骨膜成骨细胞分离培养的方法

目的：探讨骨膜成骨细胞分离培养的最佳方法,为骨组织工程的研究提供稳定可靠的种子为源,方法：分别以组织块法,酶消化法和联合法分离培养兔骨成骨细胞,观察原代培养的成功率,细胞生长曲线,成骨细胞的表型特征,结果：组织块法原代培养耗时较长,成功率低,酶消化法细胞增殖快但有大量的杂细胞掺入,联合法提高了组织块成活率,并维持了较高的成骨细胞表型,结论：胶原 时预消化的联合法能够在较短时间内获得高纯度的成骨细胞,效果优于传统的组织块法和酶消化法,有望成为骨组织工程种子细胞培养的常规方法。     

柱形藻酸钙载体复合细胞修复异体兔膝关节软骨缺损

目的：应用柱形藻酸钙载体复合骨细胞俱复兔膝关节软骨缺损,为骨关节病的组织工程学修复提供一定的实验依据,方法,应用自行制作的柱形藻酸钙载体复合消化分离的兔关节软骨细胞,共同植入异体兔膝关节软骨缺损处,分别于术后4,8和12wk观察大体标本及组织学修复结果：结果：术后8wk时缺损处可见一定程度的修复,到12wk时大体标本修复较好,修复组织和周围关节面界限不清,组织学见缺损处表现为软骨组织修复,结论：通过短期观察说明藻酸钙可以作为软骨的细胞的革体材料,用于关节软骨缺损修复的组织工程学研究。     

RBX诱骨活性成分的分离与纯化

目的　重组合异种骨 (RBX)作为一种新型植骨材料在临床治疗骨缺损、骨不连等病例中取得了显著疗效 .需进一步研究重组合异种骨中诱骨活性蛋白的相对分子质量范围 .方法　采用肝素亲和层析技术纯化 RBX中诱骨活性蛋白即骨形态发生蛋白 (BMP) ,利用小鼠肌袋实验检测其骨诱导活性 ,再用聚丙烯酰胺电泳 (SDS- PAGE)测量 RBX中诱骨活性蛋白纯化后的相对分子质量 .结果　在纯化近 2 0倍后 ,获得 8.2 3m g高度纯化的蛋白质 ,组织学观察其活性发现植入小鼠股部第 10日 ,有大量软骨细胞及软骨岛的出现 ,在局部区域还可见到条索状骨小梁出现 ,SDS- PAGE电泳发现这种蛋白质的相对分子质量为 35× 10 3,经还原后单体的相对分子质量为 2 2× 10 3.结论　重组合异种骨 (RBX)中 35× 10 3的蛋白质经还原后为 2 2× 10 3,其单独使用具有异位成骨活性 ,为 RBX的临床应用提供了理论依据 .     

生物骨移植材料的灭菌

为寻找用于骨移植材料力的最佳方法和途径。对比研究环氧乙烷及γ射线对生物骨移植材料的灭菌方法及其对诱导成骨活性的影响。方法以金葡萄繁殖体、枯草杆菌黑色变种芽胞及蜡样杆菌芽胞３种标准菌株定量污染复合ＢＭＰ的重组合异种骨（ＲＢＸ）,分别做各剂量组＾６０Ｃｏ－γ射线辐照及ＥＯ气体和试验,计数残存活菌。     

RNA干预法特异性抑制核激活因子受体配体诱导破骨细胞的形成

目的:使用RNA干预来特异性减少核激活因子受体配体的表达从而抑制破骨细胞的形成。方法:实验于2005-01/2006-10在解放军第四军医大学全军骨科研究所完成。①构建由U6启动子引导产生小干预RNA的质粒载体mU6pro-dsRANKL。②按0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0μg的梯度将质粒mU6pro-dsRANKL及对照质粒mU6pro转染大鼠骨髓基质细胞,48h后提取细胞总RNA。③采用Northern blot法检测,以核激活因子受体配体与内参β-肌动蛋白扩增产物的吸光度比值来反映核激活因子受体配体mRNA的表达情况。④再将质粒mU6pro-dsRANKL按0,1.0,2,3μg转染破骨细胞,抗酒石酸染色显微镜下观察。结果:①Northern blot结果:显示转染骨髓基质细胞后细胞中核激活因子受体配体mRNA的表达量随着质粒载体量的增加而减少。②破骨细胞抗酒石酸染色显示:破骨细胞的数量也随着质粒载体量的增加而减少。结论:U6启动子引导产生小干预RNA的质粒载体能有效的减低核激活因子受体配体的表达从而抑制破骨细胞的形成。     

个体化人工半膝关节假体计算机辅助设计和快速成型的基础:股骨髁三维建模

背景:目前保肢方法有异体骨关节置换、人工金属假体置换、肿瘤骨段灭活再植等,各有优缺点。四肢骨肿瘤切除深低温冷冻大段异体骨关节置换术存在异体-自体关节不匹配和后期关节软骨坏死影响关节功能的问题。目的:评估一种由螺旋CT扫描数据获取关节软骨表面轮廓信息的方法,为基于快速成型技术的个体化人工半膝关节研究奠定基础。设计:开放性实验。单位:解放军兰州军区乌鲁木齐总医院创伤一科。材料:实验于2001-09/2003-05在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所和西安交通大学先进制造研究所完成。样本来源:CT扫描对象为25岁健康男性志愿者。方法:采用Picker6000螺旋CT对股骨远端进行层厚1mm扫描,在Picker6000CT机的VoxelQ图像工作站进行三维容积重建,之后对重建数据间隔0.1mm下载二维断层图像。自行开发数据格式转换软件,对下载图像进行滤波、去噪等处理,求出断面图像的二维边缘轮廓矢量化数据,输入美国Imageware公司Surfacer9.0软件进行矢量化三维重建。然后通过对关节软骨轮廓的识别及假体设计需要,提取出感兴趣的关节软骨表面轮廓的三维图像,用于个体化人工半膝关节的计算机辅助设计。主要观察指标:CT图像的矢量转换和股骨髁三维重建矢量图像。结果:利用自主开发的医学图像矢量转换软件,实现了CT图像数据的矢量转换,在Surfacer9.0三维处理软件中构建出个体化股骨髁三维实体模型,并根据设计需要进行编辑,提取出可进行人工半膝关节假体计算机辅助设计需要的关节软骨三维模型。所构关节面轮廓可进一步处理,从而完成人工半膝关节假体的计算机辅助设计;其文件格式为.stl格式,可直接被快速成形软件识别和用于工程学制造。结论:由螺旋CT数据进行关节软骨外形轮廓的矢量化重建可获得精确的关节软骨轮廓三维实体模型,模型可编辑性强,为复合大段异体骨移植的人工半膝关节假体的计算机辅助设计和快速成型制造打下了基础;用此方法进行医学图像信息的矢量转换简单易行,在骨科、口腔颌面外科生物制造领域有良好的应用前景。     

低强度脉冲超声波刺激对人骨髓基质细胞和骨膜细胞生物学效应的影响

目的研究低强度脉冲超声波（LIPUS）对体外分离培养的人骨髓基质细胞、骨膜细胞生物学效应的影响，探讨其促进骨折愈合的相关机制。方法采用辐射强度为30mW／cm^2的脉冲超声波分别作用于体外培养的人骨髓基质细胞、骨膜细胞（上述细胞根据LIPUS每天作用时间再分为5min／d组，10min／d组及20min／d组），并于不同时问点检测其对细胞生长、分化等主要相关指标的影响。结果各LIPUS实验组骨髓基质细胞、骨膜细胞DNA合成量与空白对照组比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；骨膜细胞经LIPUS作用后，其ALP活性、骨钙素分泌水平及钙结节形成均显著增强（P〈0．05），而骨髓基质细胞经LIPUS作用后．其细胞分化标志物均无明显改变（P〉0．05）。结论LIPUS能够促进人骨膜细胞向成骨细胞分化，这可能是其促进骨折愈合的相关生物学机制之一。     

庆大霉素重组合异种骨在犬肢体Ⅲb炸伤中抗感染的实验研究

目的　探讨庆大霉素重组合异种骨复合体 (G -BRX)在犬四肢爆炸伤中抗感染能力。方法　炸伤试验犬左后肢。造成Ⅲb骨折 ,外固定架固定。 3d后取出骨折碎片 ,人为的造成一约 1 5cm× 1cm皮质骨骨缺损 ,分为两组 ,A组局部运用G -BRX10粒 ,B组为对照 ,运用自身骨碎片。两组局部均运用金葡菌 5× 10 6CFU ,而后用游离肌皮瓣覆盖创面。术后 6个月观察各组骨髓炎发生率。结果　A组仅有 1例感染 ,B组有 7例感染 ,二者有统计学差异。结论　庆大霉素重组异种骨复合体在爆炸伤创面的早期修复中可有效的防治感染 ,是骨缺损早期修复的一种良好材料。     

牙本质基质蛋白与硬组织矿化

牙本质基质蛋白是矿化组织特异性非胶原基质蛋白的主要成员之一,在启动硬组织(牙本质、骨基质等)细胞外基质的正常生物矿化,调控矿化结晶形态及晶体生长速度,维持矿化组织结构完整性,传导机械应力等方面都起着重要作用。     

BCBB/BMP/bFGF复合物修复股骨头坏死模型的成骨观察

目的 观察双相陶瓷生物骨(BCBB)、骨形态发生蛋白(BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fi-broblast growth factor,bFGF)复合物修复股骨头坏死(FHN)模型病灶清除区缺损,评价该复合物修复FHN的成骨作用.方法 取32只新西兰成年大白兔共64侧股骨头,微波灭活建立股骨头坏死模型,随机分为A、B、C、D 4组,每组16侧.A组为空白对照,B组植入BCBB/BMP,C组植入BCBB/BMP/bFGF,D组植入自体松质骨.术后2、4、8和12周分批处死动物,每组每次处死4只.行股骨头大体及解剖观察、X线摄片、组织学观察、钙含量及钙磷比检测.结果 ①股骨头大体及解剖观察:A组8周和12周各有1侧股骨头塌陷;B组12周时植骨区与宿主骨界限依然存在;C组及D组12周时植骨区与宿主骨界限不清.②X线摄片:A组12周时缺损仍然存在,有1侧股骨头塌陷;B组12周时骨移植区与宿主骨界限仍然存在;C组2周时骨移植区呈高密度影,与宿主骨界限清晰可见,8周时骨移植区密度低于宿主骨,与宿主骨界限模糊;D组12周时骨移植区密度与宿主骨相当,与宿主骨界限不清.③组织学新骨形成面积比较:8、12周时C组优于B组,且差异有显著性(P<0.05),C组、D组间差异无显著性(P>0.05).④X射线能谱分析:2、4和8周时B组、C组钙含量及钙磷比大于D组,与D组间比较差异具有显著性(P<0.05).结论 BCBB是生长因子的良好吸附载体,适宜新骨长入.BCBB/BMP/bFGF复合物具有较强的成骨能力.假如其安全性得到进一步证实,则有望为临床上FHN治疗提供一种有效的途径.