抗感染组织工程化骨的生物特性

目的 探索抗感染组织工程化骨一期修复感染性骨折、骨缺损的新途径。方法 昆明小鼠84只，雄性，体重24—27g。其中30只于右侧股部肌袋植入利福平组织工程化骨做药物释放特性观察。54只以随机数字法分为A，B，C3组，每组18只。将植骨材料植入小鼠右侧股部肌袋中。A组植入利福平组织工程化骨，B组植入单纯组织工程化骨，C组植入牛松质骨，做成骨活性观察。结果 ①此种材料21d内骨粒周围软组织的利福平浓度(1.8mg／L)高于金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(0．008—0．06mg／L)，而小鼠血药浓度很低。②此种材料的成骨活性与单纯组织工程化骨无明显差别(P&;gt;0．05)，均较单纯牛松质骨载体的成骨活性好(P&;lt;0．01)。碱性磷酸酶(μmol／s&;#183;kg)测定显示：7d A组43&;#177;12，B组48&;#177;10，C组22&;#177;5，F=7．56，P&;lt;0．01；14d A组65．3&;#177;3．2，B组63．0&;#177;2．8，C组18．2&;#177;2．7，F=34．86，P&;lt;0．01；28d A组122&;#177;20，B组133&;#177;12，C组27&;#177;7，F=53．86，P&;lt;0．01。结论 一定剂量的利福平组织工程化骨有较好的成骨活性和极好的抗感染能力。且能保持很低的血药浓度。     

医用生物蛋白胶对注射型骨形态发生蛋白成骨活性的影响

Inject-typeBMP(bBMP/rhbFGF/PVP)powerwasusedasaccessorialtreatmentoffreshfracture,delayhealorboneIncoher-enceandgainedgoodeffects.WeobservedeffectofBMPonco-agulabilityofFSandinfluenceofFSonosteoinductiveabilityofBMPanddiscussthefeasibilityofusingFSassolventofBMP.1Subjectsandmethods1.1Subjects1.1.1Inject-typeBMPandfibrinsealant(FS)Inject-typeBMPisprovidedbyorthopedicsresearchinstituteofXijingHos-pitaloftheFourthMilitaryMedicalUniversity.FSisprovidedbyGuanzhouBeiteBiotechnolog…     

诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的探索用骨形态发生蛋白(BMP)-2和高分子透明质酸在体外诱导骨髓基质细胞(MSC)向软骨细胞分化的可能性。方法自兔双侧股骨粗隆处抽取4～6ml骨髓后在体外行原代和传代培养,实验分为两组,实验组培养液中含BMP-2(100ng/ml),培养瓶底预涂高分子透明质酸;对照组常规培养及传代。传代细胞玻片行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色、碱性磷酸酶染色(ALP)、免疫组织化学染色;培养细胞与聚乳酸/聚乙醇酸(PLGA)复合后植入自体兔股部肌内,大体及组织学观察形成的结节。结果实验组传代细胞,尤其是第3代细胞甲苯胺蓝染色阳性,免疫组织化学染色S-100蛋白阳性,兔股部植入PLGA-细胞后3周形成软骨结节;而对照组免疫组织化学染色个别细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色阳性,植入PLGA-细胞后主要形成纤维组织。结论应用BMP-2和高分子透明质酸有效诱导MSC向软骨细胞分化,MSC源性软骨细胞可作为软骨组织工程修复关节软骨损伤的较理想的种子细胞。     

骨形态发生蛋白诱导基因克隆和表达的实验研究

目的:用基因工程技术在大肠杆菌中表达骨形态发生蛋白诱导基因(BMP-2-inducedgene3kbgene,BIG-3)所编码的蛋白。方法:依据Genbank中BIG-3的基因序列设计并合成引物,从新生小鼠颅骨组织中提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)得到BIG-3全长编码序列。将所得到的基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2的多克隆位点获得pGEX-4T-2-BIG-3重组表达载体,经测序证实后转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,挑选阳性克隆,经诱导表达后SDS-PAGE鉴定。结果:克隆得到BIG-3全长编码序列并在大肠杆菌中表达了GST-BIG-3融合蛋白,融合蛋白约占菌体总蛋白的45.3%。结论:通过RT-PCR从新生小鼠颅骨中克隆到BIG-3基因并在大肠杆菌中获得GST-BIG-3融合蛋白的高水平诱导表达。     

人 BMP2和 OPG共表达真核载体的构建与骨质疏松基因治疗相关性的研究

Boneisadynamictissue，thelevelofbonemassreflectsthebalanceofboneformationandresorption，whichinvolvesthecoor－dinateregulationofbone－formingcells（osteoblasts）andbone－resorbingcell（osteoclasts）．Avarietyoflocalgrowthfactorsandcytokinesaswellassystemicpeptideandsteroidhormonesregulatethedifferentiationofimmatureprecursorcellsandtheactivityofmaturecellsinboththeosteoblasticandtheosteoclasticlineage，suchasbonemorphogeneticprotein－２（BMP－２）andosteoprotegenin（OPG）犤１犦．Inaddition，…     

双相陶瓷生物骨-骨形态发生蛋白-碱性成纤维细胞生长因子复合物修复股骨头坏死模型的实验研究

目的观察双相陶瓷生物骨(BCBB)、骨形态发生蛋白(BMP)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)复合物修复股骨头坏死(FHN)模型的效果。方法 32只新西兰成年大白兔共64侧股骨头,微波灭活建立股骨头坏死模型,随机分为A、B、C、D 4组,每组16侧。A组为空白对照,B组植入BCBB/BMP,C组植入BCBB/BMP/bFGF,D组植入自体松质骨。术后2周、4周、8周和12周分批处死动物,每组每次取材4侧股骨头。行股骨头大体解剖观察、X线摄片、组织学观察、血管免疫组织化学染色。结果大体解剖:12周时,A组有1侧股骨头塌陷,缺损区只有少量类骨组织形成;B组和C组有大量新骨形成,植骨区与宿主骨界限依然存在;D组植骨区与宿主骨界限不清,植骨区骨密度及骨结构接近宿主骨。X线摄片:12周时,A组缺损仍然存在,有1侧股骨头塌陷;B组和C组骨移植区呈高密度影,骨移植区与宿主骨界限模糊;D组骨移植区密度与宿主骨相当,与宿主骨界限不清。组织学观察:4周时,A组有少量类骨组织形成;B组有少量新骨组织形成,BCBB吸收不全;C组有大量新骨组织形成,BCBB吸收不全;D组有大量新骨组织形成,自体骨移植大部分吸收。4周、8周和12周时组织学新骨形成面积比较:D组和C组优于B组和A组,B组优于A组(均P<0.05),C组和D组间无显著性差异(P>0.05)。血管免疫组化染色:2周、4周和8周时,C组血管面积大于A组、B组、D组(P<0.05),A组、B组、D组间无显著性差异(P>0.05)。结论 BCBB/BMP/bFGF复合物具有较强的成骨和成血管能力,对FHN的修复能力与自体骨相当。     

聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物修复髌股关节软骨缺损

背景：传统的方法修复软骨损伤,易发生退变。聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物具有良好的生物相容性,可根据需要调节降解速度等性能,可能在修复软骨损伤方面具有应用前景。目的：观察以聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物为载体修复兔关节软骨缺损的可行性。方法：选取2月龄新西兰兔骨髓培养,诱导间充质干细胞向软骨细胞分化。第3代细胞与聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物共培养制成聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞复合物。建立兔髌股关节股骨髁部缺损模型,在右侧36个膝关节植入聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞复合物,左侧18膝植入聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物,另18膝造成缺损后留作空白对照。术后4,8,12,24,36,48周取材,行大体及组织学观察,组织学评分。结果与结论：聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物-细胞复合物修复大鼠缺损后,软骨细胞分布较均一,色泽与正常软骨相似,与正常软骨界限消失,表面细胞平行于关节面,深层细胞排列紊乱,细胞呈团状,基质异染广泛,软骨下骨形成及潮线恢复正常,与周围正常软骨连接良好。而单纯植入聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物或缺损后未处理大鼠缺损边缘细胞呈团块状增生,底部为纤维组织。提示骨髓基质细胞源性软骨细胞是修复关节软骨缺损较理想的种子细胞,聚乳酸/聚羟基乙酸共聚物适合作为组织工程修复关节软骨缺损的支架材料,具有良好的应用前景。     

联合转染人VEGF165和ANG-1双基因对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

[目的]研究联合转染入血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管紧张素-1(ANG-1)双基因对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化潜能的影响.[方法]将本室构建的编码人VEGF165和ANG-1双基因腺病毒质粒pAd-VIA在QBI-293A细胞内进行包装和扩增,获得腺病毒载体pAd-VIA,将其体外转染大鼠BMSCs,应用诱导培养液定向诱导向成骨细胞分化.实验分为4组:A.腺病毒载体pAd-VIA转染BMSCs并诱导组;B.BMSCs诱导组;C.腺病毒载体pAd-VIA转染BMSCs组;D.单纯BMSCs组.通过碱性磷酸酶(ALP)染色和活性的测定、Ⅰ型胶原免疫荧光染色、茜素红染色来评价联合转染双基因对BMSCs成骨分化潜能的影响.[结果]重组腺病毒质粒pAdVIA在QBI-293A细胞内成功包装和扩增,有大量的绿色荧光蛋白表达,体外转染大鼠BMSCs后,A、B组的ALP染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色、茜素红染色为阳性,而C组和D组为阴性.ALP活性表达具有时间相关性,3 d开始表达,7 d到达高峰,在7、14 d,A、B组与C、D组之间ALP表达均具有统计学差异(P＜0.01),A组和B组之间,在各个时间点均无统计学差异(P＞0.05).[结论]腺病毒载体pAd-VIA转染大鼠BMSCs后,未明显影响其体外成骨分化潜能.     

庆大霉素重组合异种骨在骨缺损修复过程中放射性核素骨显像的动态变化

目的 探讨庆大霉素重组合异种骨(G-RBX)在骨缺损修复时代谢活性的动态变化,同时为爆炸伤骨缺损寻找有效的骨缺损修复材料。方法 犬的左后肢用雷管炸伤,用G-RBX修复缺损,在修复后2、4、8、16、24周静脉内注射^99MTc-亚甲基二磷酸盐(MDP),进行SPECT骨扫描,探测局部骨代谢活动的变化,检测这种材料在不同时间的成骨活性。结果 在用这种骨材料后,2周时局部具有明显的成骨活性,4周时达到高峰,16周开始下降,结合X光片,可以看出这种材料可以促进骨缺损的修复。结论 G-RBX具有良好的成骨活性,可作为1种有效的爆炸伤骨缺损修复材料。     

注射型支架与脂肪源性干细胞复合成软骨的研究

目的探讨在特定的软骨细胞诱导培养液中,由纤维蛋白和硫酸软骨素复合所构建的新型注射型支架材料对脂肪源性干细胞向软骨细胞分化的影响。方法分离兔脂肪干细胞,分别种植在纤维蛋白与纤维蛋白和硫酸软骨素复合的两种胶体支架材料上,并在特定软骨诱导液中培养14d。应用MTT检测细胞增殖,生化方法检测硫酸软骨素的含量,RT—PCR检测Ⅱ型胶原的表达,形态学染色和扫描电镜观察细胞形态及细胞与支架材料的生物相容性。结果脂肪源性干细胞在纤维蛋白与纤维蛋白和硫酸软骨素复合的两种胶体支架材料上均呈现出软骨细胞的表型,较之单纯的纤维蛋白载体,由纤维蛋白和硫酸软骨素复合所构建的新型注射型支架材料更有利于脂肪源性干细胞增殖与表达硫酸软骨素和Ⅱ型胶原等软骨细胞表型,向软骨细胞分化。结论纤维蛋白和硫酸软骨素复合所构建的新型注射型支架材料具有促进脂肪源性干细胞向软骨细胞分化的作用,并表现出可能应用于关节软骨修复的潜在价值。