3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。     

PIAS3绿色荧光蛋白表达载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法：利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PIAS3。应用脂质体法转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株。荧光显微镜观察蛋白表达,用RT-PCR和Westernblot检测PIAS3的表达,Annexin V2FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。结果：转染PIAS3基因的细胞株外源目的基因和蛋白表达增强,瞬时转染48 h后,光镜下可见部分细胞变圆,部分细胞脱落死亡;对照组和未转染组无明显变化。流式细胞仪分析显示,pEGFP-N1-PIAS3转染组凋亡细胞增多,细胞凋亡率显著高于未转染组和pEGFP-N1转染组,P=0.0073;U251细胞转染pEGFP-N1-PIAS3后细胞周期阻滞于S期,S期细胞比例增高,P=0.025,G2期细胞比例降低。结论：外源性PIAS3使U251阻滞在S期,诱导胶质瘤细胞凋亡。     

肺癌细胞系mtDNA D-环序列微卫星不稳定性的研究

目的:分析七种常用肺癌细胞系线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)非编码D-环区序列的微卫星不稳(mitochon-drialmicrosatelliteinstability,mtMSI)现象并探讨其意义。方法:培养七种常用肺癌细胞系,人肺腺癌A549、SPC-A-1、Calu-3和LTEP-a-2,人肺扁平上皮癌QG-56,人高转移肺癌95-D,人小细胞肺癌NCI-H446。应用改良一步法提取七种肺癌细胞系mtDNA,设计引物扩增非编码区,PCR产物直接测序,以剑桥序列为标准,对比分析D-环区序列mtMSI情况。结果:七种常用肺癌细胞系mtDNAD-环区中,全部出现了mtMSI。在2个不同位点上共发现10个mtMSI。结论:肺癌细胞系mtMSI发生率高,D环区碱基序列的mtMSI可能与肿瘤的发生发展有关。     

孤立性骨骼浆细胞瘤伴孤立性肝脏浆细胞瘤1例

1 临床资料 患者,男,54岁,因"间断背部疼痛6个月余,双侧下肢进行性麻木、运动障碍2个月"于2008年11月4 日到第三军医大学新桥医院就诊.查体:绝对卧床不起;浅表淋巴结未触及肿大;胸廓形态正常,双肺呼吸音清;脊柱生理弯曲,无前凸、侧弯畸形.     

线粒体DNA与细胞癌变关系研究进展

人类细胞线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ＤＮＡ,ｍｔＤＮＡ）是一具有１６５６９个碱基对的双链闭环分子,它包含２２个ｔＲＮＡ和２个ｒＲＮ基因,并编码１３个有关细胞线粒体氧化磷酸化的蛋白多肽。与核ＤＮＡ相比,ｍｔＤＮＡ分子更容易受致癌物的损伤。提示细胞质遗传与核遗传系统共同参与了细胞癌变过程。本综述重点讨论ｍｔＤＮＡ损伤与突变在细胞癌变中的地位和可能的作用机制。     

肺炎INK4a／ARF基因缺失与突变研究进展

ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ基因位于人第９号染色体短臂２区１带（９ｐ２１）,是近期发现的新型换癌基因,其编码产物分别为ｐ１６＾ＩＮＫ４ａ和ｐ１４＾ＡＲＦ,它们在细胞增殖周期中起负调控作用。本综述了肺癌ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ基因的结构和功能状态,提示该基因异常是肺癌的又一重要分子标志,肺癌ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ基因功能的失活,与该基因位点的纯合或杂合缺失、点突变和５’－ＣｐＧ岛异常甲基化密切相关。     

石蜡包埋组织中DNA甲基化特异性PCR技术

目的 以石蜡包埋组织提取的DNA为模板进行DNA甲基化特异性PCR(MSP)检测,研究其可行性.方法 35例石蜡包埋肺癌组织DNA样品制备和亚硫酸氢盐修饰后进行MSP扩增检测.结果 石蜡包埋组织MSP检出率与文献采用新鲜组织标本报道一致.结论 MSP通过选择合适的实验条件,可适用于石蜡包埋组织DNA甲基化分析.     

人白细胞线粒体DNA的快速分离与鉴定

人白细胞线粒体ＤＮＡ的快速分离与鉴定胡义德钱桂生陈维中黄桂君李淑平胡建林关于白细胞线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）的提取方法，国内外已有较多报道。但这些方法存在所需细胞量大、实验设备及试剂昂贵、操作程序复杂等缺点。为此，我...     

肺癌p14ARF和p16INK4a基因协同表达缺失及其意义

目的：研究抑癌基因位点ＩＮＫ４ａ－ＡＲＦ在肺肿瘤细胞中的表达状况,揭示ｐ１４ＡＲＦ和ｐ１６ＩＮＫ４ａ协同表达缺失与肺癌发生发展的相关性。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ对６株肺癌细胞（ＳＰＣ－Ａ－１,Ｃａｌｕ－１,Ｈ４４６,ＳＨ７７,Ａ５４９,Ｈ４６０）的ＩＮＫ－４ａ－ＡＲＦ基因位点在ｍＲＮＡ、蛋白水平上进行检测,对ＰＣＲ产物进行纯化和测序分析。结果：６株肺癌细胞中,有３株细胞（Ｈ４     

p14~(ARF)对照射后肺癌细胞加速再群体化抑制效应

目的　探讨抑癌蛋白p14ARF功能恢复对照射后肺癌细胞加速再群体化的影响。方法　以ARF基因纯合缺失但表达野生型p5 3的人肺腺癌A5 49和H46 0细胞系为靶细胞 ,应用Fugene 6对照射后的细胞进行pCI neo p14ARF 表达载体基因转染 ,检测照射前后和转染前后细胞潜在倍增时间(Tpot)、细胞周期分布及克隆存活率变化。结果　 6GyX射线照射后 96h处 ,A5 49和H46 0细胞Tpot分别缩短 2 5 .4%和 2 9.2 % ,与照射前比较差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。此时进行p14ARF表达载体基因转染 ,恢复p14ARF功能 ,可使A5 49和H46 0细胞Tpot延长并接近照射前水平 ,同时伴随G0 G1 期和G2 M期细胞显著增加 ,S期细胞显著下降 ,克隆存活率下降。结论　A5 49和H46 0细胞照射后存在加速再群体化。p14ARF功能恢复对其照射后加速再群体化有抑制作用 ,该作用与p14ARF的G1 、G2 期阻滞功能密切相关