新工艺制备的β—TCP陶瓷小鼠肌肉内种植后的变化

目的：检测新工艺制备的β－磷酸三钙（β－TCP）的生物相容性,方法：将自制β－TCP植入小鼠股后肌袋。术后24,72h,1,2,4,8周分别取材做组织学检查,2,4周取材部分标本做扫描电镜（SEM）观察。结果：随着时间推移,β－TCP逐渐被纤维组织分割包围,但是无软骨,骨和坏死组织形成,结论：新工艺制备的β-TCP具有良好的组织相容性。     

BMP对异种骨移植局部TNF-α和IL-6基因表达的调节

观察骨形态发生蛋白在异种骨移植局部对ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达的调节作用。方法将含有一定抗原性的牛松质骨载体与不同剂量的牛ＢＭＰ复合,植入小鼠股部肌袋,于术后５,１０和２０ｄ取材,制备石蜡切要用核酸分子原位杂交的方法,定性定位检测植骨局部ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达情况,通过图像分析,确定ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达强度,分析植骨局部不同计量ＢＭＰ对ＴＮＦ－α和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达强     

Experiment study on combined free periosteum grafting and new reconstituted bone xenograft in repairing segmental defects

Segmental bone defects in long bones often pose achallenge tO their sMcal ~nt, and the vasculallzedperiosted po used either alone or in combination withother ~ materials has been Preferred as a uSeals solution to this Problems"'l. HOwever, the use Of vascularized graft has to resort to ndcrosuopcal tecboqUes, Whichmakes it difficult tO populallze this OPe~ in the graSsests level intitutions. We Pimeeded with combined useOf free Periosteum and new reconshtuted bine xenograft(NRBX) in re…     

rhBMP_2不同动物异位诱导成骨及其小鼠体内诱导成骨的剂量依赖性

目的对大肠杆菌表达的hBMP2在小鼠体内进行剂量依赖性研究,并观察其在大鼠和家兔体内异位诱导成骨情况,为临床应用提供参考。方法大鼠、家兔股部肌袋植入rhBMP21.5和3.0mg,植入后1、2、4周取材观察成骨情况;小鼠股部肌袋植入100~1000μg的rhBMP2,植入后1、2、3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定。结果大鼠植入1.5mgrhBMP2植入2周、家兔3.0mgrhBMP2植入4周表现为高效成骨活性。rhBMP2小鼠体内诱导成骨实验表现为成骨量,碱性磷酸酶活性和钙含量显著的剂量依赖性。结论原核表达的hBMP在小鼠、大鼠和家兔体内有高效的诱导成骨活性,小鼠体内实验rhBMP2表现为明显的剂量依赖性。     

人骨髓基质干细胞在不同诱导环境下向软骨细胞的分化

目的：探索重组人骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导建系的人骨髓基质干细胞（hBMSC，专利名缩写为MSCxj）生成软骨的可行性、最佳剂量及适宜的诱导环境。方法：rhBMP-2分为六组：空白组、100ng／ml组、200ng／ml组、400ng／ml组、600ng／ml组和800ng／ml组。血清浓度分为三组：无血清组、2％血清组和5％血清组。根据rhBMP~和血清不同浓度间的组合，设计18种诱导模式。一部分Mscxj制成微球，模拟三维模式进行细胞爬片培养，另一部分MSCxj直接用96孔板培养，10d后，检测MSCxj的数量、总蛋白生成量和碱性磷酸酶生成量，并行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原mRNA检测，利用MPS60病理图像软件分析各组Ⅱ型胶原mRNA染色后的灰度，比较各组Ⅱ型胶原mRNA的生成量。结果：血清浓度越高细胞生成的数量越多，细胞合成的总蛋白无显著差异，rhBMP-2对细胞数量和总蛋白的合成无明显影响。2％的血清浓度比其他血清浓度更利于软骨生成。在该血清浓度下rhBMP-2为400ng／ml时，细胞特异性基质Ⅱ型胶原生成最多（F=19．56，P〈0．05）。结论：rhBMP-2能诱导Mscxi生成软骨，在血清浓度为2％、自身浓度为400ng／ml水平下诱导Mscxj生成软骨能力最强。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号途径在鼠破骨细胞生成和骨吸收中的作用

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在甲状旁腺素相关肽(PTHrP)诱导的破骨细胞生成和骨吸收中的作用。方法取小鼠骨髓细胞,在PTHrP(45ng/ml)的刺激下,在不同试验组中分别入0.1、1.0及10μmol/L的p38MAPK抑制剂Fr167653,继续培养6d。抗酒石酸染色,进行破骨细胞计数。在小鼠颅骨部位注射PTHrP建立骨吸收和高钙血症动物模型。每日给予p38MAPK抑制剂Fr16765330mg/kg,每日2次,X线片观察骨吸收面积,组织学检查计算单位面积内破骨细胞数目,采集血样观察全血内游离钙水平。结果PTHrP刺激下,大量破骨细胞生成(118.9±28.3)个/孔;加入0.1μmol/LFr167653可以部分抑制破骨细胞的生成(79.6±28.0)个/孔,加入10μmol/LFr167653几乎全抑制了破骨细胞生成(7.4±0.4)个/孔,每日给予Fr16765330mg/kg,每日2次,可以明显抑制骨吸收,表现为X线片上骨吸收面积减少,单位面积内破骨细胞数目减少,但是并不能有效地抑制高钙血症。结论抑制p38MAPK信号途径可以抑制破骨细胞的分化和局部骨吸收。     

骨库同种异体肌腱和半月板的取材

骨组织库虽然在我国已有20余年的历史,但主要集中在骨的获取、加工、保存和临床应用,有关肌腱及半月板获取、加工处理和临床应用的报道则相对较少[1].本文从复习分析国内外有关肌腱和半月板移植最新文献入手,结合自身所在骨库经验,给出了同种异体肌腱和半月板取材、加工及保存的基本原则和方法,以期为同种异体肌腱和半月板在国内的良好应用提供参考.     

使用人骨钙素启动子实现在体研究成骨细胞特定基因的功能

目的:使用骨钙素启动子构建骨组织特异性小发卡状RNA表达载体.方法:实验于2003-11/2004-09在解放军第四军医大学全军骨科研究所和全军整形外科中心完成.以HEK293细胞基因组为模板,利用聚合酶链反应扩增人骨钙素启动子.将骨钙素启动子、针对虫荧光素酶的小发卡状RNA编码序列和多腺苷酸信号依次克隆至pGL3-control载体的相应酶切位点,经双酶切鉴定和DNA测序证实后命名为pGL3-OCP-shLuc.将pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control分别共转染人胚胎肾细胞HEK293和人骨肉瘤细胞MG-63,48 h后测定虫荧光素酶活性,计算相对活性.结果:使用特异性引物成功扩增出长度为830 bp的人骨钙素启动子聚合酶链反应产物.DNA测序结果证实pGL3-OCP-shLuc中的小发卡状RNA表达框与设计完全一致.pGL3-OCP-shLuc与pGL3-control共转染HEK293细胞后,虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异,而共转染MG-63细胞后虫荧光素酶相对活性显降低,剔出效率约为69.8%.结论:成功使用人骨钙素启动子构建了小发卡状RNA表达载体,并实现了骨组织特异性RNA干扰,为将RNA干扰技术引入骨肉瘤基因治疗领域奠定了基础.     

多样本骨髓间充质干细胞分离培养方法的量化比较

目的比较不同方法获取骨髓间充质干细胞的效率,为其在组织工程的应用确立最佳培养方案。方法以3个月龄新西兰大白兔为实验对象,通过对全血培养法、溶血纯化法、密度梯度离心法进行比较性研究,对克隆形成率、首次传代时间、扩增成功率等指标进行比较。结果对克隆形成率和扩增成功率而言,溶血纯化方法最低传代时间为20.5d,全血培养方法有部分提高传代时间为(13.9±2.9)d;而密度梯度离心方法的效率最高,首次传代时间为(7.5±0.7)d。结论对于成年动物穿刺获取骨髓间充质干细胞而言,密度离心>全血培养>溶血纯化方法,明确了一种实用有效的骨髓间充质干细胞分离培养方法。     

低强度脉冲超声波对人骨膜细胞的生物学效应

目的：从细胞水平探讨低强度脉冲超声波对体外分离培养的人骨膜细胞的生物学效应，分析低强度脉冲超声波可能的作用途径，为合理化的临床应用提供实验依据。方法：实验于2002-05／11在香港中文大学矫形外科学系完成。选取香港中文大学威尔士亲王医院矫形外科收治的1例27岁尺骨骨不连患者，以其尺骨骨膜培养的传2代细胞用于实验。按低强度脉冲超声波（30mW／cm^2）作用于体外培养的人骨膜细胞的时间剂量分为4组：5min／d组，10min／d组，20min／d组，空白对照组。在超声波作用1，2，4d&;#183;后检测各组DNA合成量、四甲基偶氮唑蓝摄取情况、碱性磷酸酶活性及骨钙素分泌量。结果：与空白对照组比较，5min／d组，10min／d组，20min／d组给予低强度脉冲超声波后，骨膜细胞DNA合成及四甲基偶氮唑蓝摄取量无明显变化（P〉0．05）；10min／d组与20min／d组骨膜细胞单位质量蛋白中碱性磷酸酶活性显著升高（P〈0.05）；20min／d组骨膜细胞受1，25-二羟基维生素D3刺激后分泌骨钙素显著增加，形成钙结节能力显著增强（P〈0．01）。结论：20min／d以内剂量的低强度脉冲超声波对人骨膜细胞的生长增殖无明显影响，但能够增强人骨膜细胞碱性磷酸酶活性的表达，促进细胞分泌骨钙素及钙盐沉积，具有显著促进人骨膜细胞向成骨细胞分化的生物学作用。