改良一步法制备人外周血白细胞线粒体DNA

目的建立从少量外周血中提取白细胞线粒体DNA(mtDNA)的快速、简便方法.方法 58份抗凝血静置后取白细胞层,采用碱变性法裂解细胞,酚/氯仿/异戊醇抽提,RNA酶消化后再抽提及沉淀,PCR扩增产物电泳鉴定.结果获得的mtDNA样品不存在蛋白质等污染,用特异性mtDNA PCR引物从58例核酸样品中均能扩增出1 528bp的mtDNA基因片段.结论改良一步法是一种省时、经济、实用、重复性好、能满足常规分子生物学和遗传学分析需要的mtDNA制备新方法.     

如何推动肺癌深层次意义上的个体化治疗进程

众所周知,近年来全球肺癌的总体发病率和死亡率在所有癌症种类中一直稳居首位,我国也不例外,而且这种趋势还将在较长的时间段内保持延续。导致这一局面的重要原因一是致病因素未得到有效控制,二是早期诊断未能有效实施,三是治疗方法未能达到真正科学、合理和有效。作为现阶段的临床医生,每天要面对无数肺癌尤其是中晚期肺癌患者,     

肺癌生物及分子靶向治疗临床研究进展

世界卫生组织(WHO)2003年4月3日发表《世 界癌症报告》说,根据目前癌症的发病趋势,2020年 全世界癌症发病率将比现在增加50%,全球每年新 增癌症患者人数将达到1500万人。该报告还指出, 现全世界发病率最高的癌症是肺癌,每年新增患者 为120万人。由于大多数肺癌患者在诊断明确时已 经失去了手术机会或者术后出现复发和转移,放化 疗又会产生明显的毒副作用及治疗抗性,导致因肺 癌死亡的人数占所有癌症死亡人数的17.8%,死亡 率比排位第二的胃癌高出7.4个百分点。因此,近年 来各国学者特别重视对肺癌治疗的研究,尤其使肺 癌的生物及分子靶向治…     

原发性肝癌经TACE联合索拉非尼治疗的MSCT评价

目的:通过多层螺旋CT(MSCT)评价来探讨原发性巨块型肝癌经导管化疗栓塞(TACE)联合索拉非尼的治疗价值.方法: 经TACE联合索拉非尼治疗的20例原发性巨块型肝癌患者为实验组,TACE治疗后的次日起口服索拉非尼200mg,每日2次,持续口服3周.对照组为20例单纯行TACE治疗的原发性巨块型肝癌患者,并应用MSCT测量瘤体体积变化进行疗效评价.结果:实验组的中位生存期为(14.8±3.6)月,明显高于对照组的(8.2±4.9)月(P<0.01 ).实验组总有效率和临床获益率分别为 (32.4±9.7)%和(76.2±10.7)%,均明显高于对照组的(11.8±3.8)%和(43.8±8.2)%(P<0.01).结论: TACE联合索拉非尼治疗原发性肝癌安全有效,MSCT体积测量可直观地评价其治疗效果.     

基因芯片技术在人线粒体遗传研究中的应用

线粒体携带除核DNA外的遗传物质线粒体DNA.由于线粒体DNA的多拷贝,随细胞分裂的随机性,造成了非严谨性的遗传特性.研究发现,线粒体编码的13个多肽在电子传递链中发挥重要作用,同时也可能直接影响细胞的分裂和增殖.因此,线粒体的功能异常可引起许多与能量代谢相关的疾病,称之为线粒体相关性疾病.基因芯片技术可同时检测成千上万个基因的突变和差异表达情况,为我们全面研究线粒体遗传功能规律提供了条件和可能性.本文综述了基因芯片技术在mtDNA突变分析、mtDNA基因表达谱分析、线粒体疾病研究及法医学方面的研究进展.     

肺鳞癌组织mtDNA HVRⅡ序列突变研究

背景与目的线粒体DNA是除细胞核外的惟一遗传物质，分成编码区和非编码D-环区。本研究拟分析肺鳞癌患者外周血白细胞、癌旁组织及其癌组织线粒体DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）非编码D-环高变Ⅱ区（hypervariable regionⅡ，HVRⅡ）序列突变的情况，并探讨其意义。方法应用改良一步法提取15例肺鳞癌患者外周血白细胞、癌旁组织及癌组织mtDNA，PCR产物直接测序，对比分析HVRⅡ区序列突变情况。结果15例肺鳞癌患者癌组织mtDNA HVRⅡ中，14例出现了突变（93．33％）。共发现88个突变，其中87个突变位于重链起始区域，尤其是保守序列区及线粒体转录因子1、2结合位点（TFX和TFY）。结论肺鳞癌患者癌组织mtDNA HVRⅡ区突变发生率高，在肺鳞癌发生发展中可能有重要作用。     

Livin异构体特异性siRNA表达载体的构建及其在SPC-A1细胞中的稳定表达

目的：利用基因转染和RNA干涉（RNA interference．RNAi）技术在肺腺癌SPC-A1细胞株中分别建立2种Livin异构体的基因沉默体系，旨在进一步体外观察两种异构体基因沉默诱导SPC-A1细胞凋亡效应。方法：构建Livin两种异构体小干涉RNA（small interfering RNA，siRNA）表达载体；以电穿孔法转染SPC-A1细胞，经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆；通过半定量RT-PCR和Western blot验证Livin异构体在SPC-A1细胞中的基因沉默效率，建立高效Livin异构体基因沉默体系。结果：成功获得Livin异构体siRNA表达载体，经基因转染以及G418抗性筛选，成功建立Livin异构体特异基因沉默SPC-Al细胞克隆。结论：RNAi能高效特异阻断两种Livin异构体表达，为进一步研究其不同的抗凋亡生物学功能，探讨其作为诱导肺癌细胞凋亡治疗分子靶点以及提高肺癌细胞放化疗敏感性打下基础。     

细胞周期素D1shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的 构建针对细胞周期素D1(cyclinD1,由CCND1基因编码)的shRNA表达载体,筛选出有效序列,观察其对肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 设计针对cyclin D1基因编码区的3条寡核苷酸链,体外退火后克隆入干扰栽体Pgenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定.以脂质体法将空载体Pgenesil-1-K和3个重组质粒Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13分别导人549肺腺癌细胞,48 h后用Real time PCK和Western blotting技术检测各实验组肺腺癌细胞内cycli D1 mRNA及蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞周期观察构建的载体对A549细胞增殖的影响.结果 经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的 基因片断.转染cyclin D1-shRNA的A549细胞48 h后测定cyclin D1 mRNA和蛋白含量.以Pgenesil-1-CCND13抑制cyclin D1 mRNA及蛋白表达效果最为有效.其抑制率分别为62%和60%,而且它能抑制A549细胞的增殖.结论 成功构建了针对cyclin D1的RNA干扰表达载体Pgenesil-1-CCND11、Pgenesil-1-CCND12、Pgenesil-1-CCND13,Pgenesil-1-CCND13能有效抑制cyclin D1在A549细胞中的表达,并抑制A549的增殖,为进一步应用于肺腺癌的治疗实验研究奠定了基础.     

多发性非恶性骨质破坏误诊为骨转移瘤3例分析

一些非肿瘤性疾病可能引起多发性骨质破坏，临床症状以及影像学表现常常与转移性骨肿瘤非常相似，很容易误诊为转移性骨肿瘤。现将所遇误诊3例分析如下。     

3-BrPA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用研究

目的探究3-Br PA对肺癌A549/DDP细胞耐药的逆转作用及其机制。方法 1细胞培养:RPMI1640培养基培养肺癌A549细胞及人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP细胞;2采用CCK8及Western blot法观察3-Br PA对A549/DDP细胞的耐药逆转作用和P-糖蛋白(P-glycoprote,P-gp)的表达水平;采用流式细胞术检测不同浓度3-Br PA作用A549/DDP细胞后细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh123)的蓄积情况。结果顺铂对A549细胞、A549/DDP细胞及3-Br PA作用后的A549/DDP细胞的IC50分别为6.714μg/ml、38.99μg/ml及12.86μg/ml,逆转倍数为3.03,相对逆转效率为81%。3-Br PA可使A549/DDP细胞的P-gp表达下调。3-Br PA可使A549/DDP细胞内的Rh123蓄积增多并呈剂量依赖性。结论 3-Br PA可逆转A549/DDP细胞对顺铂耐药,作用机制可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。