人表皮生长因子基因体外转染人角质形成细胞的研究

基因治疗已开始用于多种疾病的治疗,而表皮作为人体最易获取的组织则显示了良好的应用前景 [1]。我们拟采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人表皮生长因子 (hEGF)及其信号肽 cDNA,并构建到 pBK CMV穿梭质粒中,再经脂质体 LipofectAMINE介导转染培养的人角质形成细胞,以期获得真核表达的 hEGF蛋白,为表皮组织基因治疗的研究打下基础。 一、材料和方法 (一 )主要试剂：限制性内切酶、 T4 DNA连接酶及 PCR试剂盒等均为美国 Bio Rad公司产品;逆转录试剂盒为 Boehringer Mannheim公司产品; DMEM、 Opti MEM…     

皮肤结节性淀粉样变伴Sjgren综合征一例

患者女,４８岁。双小腿肿胀９年,皮下结节７年。１９８９年夏,双小腿尤以踝关节明显出现水肿,反复发生。１９９１年,双小腿屈侧、伸侧有数个蚕豆大结节,无自觉症状。结节缓慢增大、增多,部分融合成斑块,轻压痛。结节从不消退,不破溃,表面干燥,色渐增深。结节周围有时有出血点,可自行消退。１９８８年因两侧腮腺反复肿痛１０年,行右腮腺切除术,病理诊断:慢性腮腺炎。１９９０年始有口干症状,喜饮水,有声音嘶哑,龋齿,眼干不适,视物模糊。从无关节疼痛、肿胀史。体检:体温３７．２℃,全身浅表淋巴结不肿大。毛发枯黄,顶部稀疏。球结膜无充血,角…     

大疱性类天疱疮的诊疗进展

介绍大疱性类天疱疮诊断的实验室检测手段,在此基础上总结可靠的临床诊断标准,评价与大疱笥类天疱疮预后相关的特异性指标,同时介绍其临床治疗进展及疗效。其中详细描述了各种免疫学诊断技术,临床诊断标准和皮质类固醇联合免疫抑制剂的综合治疗方案。     

免疫磁性分离技术分离,纯化小鼠表皮郎格罕细胞

为了探讨表皮郎格罕细胞（ＬＣ）的培养方法，研究其功能特点，须将ＬＣ与表皮其它细胞相分离。我们在Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心技术纯化ＬＣ的基础上，采用免疫磁性分离技术，取得了更为满意的结果。通过生物素－亲合素的介导，用结合大鼠抗小鼠细胞表面Ｉａ抗原的单抗的免疫磁珠吸附ＬＣ表面，经高强度磁场筛选，从而将ＬＣ从表皮细胞悬液中分离、纯化出来。结果表明，ＬＣ的纯化率超过９９％，纯化后细胞活性超过９５％，产率超     

人表皮生长因子基因的克隆及其真核表达载体的构建

人表皮生长因子（ｈｕｍａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｈＥＧＦ）具有促进表皮细胞增殖的作用，与免疫性皮肤病及创面组织修复有着密切的关系。随着分子生物学理论和技术的发展，人们对外源性基因在真核系统中表达的机理有了进一步了解〔１〕。为了进行ｈＥＧＦ基因的真核表达及表皮组织基因治疗方面的研究，我们采用逆转录ＰＣＲ方法扩增了ｈＥＧＦ及其信号肽基因，并选用ｐＢＫＣＭＶ穿梭质粒构建了ｈＥＧＦ基因真核表达质粒。１　材料和方法１．１　主要试剂限制性内切酶ＮｈｅⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ及Ｔ４Ｄ…     

表皮:基因治疗的理想靶器官

本文介绍了近5～10年来表皮组织基因治疗研究的某些进展，从组织定位、培养条件、基因转染方法、基因表达效率及基因治疗适应证等方面比较了表皮作为基因治疗靶器官的优越性。     

银屑病患者单核细胞诱生的郎汉斯细胞特征分析

目的 从郎汉斯细胞（ＬＣ）的分化发育过程探讨其在银屑病患者体内异常的原因。方法 将外周血单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ＋ＴＧＦ－β１联合培养５ｄ,分别通过流式细胞仪、混合淋巴细胞反应分析其表型及其抗原提呈功能,并通过ＥＬＩＳＡ法检测其分泌功能。结果银悄病患者单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４＋ＴＧＦ－β１联合培养后能分化发育为具有ＬＣ相对特征性抗原标志ＣＤｌａ的细胞,其比例、表型特征、胞内合成及分泌ＩＬ－     

cDNA代表性差异分析法的建立及克隆银屑病相关基因片段初探

目的 通过ｃＤＡＮ代表性差异分析法（ｃＤＮＡ－ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）来寻找银屑病皮损组织中特异表达的基因片段。方法 用改良的异硫氰酸胍一步法提取银屑病皮损及正常皮扣肤组织的ｔＲＮＡ、ｍＲＮＡ,逆转录后采左减杂交及选择性ＯＰＣＲ扩增相结构基础为ＲＤＡ方法,使含有特定接头的银现组ｃＤＮＡ片段得到人量扩增。结果 通过质量分数１％琼脂糖凝胶电泳及     

表皮：基因治疗的理想靶器官

本文介绍了近５￣１０年来表皮组织基因治疗研究的某些进展，从组织定位、培养条件、基因转染方法、基因表达效率及基因治疗适应证等方面比较了表皮作为基因治疗靶器官的优越性。