人外周血中树突状细胞的诱导及鉴定

目的　从健康人外周血中诱导高纯度树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法　用贴壁法从健康人外周血获取单核细胞 ,对传统的诱导方法加以改进 ,经 GM- CSF(10 0 ng/ ml)和 IL- 4(5 0 0 U/ m l)持续诱导 7天 ,在此期间不再补充新的细胞因子、新鲜培养基和促成熟因子 ,以获取高纯度 DC。结果　经上述方法处理后 ,从健康人外周血中诱导出了大量高纯度 DC,其能高表达 HL A- 、 类分子、共刺激分子和粘附分子 ,显示出成熟 DC的特征。这些 DC能强烈诱导同种异体淋巴细胞的增埴 ,其内吞能力在第 3天达最高 ,之后明显下降。结论　本研究所建立的从外周血获取大量成熟 DC的方法经济、简便 ,为 DC的深入研究和临床应用奠定了基础     

单抗F（ab‘）2段导向抗肝癌阿霉素免疫毫微球的制备及其体外杀伤癌细胞作用

目的：制备人肝癌特异性单克隆抗体HAb18的F（ab‘)2片段导向抗肝癌阿霉素（ADR）白蛋白（HSA）免疫毫微球（HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP)，并研究其体外靶向肝癌细胞和杀伤肝癌细胞的作用。方法：采用乳化高温固化法制备阿霉素白蛋白毫微球（ADR－HSA－NP）后，应用改进的N－琥珀酰亚胺基－3－（2－吡啶二硫），丙酸酯（SPDP）法制备HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP。在光镜和电镜下观察体外HAb18 F(ab‘)2-ADR-HSA-NP和ADR－HSA－NP与肝癌细胞株SMMC－7721的结合特性，并用3H－TdR法测定两种微球体外杀伤肝癌细胞株SMMC－7721的作用。结果：在荧光染色后，HAb18F(ab‘2)-ADR-HSA-NP表面发出明亮黄绿色荧光，而ADR－HSA－NP未见荧洮，HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP能结合肝癌细胞株SMMC－7721，且能呈剂量依赖地有效杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，而ADR－HSA－NP不能结合和明显杀伤肝癌细胞株SMMC－7721，两种微球均不能结合和杀伤人大肠癌细胞株SW1116。结论：HAb18F(ab‘)2-ADR-HSA-NP具良好的体外特异性结合并杀伤人肝癌细胞。     

去C末端JAK3基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达

目的 :构建去C末端Jak3重组逆转录病毒载体 ,获得能稳定产生去C末端Jak3基因的重组逆转录病毒的细胞株 ,为利用去C 末端Jak3对白血病进行基因治疗的实验研究打基础。方法 :用限制性内切酶从质粒PcJak3(ΔC)中切出目的基因并从凝胶中回收该目的基因片段 ,连接到逆转录病毒载体PLXSN多克隆位点上构建重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,通过转化感受态细菌后氨卞青霉素筛选、酶切及DNA测序鉴定 ;用脂质体LIPOFECTAMINE转染包装细胞PA317细胞并用G4 18筛选抗性细胞 ,转染的包装细胞包装出病毒粒子 ,同时用PCR方法检测PA317阳性细胞中是否插入目的基因片段 ;用该病毒感染靶细胞NIH3T3,G4 18筛选抗性克隆 ,检测出病毒滴度 ;经免疫沉淀 (IP)、SDS PAGE电泳、Westernblotting检测NIH3T3细胞中Jak3(ΔC)的表达情况。结果 :①重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC)酶切和DNA检序均表明已含有 2 796bp的Jak3(ΔC)基因 ;②转染的PA317阳性细胞经PCR扩增后得到与目的基因一致的片段 ;③病毒滴度为 1.2～ 2 .0× 10 4CFU/ml;④转染的NIH3T3细胞中表达出了Jak3(ΔC)蛋白 ,其分子量为 10 7KD。结论 :我们已成功构建了去C 末端Jak3重组逆转录病毒载体PLJak3(ΔC) ,并得到稳定产生病毒粒子的PA317细胞克隆 ,为利用Jak3(ΔC)对白血病     

免疫毫微粒的内化作用及其逆转人肝癌细胞多药耐药性的研究

目的：观察免疫毫微粒能否内化进入人肝癌细胞及其多药耐药性(MDR)细胞，研究免疫毫微粒能否逆转MDR。方法：将抗人肝癌阿霉素白蛋白免疫毫微粒(HAbl8-ADR-HSA-NP)与人肝癌株SMMC-7721细胞及其MDR细胞(SMMC-7721／MDR^ )共同孵育，采用扫描电镜，激光共聚焦显微镜，透射电镜技术观察免疫毫微粒与靶细胞的结合及免疫毫微粒的内化过程；采用MTT比色分析法测定免疫毫微粒对靶细胞的杀伤率。计算免疫毫微粒对靶细胞的IC50和MDR细胞的耐药倍数(RF)。结果：激光共聚焦显微镜观察，SMMC-7721细胞表面和胞浆中均有许多荧光毫微粒；透射电镜观察。免疫毫微粒与SMMC-7721细胞及其MDR细胞在37℃孵育后，胞浆中可见有免疫毫微粒，随时间的延长细胞变性损伤越严重；当SMMC-7721及其MDR细胞预先经HAbl8抗体处理，再与HAbl8-ADR-HSA-NP孵育，则胞浆中未见免疫毫微粒；扫描电镜显示，多个HAbl8-ADR-HSA-NP紧密结合在SMMC-7721／MDR^ 表面。MDR细胞对于免疫毫微粒的耐药倍数(2.1)较其对于游离ADR(4．4)明显降低。结论：人肝癌特异性阿霉素白蛋白免疫毫微粒通过抗体介导能特异性内化进入人肝癌SMMC-7721细胞及其MDR细胞；该免疫毫微粒能增强MDR细胞对阿霉素杀伤的敏感性。有一定程度逆转MDR作用。     

超声非结构异常胎儿的遗传学异常类型及临床结局分析

目的:分析超声非结构异常胎儿的基因组异常发生率,及其对妊娠结局的影响。方法:采用回顾性研究,收集2016年1月至2019年1月在福建省妇幼保健院产前诊断中心因超声非结构异常而进行介入性产前诊断的631例孕妇。根据孕周不同抽取羊水标本或脐带血标本进行染色体核型分析及单核苷酸多态性微阵列分析（SNP-array）。按超声非...     

一个亨廷顿病家系的HTT基因诊断研究

亨廷顿病(huntington disease,HD)是一种常染色体显性遗传的中枢神经系统退行性病变,临床上主要表现为进行性的运动障碍、精神异常和智能衰退[1].     

树突状细胞负载肝癌相关抗原后成熟调控的研究

目的 研究树突状细胞（DC）负载肝癌相关抗原后的成熟调控。方法 用SDS－PAGE制备电泳纯化牛结核分枝杆菌热休克蛋白70，用其诱导DC的分化与成熟。结果 DC负载肝癌可溶性抗原后，10％2细胞失去了DC特征，同时其表面CD54（90．0％），CD83（78．0％），CD86（85．0％）分子表达下降；牛分枝杆菌卡介苗－热休克蛋白70（BCG HSP70）的活化有利于负载肝癌可溶性抗原后的DC维持其特异性标志，同时DC表面CD54（92．0％），CD83（90．0％），CD86（91．0％）分子表达增加，DC诱导同种异体淋巴细胞转化的能力增加，淋巴细胞增殖加快，从而促进DC成熟，增加其抗原呈递能力。结论 预示BCG HSP70有可能成为促进DC活化和成熟的另一重要分子。     

载~(131)I和阿霉素“双弹头”免疫毫微粒的抗癌作用

我们采用氯胺T法将放射性核素131I结合到载阿霉素(ADR)的人血清白蛋白免疫毫微粒(ADR—HSA—NP)上,构建了载131I和ADR“双弹头”免疫毫微粒(131I-HAb18-ADR-HSA-NP),并进行了体外培养细胞及荷瘤裸鼠体内抗人肝癌细胞株作用的观察。 一、材料和方法 1.主要材料:ADR-HSA-NP,本室自制;抗人肝癌单抗HAb18,第四军医大学