应用pcr-sscp技术检测结核分枝杆菌耐链霉素相关基因rpsl和rrs突变

目的 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(pcr-sscp)技术,建立快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsl和rrs突变的新方法.方法 采用常规药敏试验检测112株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的耐药性,建立pcr-sscp法检测耐药相关基因rpsl和rrs的突变.采用pcr直接测序技术(pcr-ds)确定rpsl和rrs基因突变情况并与pcr-sscp法检测结果进行比较.结果 112株结核分枝杆菌临床分离株均携带rpsl和rrs基因,52株(46.4％)对链霉素敏感,其中有1株敏感菌株rrs基因pcr-sscp条带异常,pcr-sscp方法的特异性为98.1％ (51/52).60株(53.6％)结核分枝杆菌对链霉素耐药,用pcr-sscp方法分别检出46株(76.6％) rpsl基因和11株(18.3％)rrs基因条带异常,1株同时出现rpsl和rrs基因条带异常,pcr-sscp检测的灵敏度为93.3％ (56/60).结论 pcr-sscp方法检测结核分枝杆菌耐药相关基因rpsl和rrs突变的特异性和敏感性高,临床上值得推广应用. abstract： objective to establish a novel rapid detection method based on pcr-single-strand-conformational polymorphism (pcr-sscp) to determine mutation of streptomycin-resistance associated rpsl and rrs genes in isolates of mycobacterium tuberculosis (mtb).methods streptomycin-resistance of 112 mtb isolates was detected using the routine drug susceptibility test,and a special pcr-sscp assay was established.the mutations of rpsl and rrs genes in streptomycin-resistant mtb isolates were detected by pcr-sscp and pcr direct sequencing (pcr-ds) ; the results from two techniques were compared.results all isolates had both rpsl and rrs genes.fifty-two isolates (46.4％) were streptomycin susceptible,in which only 1 isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from rrs gene,and the specificity of pcr-sscp was 98.1％ (51/52).sixty isolates (53.6％) were streptomycin-resistant,in which 46 (76.6％) and 11 ( 18.3％ ) isolates presented the abnormal pcr-sscp fragments of rpsl and rrs gene,respectively.one streptomycin-resistant isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from both rpsl and rrs genes.the sensitivity of pcr-sscp was 93.3％ (56/60).conclusion the pcr-sscp that established in this study is a specific and sensitive method for rapid detection of the streptomycin-resistance associated mutations in rpsl and rrs genes of mtb.     

缓慢延长法治疗先天性掌骨短小畸形

采用自行设计的手残指延长器，通过掌骨缓慢延长植骨方法治疗４例（５指）先天性掌骨短小畸形，掌骨平均延长１．８ｃｍ，恢复了掌骨的正常长度，改善了手的外形和功能。     

2010-2011年杭州市636例肺结核患者耐药情况分析

目前，结核病已经成为世界性的公共卫生问题，引起国际社会的极大关注。2007-2008年我国开展了全国结核病耐药基线调查，调查结果显示肺结核患者耐多药率为8.32%，每年新发MDR-TB患者12万例，约占全球每年新发耐多药患者总数（51万例）的1/4，居全球第二位。耐药结核病已经成为我国结核病控制面临的重大挑战，如不能及时控制其流行，将严重削弱我国遏制结核病已取得的成效，阻碍我国控制结核病的进程。近年来，杭州市的结核病流行情况在全国一直处于较为平稳的水平，但随着人口流动的增加，耐药结核病的不断蔓延给结核病控制工作带来了新的威胁与挑战。笔者通过对636株Mtb药敏试验结果进行统计分析，研究杭州市Mtb耐药状况，为耐药结核病的监测和有针对性的治疗结核病患者提供一定的理论依据。     

马尾神经根松弛症的椎管造影诊断研究

报告了１５例马尾神经根松弛症（ＲＮＲ）的椎管造影结果。发现ＲＮＲ均发生于腰椎管狭窄症的基础上，在椎管梗阻上方造影剂呈不规则充盈缺损，马尾神经根呈现波浪状或蛇形卷曲，甚至＂打结＂。腰椎屈曲时，上述影像缓解或消失，而伸展位时又重现或加重。造影检查发现ＲＮＲ的程度与椎管狭窄程度无相关关系。     

基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用

目的 利用多重荧光PCR技术,建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法.方法 以分枝杆菌16S rRNA作为检测靶基因,设计双启动寡核苷酸(DPO)引物和TaqMan探针,探针的5’端分别用FAM 、ROX、HEX和JOE进行荧光标记,3’端标记淬灭荧光.通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增,评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度.采用建立的多重荧光PCR方法,采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本,结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较.采用x2检验比较3种方法的阳性率.结果 该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌,检测灵敏度均为1 ×101 cfu/ml.对68份痰液标本进行检测,结果显示31份检测结果阳性,阳性率45.6％,明显高于涂片染色镜检(阳性率14.7％),差异具有统计学意义(x2=15.4,P ＜0.05),其中28例为结核分枝杆菌,1例为鸟分枝杆菌,2例为胞内分枝杆菌,与细菌培养鉴定方法一致.1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌.结论 本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速,能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌,可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断.     

2014—2018年杭州市肺结核患者的耐药情况及其影响因素分析

目的 分析2014—2018年杭州市肺结核患者对一线抗结核药品的耐药特征及其影响因素,为杭州市防治耐药结核病提供科学依据。方法 收集2014—2018年浙江省中西医结合医院结核病诊疗中心就诊的杭州市全部常住人口中的活动性肺结核患者,共12 851例,纳入结核分枝杆菌培养阳性且对一线抗结核药品药物敏感性试验(简称“药敏试验”)信息全面的3807例患者。通过国家结核病信息管理系统和结核病实验室信息系统(laboratory information system,LIS)收集所有患者的性别、年龄、户籍、职业、治疗分类(初治和复治)、肺部有无空洞、患者来源及现居住地、结核分枝杆菌培养及药敏试验结果。运用单因素和多因素非条件logistic回归分析的方法研究杭州市耐药肺结核患者耐药特征及其影响因素。结果 3807株菌株中,907株(23.82%)对4种一线抗结核药品耐药,耐药顺位依次为异烟肼(18.57%,707例)、链霉素(18.41%,701例)、利福平(12.03%,458例)、乙胺丁醇(6.41%,244例);所有患者的耐多药率和多耐药率分别为11.11%(423/3807)和4.44%(169/3807)。2014—2018年不同年份肺结核患者耐药率分别为22.87%(185/809)、25.55%(198/775)、25.60%(181/707)、23.04%(188/816)、22.14%(155/700),差异无统计学意义($χ^{2}_{趋势}$=4.275,P=0.370);耐多药率分别为11.12%(90/809)、13.16%(102/775)、11.88%(84/707)、11.40%(93/816)、7.71%(54/700),差异有统计学意义($χ^{2}_{趋势}$=11.276,P=0.024)。多因素条件logistic回归分析显示,相对于男性和初治患者,女性和复治肺结核患者是发生耐药的危险因素[OR(95%CI)=1.308(1.111~1.540);OR(95%CI)=4.281(3.498~5.238)];相对于下沙区,居住在其他6个区的结核病患者发生耐药的可能性较大,萧山区和富阳区的风险更高[OR(95%CI)=4.400(2.559~7.565); OR(95%CI)=3.803(2.037~7.098)]。相对于男性、<40岁、初治患者,女性、≥40岁、复治的肺结核患者是产生耐多药的危险因素 [ OR(95%CI)=1.724(1.364~2.178);40~岁组:OR(95%CI)=3.418(1.599~7.305);60~岁组:OR(95%CI)=3.885(1.832~8.239); 复治:OR(95%CI)=7.645(5.984~9.766)]。结论 杭州市应该加强年龄≥40岁、复治、女性、居住在萧山地区、富阳区耐药结核病患者的管理和治疗,是降低杭州市耐药及耐多药结核病产生和传播的关键。     

髌骨不稳治疗的生物力学

髌骨不稳治疗的生物力学上海第二军医大学附属长征医院骨科（２００００３）范大鹏综述包聚良审校髌骨不稳指膝关节伸屈活动时髌骨外移程度加大。当伸直膝关节，髌骨波动外推超过自身宽度的１／２；屈膝３０°时，外推髌骨超过１ｃｍ，或轴位片上两侧髌股关节间隙相差超过...     

髌骨脱位的生物力学重建

报道２０例髌骨脱位，其中习惯性脱位９例，复发性脱位７例，外伤性脱位４例。均行生物力学重建。１３例经平均随访６．４年。按Ｉｎｓａｌｌ标准，优４例（５膝），良４例（５膝），可３例（３膝），差２例（３膝），优良率为６２％。结合髌骨运动力学，探讨了髌骨脱位的发病机制，生物力学重建原则及影响手术成败的因素。