激素联合内毒素所致骨坏死微循环障碍超微结构观察

目的:观察激素联合内毒素所致骨坏死骨内微血管内皮表面的超微结构损害和血栓形成. 方法:实验动物分为模型组和正常对照组. 模型组前2 d间隔24 h于静脉缓慢注射脂多糖(LPS),每次剂量30 μg/kg;第3～8日静脉注射地塞米松,1次/d,剂量7.5 mg/kg. 对照组给予生理盐水0.5 mL/kg. 满8 wk时取材前,股骨头压力灌注肝素钠、100 mL/L中性甲醛固定液. 一半股骨头标本制备脱钙切片,苏木素-伊红染色,观察骨坏死情况. 另一半标本制备不脱钙切片,脱掉包埋剂,临界点干燥、喷金、扫描电镜观察软骨下微血管内皮表面超微结构改变. 结果:模型组股骨头软骨下微血管内皮表面凹凸不平,管腔不规则,可见管腔填塞、血栓形成;此结果与组织学观察结果一致. 结论:激素联合内毒素所致骨坏死微循环障碍的主要表现为微血管内皮损伤和微血栓形成.     

骨保护素对破骨细胞分化和骨吸收活性的抑制作用

背景：骨保护素(osteoprotegerin，OPG)可抑制破骨细胞的分化，抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡，在骨质疏松、类风湿性关节炎、癌症骨转移的领域有潜在的应用价值。目的：鉴定在CHO细胞中表达的人骨保护素生物学活性。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：实验在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成，研究对象：人骨肉瘤细胞株MG63、中国仓鼠CHO细胞株、克隆质粒pUC19及真核表达质粒pcDNA3为本室保存，12只6～8周龄BABL／c雄性小鼠由本校动物中心提供。干预：RT-PCR法获得人OPG编码区cDNA并构建真核表达载体，在脂质体介导下转染CHO细胞，经Western blot鉴定筛选稳定表达OPG的细胞系。获取含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液，实验组：体外培养的鼠破骨细胞培养基中加人含有OPG蛋白的条件培养基浓缩液。对照组1只加入转染pcDNA3空载体的CHO细胞培养基的浓缩液。对照组2只加入完全培养基。主要观察指标：观察人OPG对破骨细胞的分化和骨吸收的影响。结果：转染人OPG编码区基因的CHO细胞能分泌表达OPG。小鼠骨髓细胞在la，25(OH)zD3(1&;#215;10^-8mol／L)的存在下可稳定分化出具有骨吸收功能的破骨细胞样细胞，在该培养体系中加入含有OPG的CHO细胞培养上清浓缩液，TRAP染色阳性细胞数明显减少(t=5．547，p&;lt;0．01)，骨吸收陷窝的数量显著减少(t=3．409，P&;lt;0．01)。结论：人骨保护素可在CHO细胞中分泌表达，并对体外培养状态下的破骨细胞的分化和骨吸收功能有抑制作用。     

磷酸钙骨水泥/纤维蛋白胶注射型复合载体的凝固时间和显微结构对修复骨缺损的意义

目的:分析由注射型磷酸钙骨水泥(calciumphosphatecement,CPC)和纤维蛋白胶(fibringlue,FG)组成的复合支架材料的凝固时间和显微结构特征,探讨其作为注射型复合载体的可行性。方法:将注射型CPC和FG按凝固后的体积计算,以2∶1的体积比混合,制成复合载体。测定复合材料的凝固时间,并用扫描电镜观察其煅烧前后的结构特征。结果:复合材料的初凝时间平均为9.54min,终凝时间平均为21.38min。扫描电镜发现,FG贯穿于CPC晶体间,并将CPC晶体紧密连接。煅烧后有较多大孔产生,空隙率为32.6%。且有延伸的沟隙将CPC微孔相连。结论:复合材料凝固时间适合临床操作;随着FG的降解,复合材料的空隙率将提高,有望加速CPC的降解和骨的生长,用作生物活性分子的注射性载体。     

成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持

目的 探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法.方法 原代骨髓基质细胞传代后,以含rhTGF-β1、地塞米松、维生素C等的成软骨培养液诱导培养,以倒置相差显微镜观察细胞形态变化,通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs的软骨细胞表型.诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含1ng/ml rhTGF-β1诱导液培养,以单纯DMEM培养为对照,观察细胞传5代后的表型变化.结果 原代培养的MSCs传代后,在成软骨诱导培养后,细胞逐渐由梭形变为多边形,诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原,甲苯胺蓝染色阳性.具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF-β1诱导下长期培养,仍可保持其软骨细胞表型,对照组则表现为成纤维样细胞.结论 成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞,低浓度的TGF-β1可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原.     

牛煅烧骨与体外培养兔骨膜成骨细胞的相容性

目的 观察煅烧骨与培养的兔骨膜成骨细胞的组织相容性,为将复合物植入骨缺损提供实验依据。方法 采用取材丰富的牛松质骨经脱脂、脱蛋白、煅烧等工艺处理制成的煅烧骨（true bone ceramic,TBC)为载体,将体外培养的兔骨膜成骨细胞复合到TBC,4,10和20d取材,行扫描电镜观察。设对照组。结果 4d后,煅烧骨面及孔内即有了细胞贴附生长,20d全部长满,有胶原纤维形成,对照组则没有。结论 煅烧骨与成骨细胞有良好的组织相容性。     

rhBMP-2在体内诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的：研究rhBMP-2在体内诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及碱性磷酸酶（ALP）的表达。方法：将含rhBMP-2 0.5mg的松质骨载体植入BALB/c小鼠的右股部肌袋内，于术后3-21d间8个时间点取材，用原位杂交法对新生骨组织中的Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA进行检测；定量分析ALP活性，观察rhBMP-2在诱导成骨中CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。结果：⑴Ⅱ型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随。肥大、变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原mRNA。⑵作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达，随着成骨细胞的出现，骨组织的形成，Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。结论：在体内诱导成骨中rhBMP-2促进了CollagenⅠ、ⅡmRNA及ALP的表达。     

双相陶瓷生物活性骨的制备及其细胞相容性研究

[目的]制备一种双相陶瓷牛物活性骨,并了解其细胞相容性.[方法]分离培养兔骨髓基质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs),将浓度为1×106/ml目的第3代MSCs接种于复合有Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白(bone morphogenetk protein,BMP)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)目的双相陶瓷生物骨(bniphask ceramic bioiogic bone,BCBB)上,联合培养,用倒置差显微镜、扫描电子显微镜观察,测定光密度(OD)值,了解双褶陶瓷牛物活性骨BCBB/BMP/bFGF目的细胞相容性.[结果]BCBB孔内充满Ⅰ型胶原、BMP及bFGF.MSCs在双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF上黏附生长,第6 d时细胞在材料表面形成致密细胞层,增殖达稳定状态.[结论]该研究制备目的双相陶瓷生物活性骨BCBB/BMP/bFGF具有良好目的细胞相容性.     

外固定架在足下垂治疗中的应用

[目的] 探讨外固定架在足下垂畸形治疗中的作用.[方法] 足下垂患者9例,平均足下垂畸形时间15.5个月,将外固定架螺纹杆连接于胫骨与下垂足之间,对足下垂进行缓慢牵拉,每日螺纹旋转3次.[结果] 所有患者均获得随访,平均随访时间11.2个月(6～19个月);足下垂矫形时间3～6周(平均4.2周),足下垂均矫正到中立位,带架时间7～11周(平均8周),所有患者均未发现有神经、肌腱和血管的损伤;6例胫骨骨折、骨不连患者矫形后经过锻炼踝关节功能恢复良好,活动范围约30°～50°;小腿前外侧和后侧肌群挫灭伤患者经过锻炼,踝关节活动范围约12°.[结论] 通过外固定架的缓慢牵拉,可以有效治疗足下垂畸形.     

重组合异种骨移植对IL－2生成影响的研究

采用重组合异种骨（ＲＢＸ）移植建立ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠股后肌袋模型，以研究对Ｔ淋巴细胞分泌ＩＬ－２的功能变化及对细胞免疫的影响，结果显示：（１）ＲＢＸ移植后２天ＩＬ－２升高是由于手术创伤刺激所致的应激反应；（２）术后７～１４天ＲＢＸ、ｂＢＭＰ对ＩＬ－２产生有显著的抑制作用，２８～４２天回升：（３）对Ｔ淋巴细胞功能的抑制作用主要是ＢＭＰ所致，经处理的牛板质骨粒不具免疫源性。提示：ＲＢＸ移植无明显免疫排异反应，ＢＭＰ能抑制Ｔ细胞的活化增殖，使细胞因子分泌减少，因而降低厂细胞免疫水平，ＢＭＰ可能属于一种新的兔疫调节因子。实验结果对ＲＢＸ移植既能成骨又不发生明显的免疫排异的机理是一种有意义的探讨。     

抗感染重组合异种骨植入治疗四肢骨折内固定术后骨不连

目的探讨抗感染重组合异种骨(ARBX)植骨治疗四肢骨折内固定术后骨不连的临床疗效。方法取除原内固定、重新内固定或外固定,并应用抗感染重组合异种骨植入治疗四肢骨折内固定术后骨不连20例,全部为无菌性骨不连。断端应用ARBX植骨20例,混合自体髂骨移植9例。结果20例随访1年2个月～4年2个月,平均2年8个月。20例应用ARBX植骨治疗的骨不连中,18例完全愈合,1例延迟愈合,1例未愈合。无1例骨感染发生。结论重新内固定或外固定,避免了原手术方式存在的引起骨不连的内在因素;ARBX植骨治疗骨不连安全,对促进骨愈合疗效可靠。