半巢式甲基化特异性聚合酶链反应对肿瘤细胞株p15基因甲基化或缺失状态的检测

本研究分析多种恶性肿瘤细胞株的p15基因甲基化或缺失状态,阐明p15基因甲基化或缺失在肿瘤发生发展中的作用。运用半巢式甲基化特异性聚合酶链反应(hemi-nested methylation specific polymerase chain reaction,hn-MSP)分析20种恶性肿瘤细胞株和正常人单个核细胞或细胞株的p15基因甲基化及缺失状态,并评价该方法的敏感性和特异性。结果表明:在所有的细胞中,Molt-4、Raji、KG1、CA46、SW480、NCE、SMMC-7221、NCI-H446细胞为部分甲基化,hn-MSP检测p15基因甲基化敏感性可达到1×10-5。正常人单个核细胞、HL-60、HeLa、HepG2、293、SGC7901、U266、CEM细胞则为p15非甲基化,而K562、NB4、GMC、Jurkat似乎显现p15基因缺失或突变。结论:p15基因甲基化或缺失在多种肿瘤,特别在恶性血液病中有较高的发生率,且对疾病的进展及预后有密切的关系,hn-MSP具有较高的敏感性和特异性,值得在临床推广应用。     

儿童患者中对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶基因型研究

目的研究儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的基因型。方法本研究收集了2003年12月至2005年11月我院住院患儿中分离出的对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌59株。使用E试验法检测产金属酶的耐药表型，PCR技术检测编码金属酶的IMP、VIM、SPM和GIM4种基因型。PCR反应产物进行纯化后，使用双脱氧末端终止法进行DNA测序。将得到的拼接序列与GenBank中Blast进行同源分析，确定其基因亚型。结果59株对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌中，纸片法检测金属酶表型结果阳性29株，占49．2％。PCR检测金属酶基因型阳性39株，占66．1％，其中IMP型阳性35株，占89．7％，VIM型阳性4株，占10．3％。未检测出SPM和GIM型金属酶。测序结果显示，IMP型测序结果均为产IMP．1亚型金属酶的绿脓假单胞菌。VIM型测序结果均为产VIM-2亚型金属酶的绿脓假单胞菌。结论儿童患者中对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌，产金属酶率高于成人报道。产生的金属酶同时存在IMP-1和VIM-2两种基因型，其中以IMP-1亚型为主，少部分为VIM-2亚型。产金属酶是儿童患者对碳青霉烯类抗生素耐药的绿脓假单胞菌的重要耐药机制。在儿科进行对碳青霉烯类耐药的绿脓假单胞菌产金属酶的监测十分重要。     

儿童轮状病毒合并细菌性腹泻病实验室检查及临床分析

感染性腹泻病是一组广泛分布并流行于世界各地的肠道传染病,其发病率高,传播速度快,对儿童的健康危害尤其严重.引起儿童腹泻的病原微生物主要包括细菌、病毒、原虫和真菌等,其中以细菌性腹泻病[1]及A群轮状病毒(RV)感染性腹泻病居多[2].然而近年来我们在临床工作中发现了部分RV与细菌混合感染引起儿童严重腹泻的病例,这在国内尚很少报道,本研究对这部分病例进行了总结分析,旨在提高对RV与细菌混合感染所致儿童腹泻病的认识.     

巢式MS-PCR法检测恶性血液病细胞株APC基因启动子甲基化状态

本研究旨在应用巢式甲基化特异性PCR（nMS—PCR）法检测10种恶性血液系统肿瘤细胞株APC基因启动子的甲基化状态,并探究其在肿瘤发生发展中的作用,同时筛选出APC基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,将其作为研究基因甲基化与表达关系的细胞模型。采用nMS—PCR扩增亚硫酸盐修饰后的10种肿瘤细胞株基因组DNA,检测其APC基因启动予区CpG岛的甲基化状态。结果表明,CA46、U266、Molt4、K562、HL-60、CEM、AKR、U937、Raji细胞的APC基因启动子区均未甲基化,而Jurkat细胞的APC基因启动子区出现甲基化。结论：用nMS—PCR可以准确地检测出恶性血液病细胞株APC基因的甲基化状态,该方法操作简便,可用于检测各种肿瘤细胞基因的甲基化状态。     

MicroRNA-143在急性白血病患者与正常人骨髓细胞中的差异表达及意义

microRNA(miR)与急性白血病的发生密切相关.为分析急性白血病患者与正常人骨髓细胞中miR-143的差异表达情况,常规提取50例急性白血病患者及20例正常人骨髓细胞中的总RNA,应用实时荧光定量PCR的方法检测标本中miR-143的表达状况.结果表明:急性白血病患者骨髓细胞中miR-143表达明显下调(p<0.05);化疗缓解后表达明显上调;miR-143的表达与靶基因DNMT3A呈负相关.结论:miR-143在白血病病人骨髓细胞中的表达下调,这可能与白血病的发生发展有关.     

Couinaud肝段在CT图像上的划分

为给肝内占位性病变的ＣＴ定位提供解剖学依据，利用２０例腹部连续横断层标本和１０例活体正常肝的ＣＴ图像，研究了Ｃｏｕｉｎａｕｄ肝段在ＣＴ图像上的划分。正中裂为下腔静脉左前壁至肝中静脉或胆囊的连线；左叶间裂的上部为左叶间静脉至下腔静脉左前壁的连线，门静脉左支脐部和肝圆韧带裂是其中、下部的天然标志；肝左静脉行于左段间裂内；右叶间裂为肝右静脉至下腔静脉左前壁的连线；肝门或门静脉右支是右段间裂的标志；背裂为下腔静脉右缘至静脉韧带裂右端或门静脉的连线。本文还探讨了易致错分肝段的一些因素。     

落花生枝叶正丁醇部位的化学成分研究

目的 研究落花生枝叶的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、反相硅胶柱色谱,Sephadex LH-20柱色谱等方法 分离纯化,根据化合物的波谱数据鉴定结构.结果 从落花生枝叶水提取物中分离鉴定了17个化合物,本实验主要研究从正丁醇萃取部分分离得到的4个降倍半萜类化合物:落花生苷A(arachiside A,Ⅰ)、狗筋蔓内酯(cu-cubalactone,Ⅱ)、长春花苷(roseoside,Ⅲ)、柑橘苷A(eitroside A,Ⅳ).结论 化合物Ⅰ为新的化合物,命名为落花生苷A(arachiside A),化合物Ⅱ～Ⅳ为首次从该属植物中分离得到.     

内镜超声检查和多层螺旋CT对胃癌术前T、N分期的比较研究

目的探讨内镜超声(endoscopicultrasonography,EUS)与多层螺旋CT(multi slicespiralCT,MSCT)在胃癌术前T、N分期中的临床应用价值。方法2000年10月至2002年5月,对89例活检证实的胃癌病人术前分别行内镜超声和多层螺旋CT检查,并与手术病理结果对照。结果EUS对胃癌术前T分期的准确率为75.6%,其中T176.5%,T268.8%,T384.4%,T464.7%;MSCT分别79.3%,58.8%,62.5%,90.6%和94.1%。两者差异无统计学意义(P>0.05)。EUS对胃癌术前N分期的准确率为57.5%,其中N095.8%,N145.8%,N232.0%;MSCT分别78.1%,70.8%,75.0%和88.0%。EUS和MSCT对胃癌淋巴结转移的敏感性分别为61.2%和91.8%。EUS对N0分期的准确率显著高于MSCT(P<0.05),MSCT对N和N2分期的准确率及淋巴结转移的敏感性均显著高于EUS(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论内镜超声检查与多层螺旋CT对胃癌术前TN分期均有较高的准确性。     

胃癌组织中p53蛋白表达的临床意义

目的：观察ｐ５３蛋表达通融作为判断胃癌病的预后指标,为该指标的合理应用提供科学依据。方法 利用免疫组化技术检测１７１例胃癌切除标本内ｐ５３蛋白的表达,分析ｐ５３蛋白表达与临床病理及承后之间的关系,探讨ｐ５３蛋白表达与传统ＴＮＭ分期在预后中的关系。结果 ４３．３％的胃癌组织有ｐ５３蛋白表达,弥漫型胃癌中的ｐ５３蛋白表达率高于肠型胃癌（Ｐ〈０．０５）;有ｐ５３蛋白表达的胃癌组织易于发生洒巴结转移（Ｐ〈     

红霉素逆转人胃癌细胞株多药耐药性的研究

目的：研究以红霉素逆转人胃癌SGC7901／ADM亚株所呈现的多药耐药性。方法：应用递增阿霉素剂量的方法，诱导建立人胃癌细胞耐药亚株。试以红霉素逆转该耐药亚株对阿霉素等抗癌药物的耐药性，以MTT法测定各药之．细胞毒作用，用LSAB法检测亲本(SGC7901)与耐药细胞亚株(SGC7901／ADM)之P-糖蛋白的表达水平。结果：体外诱导建立之人胃癌细胞耐药亚株SGC7901／ADM，对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞SGC7901提高了9.l倍；前者同时对长春新碱、鬼臼乙叉甙呈交叉耐药性，而对丝裂霉素和顺铂则不显示交叉耐药性。红霉素浓度为273、545、1090μmol／L时．均可提高阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉甙对SGC7901／ADM耐药细胞亚株的细胞毒作用。免疫细胞化学研究显示，约86％的耐药亚株表达P-糖蛋白，而亲本细胞则均为阴性。结论：非毒性剂量的红霉素可以逆转人胃癌耐药细胞株的耐药性。为临床上胃癌常规化疗方案中加用红霉素提供了实验依据。