BMP—2在成纤维细胞对BMP—3表达的调节作用

目的：观察在BMP－2作用下,成纤维细胞表达BMP－3的情况,探讨BMP－2促进成纤维细胞成骨表型表达的机制。方法：向培养的成纤维细胞内添加BMP－2,当细胞生长到60％时免疫组化观察正常与BMP－2作用下的成纤维细胞内表达BMP－3的情况。结果：下成纤维细胞内无BMP－3表达,在BMP－2作用下成纤维细胞出现BMP－3表达。结论：在成纤维细胞,BMP－2可促进BMP－3的表达。     

人牙周膜成纤维细胞与牙龈成纤维细胞差异表达一条新基因的克隆

目的：克隆人牙周膜成纤维细胞（ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＰＤＬＦ）与牙龈成纤维细胞（ｇｉｎｇｉｖａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ,ＧＦ）差异表达的新基因。方法：采用基于ＰＣＲ和消减杂交的基因克隆技术构建体外培养的人ＰＤＬＦ与ＧＦ差异表达基因的扣除文库,采用酶切和反向杂交的方法筛选目的的克隆,并进行测序和计算机分析。结果：从构建的人ＰＤＬＦ与ＧＦ细胞差异表达基因的扣除     

基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应

目的 骨髓是机体重要的造血器官,其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞,骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用,为提高骨形成蛋白（ＢＭＰ）修复骨缺损的能力。方法 本实验观察了基因重组人骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ－２,ｒｈＢＭＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结果 低浓度的ｒｈＭＢＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结     

自拟桔梗蜈蚣散配合穴位敷贴对咳嗽变异型哮喘缓解期的治疗作用

正咳嗽变异型哮喘(cough variant asthma,CVA)是以慢性咳嗽为主要或唯一表现的特殊类型哮喘[1],并常反复发作。CVA缓解期的治疗对防止或减少急性发作有重要作用。笔者运用自拟桔梗蜈蚣散配合穴位敷贴治疗CVA缓解期疗效显著,现报道如下。1临床资料1.1一般资料154例均为2005年9月-2011年9月天水市第四人民医院呼吸科门诊患者。按门诊顺序号随机分为3组。治疗组52例,其中男28例,女24例;年龄16~69岁,平均(46.3±7.8)岁;病程65~131 d,平均(112.67±28.12)d。     

人防御素-α克隆表达纯化及生物活性初步检测

防御素（Defensin）是一类阳离子大环形多肽,在人体多种器官和组织广泛存在,起着重要的屏障防御作用,对G＋/-菌、真菌及病毒都有杀灭作用.临床观察表明,测定血浆及各种体液中防御素的改变有助于某些炎症性疾患的诊断,如脓毒症、细菌感染及早产等.此外,提纯或重组防御素作为“超级抗生素”来取代传统的抗生素已成为药学界的研究热点.本研究拟在大肠杆菌中表达人防御素-α,建立稳定表达的工程菌和纯化、复性技术途径,获得活性蛋白,为进一步研究提供材料.     

携载rhBMP-2微球的新型复合人工骨的释药及成骨活性研究

目的 制备一种具有良好降解性和成骨活性，可注射的自凝固新型骨修复材料。方法制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合。制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。测定了复合材料释药速度，将复合材料及rhBMP-2-CPC分别植入兔双侧股骨髁骨缺损区域，通过X线、组织学观察比较不同时期材料的降解及成骨情况。结果 复合材料各时间点的体外释药量均大于单纯rhBMP-2／CPC组．与单纯rhBMP-2／CPC材料相比较，复合材料植入体内后不同时间点材料的降解和新骨生成均高于单纯rhBMP-2／CPC植入组。结论 rhBMP-2／PLGA微球的掺入可明显加快rhBMP-2的释放。提高材料的降解速度和成骨活性。     

人骨形态发生蛋白—2真核表达载体的构建

目的 构建人骨形态发生蛋白－2（hBMP-2）真核表达载体,并观察其在真核细胞内表达的可能性。方法 Sal Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切含有hBMP－2全长cDNA的pUC19,回收1.24kb片段,将其连入真核表达载体pcDNA3,构建重组子pcDNA3-hBMP-2。将重组子转化细菌,扩增后提取质粒,分别用Ecor Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切和Xho Ⅰ单酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定。将重组子转染成纤维细胞,G418筛选形成阳性克隆后继续培养4周行细胞原位杂交和免疫组织化学染色。结果 琼脂糖电泳显示：用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后可形成两条带,大小分别为1.3kb和5.38kb,而Xbo Ⅰ酶切位点消失,符合物理图谱,表明载体构建成功,转染后G418筛选所获阳性克隆,继续培养4周,的位杂交和免疫组织化学染色,结果表明hBMP-1基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达。结论 成功构建hBMP-2真核表达载体,该载体可在真核细胞内表达,为将来骨损伤的基因治疗奠定了一定的实验基础。     

rhBD3-BPI对7株临床分离革兰阴性菌的抗菌活性

目的:探讨rhBD3-BPI是否对革兰阴性菌具有抗菌活性.方法:采用密度梯度稀释法检测rhBD3-BPI对铜绿假单胞菌标准株和不同来源的临床多药耐药革兰阴性菌株的抗菌活性,确定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC).以基因工程重组的人β-防御素3(rhBD3)作为对照.结果:rhBD3-BPI对各待检菌的MIC在1～4 μg·mL-1之间,MBC在4～8 μg·mL-1之间.rhBD3对革兰阴性菌的MIC在4～8 μg·mL-1之间,MBC在8～16μg·mL-1之间.rhBD3-BPI和rhBD3对G-菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度有统计学差异(分别为P=0.006 0、P=0.005 3),rhBD3-BPI对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度低于rhBD3对G-1菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度.结论:rhBD3-BPI和rhBD3均对革兰阴性细菌具有显著的抗菌活性,两者之间具有显著差异.     

联合使用骨形态发生蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对成纤维细胞成骨表型的影响

目的研究联合使用骨形态发生蛋白(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成纤维细胞成骨表型的影响。方法向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-2和bFGF,观察成纤维细胞形态学变化、碱性磷酸酶(ALP)活性与染色的情况和骨钙素表达的变化,同时观察细胞增殖周期的变化。结果在两种因子作用下,成纤维细胞由长梭形向多角形方向转化,细胞体积增大、细胞内颗粒增多;成纤维细胞ALP活性增高、骨钙素表达增多,细胞内ALP染色加深;细胞增殖周期缩短。结论联合使用rhBMP-2和bFGF可以促进成纤维细胞成骨表型表达并促进细胞增殖。