以海藻酸盐及异种骨复合技术制备组织工程化骨及体内成骨(英文)

背景:海藻酸有相对温和的凝胶条件与良好的生物相容性,已广泛应用于生物组织工程.目的:采用海藻酸钠凝胶复合异种骨的方法,构建骨组织工程载体,观察载体中细胞的生物性能及体内成骨能力.方法:取2只2周龄新西兰兔的骨髓,以1 ×10~(-8)mol/L重组人骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞.取诱导后第2代骨髓间充质干细胞接种于1%海藻酸钠凝胶中,培养4 d苏木精-伊红染色观察凝胶中细胞形态.将第2代骨髓间充质干细胞分为单纯DMEM凝胶组和含1%海藻酸钠的DMEM凝胶组,分别培养7 d后行骨形态发生蛋白2免疫组织化学染色观察.取24只裸鼠,随机分为2组,于两侧股部肌袋中分别植入骨髓间充质干细胞,海藻酸钠凝胶/牛松质骨复合体作为实验组,骨髓间充质干细胞,牛松质骨复合体作为对照组.术后2,4周后组织学观察复合体成骨情况,图像分析系统分析各组成骨或软骨的面积百分比.结果与结论:海藻酸钠凝胶中骨髓间充质干细胞形态饱满,细胞悬浮于凝胶中,可见细胞分裂和核分裂相.单纯DMEM凝胶组和含1%海藻酸钠的DMEM凝胶组免疫组织化学观察,细胞分裂增殖正常,伸出多种形态的突起,胞核大,核仁清晰.单纯DMEM凝胶组和含1%海藻酸钠的DMEM凝胶组的骨形态发生蛋白2表达阳性率差异无显著性意义(P>0.05).扫描电镜观察海藻酸钠凝胶均匀地复合于牛松质骨微孔中,不同平面均有细胞生长.动物实验显示术后2,4周实验组和对照组的成骨或软骨的面积百分比差异有显著性意义(P<0.05).提示以海藻酸钠凝胶,牛松质骨构建骨组织工程载体,合乎组织工程载体的超结构原理,能最大限度地承载细胞,生物性能好,对骨髓间充质干细胞增殖和成骨表型及相关的生物性能无不良影响,在体内成骨效率较高.     

间隙连接通讯功能对小剂量甲状旁腺激素成骨效应调控的机制

INTRODUCTIONBoneformativeprocessesinducedbyintermittenttreatmentoflow－doseparathyroidhormones（PTH）possessnovelandhopefullytherapeuticeffectsonosteoporosis[１－２]．Theimportantsignaltrans－ductionsandmechanismsmediatedbygapjunctionalintercellularcommunication（GJIC）viagapjunctions（GJ）composedofConnex－in４３（Cx４３）betweenadjacentosteoblastsisconceivedtoplaycru－cialrolesintheseprocesses[３－４]．Whereas，theessentialcontributionsofGJICtolow－dosePTHassociatedboneformationa…     

多样本骨髓间充质干细胞分离培养方法的量化比较

目的 比较不同方法获取骨髓间充质干细胞的效率，为其在组织工程的应用确立最佳培养方案。方法 以3个月龄新西兰大白兔为实验对象，通过对全血培养法、深血纯化法、密度梯度离心法进行比较性研究，对克隆形成率、首次传代时间、扩增成功率等指标进行比较。结果 对克隆形成率和扩增成功率面言，溶血纯化方法最低传代时间为20.5d，全血培养方法有部分提高传代时间为（13.9&;#177;2.9）d；而密度梯度离心方法的效率最高，首次传代时间为（7.5&;#177;0.7)d。结论 对于成年动物穿刺获取骨髓间充质干细胞而言，密度离心&;gt;全血培养&;gt;溶血纯化方法，明确了一种实用有效的骨髓间充质干细胞分离培养方法。     

牛骨形态发生蛋白上调小鼠血管内皮细胞生长因子基因表达对骨修复过程中血管生长的影响

目的:采用RT-PCR方法检测牛骨形态发生蛋白(Bovinebonemorpho-geneticprotein,bBMP)对小鼠血管内皮细胞生长因子(Vascularendothe-lialgrowthfactor,VEGF)基因表达的影响。方法:将bBMP植入Balb/C小鼠肌袋,取材后提取组织总RNA,利用RT-PCR检测bBMP在体内对VEGF基因表达的影响。结果:实验组VEGF3种亚型的扩增产物的表达皆高于对照组。结论:体内环境下,bBMP可上调VEGF表达,从而在一定程度上促进骨修复过程中的血管生长。     

rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞向成骨细胞分化的量效作用

目的 探讨体外条件下rhBMP-2诱导脂肪成体干细胞(adipose-derived adult stem cells,ADASCs)向成骨细胞分化和增殖的情况,并观察其量效关系.方法 从成年兔颈后部获取脂肪组织,采用酶消化法分离并培养脂肪成体干细胞.稳定传代后,用不同浓度rhBMP-2对ADASCs进行诱导分化,采用碱性磷酸酶染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色进行成骨细胞鉴定,采用碱性磷酸酶活性测定及MTT比色法进行分化和增殖活性比较.结果 碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色为阳性;当rhBMP-2浓度在100～400 ng/ml时,各组碱性磷酸酶活性提高明显(P＜0.05),在400 ng/ml以上各组则无明显差异(P＞0.05);当rhBMP-2浓度在800 ng/ml以下时,各组增殖活性无明显差异(P＞0.05),在800 ng/ml以上则存在明显的抑制作用,各组存在明显差异(P＜0.05).结论 研究表明,在体外条件下rhBMP-2能诱导脂肪来源干细胞向成骨细胞分化;并且当其浓度在400～800 ng/ml时,能促进脂肪来源干细胞的增殖和分化.     

不同方法处理的同种异体骨移植免疫学比较

为比较不同处理的同种异体骨移植的免疫反应，作者用新鲜骨、自消化抗原去除骨、骨基质明胶和脱钙骨基质分别植入小鼠肌肉，行免疫学和组织碱性磷酸酶检测。结果：同种异体新鲜骨引发宿主抗体水平最高，在体外明显刺激淋巴细胞增殖；而后三种移植物引发的宿主抗体水平较低，在体外抑制淋巴细胞增殖。结论：免疫排异抑制移植物成骨，骨诱导活性物质抑制免疫反应。     

组织工程骨软骨复合物的构建与形态学观察

目的探讨采用组织工程技术构建骨软骨复合物的可行性。方法将骨髓基质细胞(BMSCs)成诱导软骨后接种于快速成形的三维支架材料聚乳酸／聚羟乙酸共聚物(PLGA)构建组织工程软骨，经成骨诱导的BMSCs接种于聚乳酸／聚羟乙酸共聚物／磷酸三钙(PLGA／TCP)构建组织工程骨，在体外分别培养2周后，将两种工程化组织及两者以无损伤线缝合形成的组织工程骨软复合体分别植入自体股部肌袋，术后8周取材，行组织学观察。结果术后组织学观察表明。组织工程软骨在体内可形成软骨组织组织工程骨在体内可形成骨组织，两者的复合体在体内可形成骨软骨复合物。结论以骨髓基质细胞为种子细胞、以快速成形的生物降解材料为支架体外构建的组织工程骨软骨复合物，可在体内形成骨软骨组织，有望用于骨软骨缺损的修复。     

重组人骨形成蛋白2诱导的骨膜细胞构建组织工程骨的实验研究

目的通过组织工程技术方法，研究细胞-材料复合体体内骨再生的能力。方法采用材料学自组装技术的原理．以Ⅰ型胶原蛋白为分子模板．引导钙磷盐在液相中的矿化，制备具有天然骨基质层状结构的羟基磷灰石／胶原复合材料，并以热致分相法制备羟基磷灰石／胶原-聚乳酸[hydroxyapatite／collagen—poly-(L—lactic acid)，HAC—PLA]复合三维多孔框架，与重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein2，rhBMP-2)诱导分化后的兔骨膜细胞构建组织工程骨，进行体外电镜及组织学观察。将3月龄裸鼠18只，分为3组，每组6只。A组皮下注射经rhBMP-2处理后的骨膜细胞悬液，B组植入未复合细胞的HAC—PLA，C组植入rhBMP-2处理后的细胞-材料复合体。术后8周取材行组织学观察，C组与B组及A组进行比较。结果三维多孔HAC—PLA框架材料孔隙率大于90％，孔径为50～300μm。骨膜细胞经500ng／ml的rhBMP-2处理后，与改善亲水性后的HAC—PLA三维多孔框架复合，构建组织工程骨。电镜显示接种的细胞能在此组织工程骨内部生长增殖，术后8周C组有新骨形成，A组注射部位表面平整，无新生物，B组为纤维组织，无骨及软骨形成。结论所构建的组织工程骨有望成为骨创伤修复治疗一种新的技术。     

磷酸钙骨水泥作为骨形成蛋白载体修复节段性骨缺损及相关研究

目的 制备CPC/BMP复合人工骨，通过动物实验研究其对骨缺损的修复作用及相关问题，探讨临床应用的可能性。方法 参考有关文献方法合成CPC，并将其作为BMP的载体制成CPC/BMP复合物，植入兔桡骨15mm骨缺损处，术后不同时间处死动物。通过生物力学测定，组织学染色分析，电镜扫描及X射线电子能谱分析。X线摄片，无机质含量测定以及骨密度测定等手段观察新骨形成和材料降解情况。同时以单纯的CPC及空白组作为对照研究。综合评价CPC/BMP对骨缺损的修复能力及对机体的影响。结果 术后CPC/BMP和CPC两组动物均无毒性反应。随着时间的延长，血清中碱性磷酸酶浓度逐渐升高，尤以CPC/BMP组显著，提示CPC/BMP复合物和单纯的CPC均可以促进新骨形成，前者新骨形成量大，骨修复能力明显好于后者。CPC/BMP植入2周时可见大量间充质细胞分化，在材料与骨端之间出现一层软骨细胞。4周时软骨细胞向编织骨分化，16周时板骨层骨长人材料并与之相互分割包裹，24周时骨缺损初步修复，新骨密度明显高于CPC组，说明BMP的加入不仅有效地促进了新骨的形成，同时也加速了新骨的钙化。24周组标本生物力学测定结果表明，新骨形成的同时伴随材料的降解，CPC组材料降解速度缓慢，CPC/BMP组降解速度优于CPC组，但24周时仍有部分材料残存。在新骨形成和材料降解过程中可出现血清钙浓度的一过性升高。结论 CPC是BMP的理想载体。CPC/BMP生物活性人工骨对骨缺损有较强的修复能力，可望成为新型的骨缺损修复材料。     

急性拇指创伤性截指、吻合神经皮管包埋法再造拇指(附16例报告)

拇指创伤性截指,造成拇指缺损,给伤员生活和工作带来很大困难。急性拇指创伤性截指,如条件具备,应争取修复血管等再植,但由于各种原因,往往不宜再植。过去,只能待伤愈后,考虑拇指再造术,如转移残指或邻指,或游植移植第2足趾再造拇指。这些处理方法