第3天可见细胞增殖为多层覆盖于材料表面,并分泌大量细胞间基质。第2周时已经形成7~8层细胞,并伴有血管长入。3周时细胞增殖为十几层,大量血管长入。通过5-BrdU标记抗体染色观察,示SIS支架材料上生长的细胞多为所植入细胞。抗角蛋白,SMA免疫组织化学染色示移植细胞能够在体内分化。结论成肌细胞与鳞状上皮细胞在SIS材料上的复合培养物,在体内能继续增殖分化形成多层细胞结构,并能快速血管化,可用于组织工程化食管的构建。     

疯牛病病原体研究及动物源性医疗器械产品安全性思考

目的 介绍关于疯牛病的基本知识，并对哺乳动物源性医疗器械的安全性评价作简要介绍。方法 查阅近年来对疯牛病、新克雅氏病、朊病毒的研究概况、检测方法、灭活方法，欧美等国对牛羊源性相关材料的控制措施以及国内对相关产品的管理方法相关的文献，综合分析。结果 疯牛病，又称牛海绵状脑病（bovine spongiform encephacitis，BSE）。该病与羊瘙痒病具有同源性，它们与人类克-雅氏病（Creutzfeldt—Jakob disease，CJD）均是海绵状脑组织病变，由Prion蛋白引起。疯牛病主要以缓慢破坏哺乳动物中枢神经系统为特征。结论 由于动物源性医疗器械产品在原材料方面存在疯牛病等人畜共患疾病的风险，同时Prion蛋白对传统的杀灭方法有较强抵抗性，因此，加强对这类产品的源头控制及灭活工艺等生产质量体系的管理是非常重要的，从而保证动物源性医疗器械产品的使用安全有效。     

人端粒酶逆转录酶mRNA导入对人血管内皮细胞生长的影响

目的 寻求使处于生长停滞期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖寿命延长的方法。方法 将体外转录质粒pcDNA3-hTERT用BamHI酶切使之线性化，经T7RNA聚合酶催化以转录合成hTERTmRNA。用脂质体法将hTERTmRNA导入处于生长停滞期的HUVEC。检测hTERTmRNA导入后细胞端粒酶活性表达与细胞生长增殖情况。结果 导入hTERTmRNA后，细胞有端粒酶活性的暂时表达，增殖寿命较单纯用脂质体处理的对照细胞延长了7代。结论 hTERTmRNA导入细胞能可控地、瞬时地重建细胞端粒酶活性，可望广泛应用于人体细胞增殖寿命延长的尝试。