β-转化生长因子对异种骨移植局部白细胞介素6 mRNA表达的影响

白细胞介素6(ＩＬ6)是一种Ｂ细胞刺激因子,可由多种细胞表达或分泌,对于细胞免疫和体液免疫都具有重要的调节作用,在骨组织中与骨吸收关系密切[1]。β转化生长因子(ＴＧＦβ)是一种可由多种细胞分泌的多功能细胞因子,生物学作用广泛,可调节多种正常细胞或瘤性细胞的生长、分化[2]。有关异种骨移植局部免疫因子的表达与定位以及ＴＧＦβ对该局部细胞因子的调节作用国内外报道很少,我们将ＴＧＦβ复合于牛松质骨载体后植入小鼠股部肌肉内,并应用原位杂交技术检测了其局部ＩＬ6ｍＲＮＡ表达与细胞定位,现将结果报道如下。一、材料和方法1ＴＧＦ…     

人骨形态蛋白-3基因真核表达载体(PcDNA3-hBMP3)构建

０引言人骨形态蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）可诱导多种来源的未分化间充质细胞向软骨细胞和成骨细胞转化,进而形成新骨,而且对软骨细胞也有促进分裂和增殖的作用,促进后者Ⅱ型胶原和氨基多糖（ＰＧ）的分泌．转基因技术和真核表达载体的产生为软骨细胞库建立和开展软骨组...     

一体化层状梯度修复体用于骨软骨组织工程的实验研究

[目的]探索胶原／壳聚糖／纳米β-磷酸三钙一体化层状梯度修复体在组织工程中用作骨软骨缺损修复的可行性。[方法]以Ⅰ型胶原、壳聚糖、纳米β-磷酸三钙（β-TCP）为基本原料，采用无毒交联并通过冷冻干燥法成型；扫描电镜观察，测定支架材料的孔径、孔隙率以及交通孔情况；分离扩增兔骨髓间充质干细胞（BMSC），将BMSC接种于材料上，扫描电镜观察细胞在材料上的黏附状态，MTT法测定细胞在材料上的生长曲线；以软骨诱导液体外诱导细胞-支架复合物向软骨分化，2周后植入自体股部肌袋，6周取材，HE、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化鉴定诱导分化效果。[结果]材料疏松多孔，孔径大于100μm，孔隙率大于95％。细胞在材料上黏附状态良好，并且增殖迅速。BMSC-材料复合体经体外三维诱导后可在自体异位向软骨分化。[结论]Ⅰ型胶原／壳聚糖／纳米TCP一体化层状梯度修复体具有良好的孔隙结构和生物相容性，有望成为一种新型的组织工程支架材料用于骨软骨缺损修复。     

人松质骨来源基质细胞克隆培养与成体干细胞特性研究

目的观察培养的人松质骨来源基质干细胞是否具有骨髓来源基质干细胞的多向分化的成体干细胞特性。方法取股骨、髂骨3mm×3mm×3mm松质骨，剪碎冲洗，用有限稀释法进行克隆培养，然后对传代细胞用化学药物或生长因子进行成骨、成软骨以及心肌细胞分化诱导培养，并检测成骨、成软骨及心肌细胞表型。结果克隆培养细胞培养2周开始表达CD29、CD59、CDll6；成骨诱导条件下2周细胞开始表达I型胶原、骨钙素，至第28天碱性磷酸酶阳性率可达95％；成软骨诱导条件下细胞表达Ⅱ胶原，甲苯胺蓝染色阳性；心肌细胞诱导条件下细胞表达肌钙蛋白，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测有MLC-2V的mRNA表达，4周左右可见细胞连接形成合胞体样结构生长，并有自发性搏动。结论人松质骨来源基质干细胞具有多向分化能力的基质干细胞，在临床和实验研究中可以替代骨髓来源的问充质干细胞。     

人骨髓间充质干细胞的优化培养

目的：骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)培养大多集中在动物，探讨人MSCs的优化培养方法，为组织工程临床应用奠定基础。方法：手术切取患者骨松质3mm&;#215;3mm&;#215;3mm，在含血清培养基内用剪刀将其剪为1mm&;#215;1mm&;#215;1mm大小，然后用注射器冲洗；抽取患者骨髓5mL。分别用贴壁法和密度梯度离心法原代培养。比较不同培养方法MSCs的生长情况。对各组传代细胞用化学药物进行成骨诱导培养，并检测成骨细胞表型。结果：手术切取患者骨松质和抽取患者骨髓均能培养出骨髓间充质干细胞，切取骨松质获取的细胞数量大，5mL骨髓培养细胞数平均可达2．43&;#215;10^8，3mm&;#215;3mm&;#215;3mm骨松质可以获取MSCs的平均细胞数可达9．57&;#215;10^8；全骨髓法细胞贴壁时间早两三天，密度梯度离心法细胞均一性好，利于纯化。结论：临床组织工程中可以根据情况和需要采用不同方法获取MSCs。     

应用快速成型技术复制人体骨骼模型与假肢制造设计的意义

目的:探讨一种由螺旋CT图像反求(reverseengineering,RE)人体骨骼三维轮廓、用快速成型技术复制骨骼模型的方法,探索快速成型技术在矫形外科中的应用。方法:采用Picker公司PQ6000螺旋CT对猪股骨髁部进行层厚1mm,螺距1.0扫描,在CT机的VoxelQ图像工作站进行初期三维容积重建,之后对重建数据间隔0.2mm下载二维断层图像。自行开发数据格式转换软件,对下载图像进行滤波、去噪等处理,求出断面图像的二维边缘轮廓矢量化数据线图,将线图输入美国Imageware公司Surfacer9.0图像处理软件,对轮廓曲线进行矢量叠加,获得股骨髁表面轮廓三维实体模型。经数据转换,在西安交通大学恒通公司LPS600快速成型机上复制骨骼实体模型。结果:得到了树脂实体骨骼模型,其几何外形与原股骨髁实物高度一致,复制的精度高。结论:由CT片层数据获得骨骼轮廓信息,用快速成型技术可复制骨骼三维实体模型,为矫形外科、颌面外科的假肢设计制造,复杂骨骼疾病诊断以及临床教学打下基础。     

辛伐他汀对兔关节软骨组织中蛋白多糖降解的作用

目的探讨辛伐他汀对关节软骨的保护作用。方法取兔膝关节软骨建立软骨组织块培养模型,用5ng/ml浓度的IL-1α诱导软骨蛋白多糖降解,并以不同浓度辛伐他汀、双氯芬酸钠及地塞米松处理。培养60h后收集培养上清,检测软骨释放至其中的氨基聚糖的含量以评价蛋白多糖的降解程度。结果在1～10μmol/L的浓度间,辛伐他汀均能抑制软骨蛋白多糖的降解,并呈剂量依赖性;而双氯芬酸钠和地塞米松对蛋白多糖的降解没有明显的抑制作用。结论辛伐他汀对IL-1α诱导的软骨蛋白多糖降解具有抑制作用,提示它对关节软骨具有保护作用,可能影响骨关节炎疾病的进程。