三维动态培养构建注射型组织工程软骨远期修复效果的实验研究

目的三维诱导自体细胞软骨分化构建注射型组织工程软骨，探讨动物模型的远期修复效果。方法 分离培养兔自体骨髓间充质干细胞，分别三维动态诱导及二维平面培养诱导，诱导软骨细胞分化并鉴定，比较分化效果。分别收获两种方法诱导后的细胞，与蛋白胶混合制备注射型组织工程软骨，注射修复兔关节软骨缺损。随机设定三维动态培养组、二维平面培养组及空白对照组3组，24、48周后，观察大体和组织学形态，组织学评分比较远期效果。结果二维平面培养诱导后只有低水平的蛋白多糖沉积和Ⅱ型胶原等标志物表达，三维动态培养后的分化质量明显提高，大量表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原。在动物模型中，三维动态培养组：24、48周后缺损基本修复，表面光滑坚韧，修复组织与周围软骨无界限，仍保持类透明软骨形态。二维平面培养组：24、48周后明显退化，失去软骨组织形态。空白对照组：无明显修复，缺损长期残留。结论三维动态培养显著改善自体MSC注射型组织工程软骨的修复效果，为提高关节软骨的微创修复提供新思路。     

动态力学信号对人骨髓基质细胞、骨膜细胞生长和成骨表达的作用

目的 探讨动态力学信号对体外分离培养的人骨髓基质细胞、骨膜细胞生长与分化特征的生物学效应。方法 使用Flexcell应力系统，将频率为1Hz、振幅为5％变形、正弦波状力学信号作用于体外分离培养的正常人骨髓基质细胞和骨膜细胞，在不同时间段检测其对细胞DNA、总蛋白合成、碱性磷酸酶（ALP）表达和骨钙素分泌量的影响。结果 动态力学刺激对人骨髓基质细胞、骨膜细胞蛋白与DNA合成无明显作用。接受力学刺激信号后骨膜细胞受维生素D3刺激后分泌骨钙素显著增加，而骨髓基质细胞则显著下降。结论 动态力学信号能够促进人骨膜细胞向成骨细胞分化，这可能是其对骨的生物学作用的机制之一。     

携载rhBMP-2微球的新型复合人工骨的制备及生物相容性研究

目的制备一种具有良好生物相容性、降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。方法采用复乳溶剂挥发方法制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合，制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。探讨材料特性包括形貌和体外rhBMP-2释放速度，采用体外细胞培养的方法测定复合材料的细胞黏附能力及其浸提液对于人骨髓基质干细胞（MSCs）增殖和成骨分化的影响。结果与单纯rhBMP-2／CPC材料相比较，复合材料rhBMP-2体外释药明显提高。材料与MSCs可良好黏附并使其增殖。体外培养时材料不同时间的浸提液对MSCs细胞的增殖具有促进作用，对于细胞成骨分化的影响与单纯CPC无明显差别。结论rhBMP-2／PLGA微球／磷酸钙骨水泥新型复合人工骨具有良好的生物相容性和活性因子缓释功能，是一种有良好应用前景的骨修复材料。     

动态力学应变对人骨膜细胞的生物学作用

探讨动态力学应变对体外分离培养的人骨膜细胞的生物学效应。使用Flexercell应力系统，将频率为1Hz、振幅为5％变形、正弦波状力学应变作用于体外培养的人骨膜细胞，在不同时间段检测细胞总蛋白含量、DNA合成量、ALP活性及骨钙素分泌量，并与空白对照组相比较，观察动态力学应变对人骨膜细胞生长、分化指标的影响。结果表明：所施加的动态力学应变对骨膜细胞的生长增殖无明显影响，但显著促进骨膜细胞向成骨细胞的分化。动态力学应变能够促进人骨膜细胞向成骨细胞分化，这可能是其对骨的生物学作用的机制之一。     

rhBMP-2/聚乳酸与聚乙醇酸共聚物载药微球的制备及成骨活性研究

目的制备一种具有良好降解性和成骨活性可注射的rhBMP-2载体材料。方法采用复乳-溶剂蒸发技术制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物P(LGA)微球。测定材料的制备参数及其特性,包括材料的形貌、载药率、释药速度,并将载药微球植入鼠股部肌袋,通过X线、组织学评价载体材料的异位成骨能力。结果载药微球粒径为(253±64)μm,载药率0.52%±0.14%,载药微球rhBMP-2体外释放24h时为15.2%±0.8%,随后呈持续缓慢释放,28d时总计达48.6%±5.3%。载药微球植入鼠股部肌袋4周,材料周围有明显的骨形成。结论载有rhBMP-2的PLGA微球具有良好的缓释效果和生物活性,是一种较为理想的生长因子载体材料和释放系统。     

rhBMP-2对成纤维细胞成骨表型的影响

目的：研究rhBMP－2对成纤维细胞成骨表型的影响,探讨成纤维细胞成骨条件,方法：向体外培养的成纤维细胞（NIH3T3细胞）内加入不同浓度的rhBMP-2,在第3日和第6日检测碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素表达,绘制生长曲线,结果：rhBMP-2可增加成纤维细胞ALP活性,促进骨钙素表达,在rhBMP－2浓度为800ug.mL^-1和1200ug,mL^-1作用最强,rhBMP-2对细胞增殖规律无明显影响,结论：rhBMP－2可促进成纤维细胞成骨表型表达。     

rhBMP-2在体内诱导成骨中I，II型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的：对rhBMP－2在诱导成骨中CollagenI,II及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究,方法：将含rhBMP-20.5mg的松质骨载体植入55只BALB／c小鼠的右侧股部股袋内,分别术后3－21d共8个时间点取材,采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的I,II型胶原进行检测,对ALP活性进行定量分析,观察rhBMP-2在诱导成骨中CollagenI,II及ALP的表达情况,结果：（1）II型胶原的出现是和成软骨,软骨细胞的出现相伴随的,但是,肥大,变性的软骨细胞并不表达II型胶原,（2）作为成骨细胞成熟标志物的I型胶原,ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成I型胶原仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势,结论：在诱导成骨中rhBMP－2促进了CollagenI,IIey ALP的表达。     

新型重组异种骨移植与其同带血循骨膜联合移植治疗兔骨缺损

目的：探讨新型重组异种骨－复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB)移值及其与带血循骨膜联合移植,修复节段性骨缺损的效果,方法：将基因重组人BMP2（rhBMP2)与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成rhBMP2／BCB,并采用桡骨干1.5cm缺损动物模型,通过线,生物力学,骨密度,组织学等检测手段,对单纯rhBMP／2BCB移植方法及其与带血循骨膜联合移植方法进行对比研究,结果：（1）单纯rhBNP2/BCB移植,可在16wk使节段性骨缺损基本修复,其机制与过程与重组合异种相似;（2）rhBMP2／BCB与带血循骨联合移植,双用8wk即可修复骨损损,其修复机制与骨膜联合移植,仅用8wk即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制,结论：上述二种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以rhBMP2／BCB与带血循骨膜联合移植较为理想,该方法同时具有良好的骨生成,骨传导和骨诱导作用。     

H2O2处理大块牛松质骨后成分分析

目的：研究大块牛松质骨（MBCB)处理后的各种成分及高浓度H2O2消除异种骨抗原性机制,方法：采用干燥失重法及殖渣法检测经过系统去抗原处理后的大块异常骨的有机,无机质及水份含量,将25块大块新鲜牛松质骨均分为5组,分别用高浓度H2O2浸泡0,24,48,72和96h,采用氨基酸分析方法研究不同H2O2处理时间的骨块中羟脯氨酸,脯氨酸含量,结果：经处理后,MBCB为色白,并呈现出多孔样结构,扫描电镜观察,松质骨呈清晰的多孔结构,孔壁光滑,5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸的含量随有H2O2处理时间的延长均有同步下降的趋势,但各组间无显性差异（P＞0．05）,5组检测样品中18例氨基酸含量及氨基酸总量随着H2O2处理时间的延长亦有同步下降的趋势,仅0h与96h组间18种氨基酸以及总氨基酸含量有显性差异（P＜0．05）,其余各组间无显性差异（P＞0．05）,5组检测样品中羟脯氨酸及脯氨酸在总氨基酸总量所占比例随差H2O2处理时间的延长无明显变化,各组间无显性差异（P＞0．05）,结论：大块异种骨经系统去抗原处理后,保持了一定的有机及无机质比列,即具有良好的力学特性又消除了其抗原性,提示高氧化剂引起蛋白质变性是消除大块异种骨抗原性的主要原因。     

Expression and cellular localization of interleukin 8 mRNA and protein in the area of xenogenic bone implant

ＩＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＯｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ,ＸｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ,ＦｏｕｒｔｈＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,Ｘｉａｎ７１００３２,Ｃｈｉｎａ（ＸｕＨａｎｄＨｕＹＹ）３５９ｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＰＬＡ,Ｚｈｅｎｊ...