瘤内注射慢病毒载体介导的Bmi1-shRNA对A549皮下移植瘤的抑制作用

目的探讨瘤内注射慢病毒介导的原癌基因Bmi1的特异性短发夹RNA(Bmi1-shRNA)对人非小细胞肺癌免疫缺陷鼠皮下种植瘤生长的抑制作用。方法建立NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠人肺癌A549荷瘤模型,共27只,分为3组。其中治疗组移植瘤内注射含有Bmi1-shRNA的慢病毒载体,阴性对照组注射含有NC-shRNA的慢病毒载体,空白对照注射同剂量PBS。通过激光共聚焦观察移植瘤内绿色荧光蛋白(GFP)表达,RT-PCR、Western blot检测Bmi1mRNA、蛋白水平的表达,观察RNA干扰效果,测量肿瘤体积,计算肿瘤抑制率。结果将A549细胞移植到NOD/SCID鼠背部皮下,成瘤率为100%。激光共聚焦观察治疗组及阴性对照组皮下移植肿瘤组织中有GFP表达,而空白对照组未见GFP表达。治疗组NOD/SCID小鼠的肿瘤体积较阴性对照组和空白对照组显著缩小(P<0.05),肿瘤抑制率分别为52.9%和57.9%。Bmi1-shRNA治疗组中的Bmi1蛋白明显降低,相对空白对照组和阴性对照组,蛋白表达抑制率分别为51.1%、50.3%,差异有显著性(P<0.05)。结论利用慢病毒载体成功...     

线粒体DNA HVR区Ⅰ序列突变与肺鳞癌关系的研究

目的分析肺鳞癌患者外周血白细胞及其癌组织线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)非编码区(又称D-环)高变区Ⅰ(hypervariable regionⅠ,HVRⅠ)序列的突变情况并探讨其意义.方法应用改良一步法制备13例肺鳞癌患者外周血白细胞及肺鳞癌组织mtDNA,PCR产物直接测序,对比分析HVRⅠ区序列突变情况.结果13例肺鳞癌患者癌组织mtDNA HVRⅠ区中,有8例出现了突变,占61.54%;在25个不同位点上共发现30个突变,其中点突变占56.67%(17/30),插入和缺失突变占43.33%(13/30),并发现1例肺鳞癌病人存在10bp片段的缺失.结论肺鳞癌患者癌组织细胞mtDNA HVRⅠ区突变发生率高,其中点突变占有重要地位,插入和缺失突变也不可忽视.     

EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者化疗和靶向治疗疗效的回顾性分析

目的探讨EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者使用化疗和EGFR-TKI靶向治疗疗效的差异。方法回顾性分析,收集第三军医大学新桥医院2010年1月至2015年12月间EGFR基因检测为21外显子L858R突变的病例资料完整的ⅢB/Ⅳ期一线接受化疗或EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)靶向治疗的肺腺癌患者作为研究对象,将患者根据一线治疗方式分为化疗组和靶向治疗组,对两组患者近期疗效(客观缓解率ORR、疾病控制率DCR)及生存期(无进展生存期PFS、总生存期OS)进行回顾性研究。结果 1共收集符合纳入标准的EGFR基因21外显子L858R突变的肺腺癌患者68例,其中化疗组患者40例(58.8%),靶向治疗组患者28例(41.2%),两组患者在性别、年龄、吸烟史、PS评分和临床分期等临床资料基线水平一致(P0.05);2化疗和靶向治疗组ORR分别为45.0%和17.9%(P=0.020);DCR分别为95.0%和71.4%(P=0.012),PFS分别为9.901个月和6.746个月(P=0.045);OS分别为21.738个月和23.611个月(P=0.378)。结论与靶向治疗相比,EGFR基因21外显子L858R突变肺腺癌患者化疗治疗在近期疗效及PFS上较有优势,OS未见明显获益。     

3D-CRT结合同步化疗治疗非小细胞肺癌的临床研究

背景与目的 目前放射治疗、化疗综合治疗Ⅲ期非小细胞肺癌的方法已被广泛采用,但关于NSCLC三维适形放射治疗(3D-CRT)同步化疗的报道还较少.本研究旨在通过3D-CRT同步化疗与单纯3D-CRT治疗Ⅲ期NSCLC,观察3D-CRT同步化疗治疗NSCLC的疗效和毒副作用.方法 88例Ⅲ期患者随机分入同步组和单放组.同步组第1周和第4周及三维适形放射治疗结束后行方案化疗(DDP:30 mg,d1-3,VP-16:100 mg,d1-5),共6周期.单放组行单纯常规3D-CRT治疗.结果 同步组和单放组总有效率分别为90.9%和68.2%,差异有统计学意义(P<0.05);同步组患者1、2、3年生存率分别为68.8%、35.1%、19.7%,中位生存期为18.8个月;单放组患者1、2、3年生存率分别为38.9%、22.8%、12.4%.中位生存期为12.6个月.两组比较差异有统计学意义(P<0.05).两组不良反应除骨髓抑制外,差异无统计学意义.结论 三维适形放射治疗结合同步化疗治疗Ⅲ期NSCLC近期疗效较好,生存率提高,毒性也有所增加,但能为绝大多数患者耐受.     

041 肺癌INK4a/ARF基因缺失与突变研究进展

INK4a/ARF基因位于人第9号染色体短臂2区1带(9p21),是近期发现的新型抑癌基因,其编码产物分别为p16IINK4a和p14ARF,它们在细胞增殖周期中起负调控作用.本文综述了肺癌INK4a/ARF基因的结构和功能状态,提示该基因异常是肺癌的又一重要分子标志.肺癌INK4a/ARF基因功能的失活,与该基因位点的纯合或杂合缺失、点突变和5-CpG岛异常甲基化密切相关.     

肺癌INK4a/ARF基因缺失与突变研究进展

INK4a/ARF基因位于人第9号染色体短臂2区1带(9p21),是近期发现的新型抑癌基因,其编码产物分别为p16~(INK4a)和p14~(ARF),它们在细胞增殖周期中起负调控作用 本文综述了肺癌INK4a/ARF基因的结构和功能状态,提示该基因异常是肺癌的又一重要分子标志。肺癌INK4a/ARF基因功能的失活,与该基因位点的纯合或杂合缺失、点突变和5＇-CpG岛异常甲基化密切相关     

二次放射促进p14~(ARF)诱导的低再群体化肺癌细胞凋亡

抑癌蛋白ｐ14ＡＲＦ是细胞周期素依赖性激酶 4(ＣＤＫ4)抑制蛋白 (ｐ16 ＩＮＫ4ａ)可变读框基因 (ＡＲＦ)编码的产物 ,具有显著的细胞周期抑制效应。本实验在前期研究证实了ｐ14ＡＲＦ可抑制肺癌细胞放射后加速再群体化 (ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ)的基础上 ,对ｐ14ＡＲＦ诱导的低再群体化肺癌细胞实施 2次放射打击 ,观察细胞凋亡变化1　材料与方法1.1　载体和细胞系 :选ｐＣＩ ｎｅｏ ｐ14ＡＲＦ为人ｐ14ＡＲＦ真核表达载体 ,用存在ＡＲＦ基因原发纯合缺失但表达野生型ｐ5 3的人肺腺癌Ａ5 49和Ｈ46 0细胞系为靶细胞…     

Beclin-1在非小细胞肺癌中的表达与意义

目的 探讨白噬重要调控因子Beclin-1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及其临床意义.方法 收集150例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织并制成组织芯片,应用免疫组化的方法检测Beclin-l在肺癌组织及癌旁组织中的表达情况.分析Beclin-1的表达与肺癌不同临床参数之间的关系并对病例进行生存分析.结果 Beclin-1在肺癌组织的阳性表达率(26.00％)显著低于癌旁组织(82.00％)(P＜0.05);肺鳞癌组织中Beclin-1的阳性表达率(34.66％)显著高于肺腺癌(17.34％)(P＜0.05);Beclin-1的表达率在不同性别、年龄、分化程度、淋巴结转移、远处转移组间无显著差异(P＞0.05);Beclin-1阴性表达的非小细胞肺癌患者的生存率显著低于阳性表达的患者(P＜0.05).结论 Beclin-1可能是一个非小细胞肺癌治疗的新的靶点,有可能成为非小细胞肺癌病理类型判断的辅助指标和预后评估候选指标之一.     

Lentivirus介导RNAi抑制人胶质瘤干细胞STAT3基因生物学效应观察

目的了解慢病毒载体对胶质瘤干细胞的亲嗜性及对靶基因表达的干扰效率，初步探索干扰STAT3基因对胶质瘤干细胞增殖的影响。方法构建STAT3基因shRNA的慢病毒表达载体，经293T细胞包装后，获得可表达STAT3基因shRNA的慢病毒颗粒；活性载体病毒感染人原代胶质瘤干细胞后流式细胞分析细胞感染效率；实时定量多聚酶链反应（PCR）和Westernblot检测细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达及活化水平；增殖分析试剂盒测定细胞生长曲线，流式细胞分析细胞周期分布。结果在病毒感染比率值20：1时慢病毒载体对人原代胶质瘤干细胞的感染效率为98．6％；细胞感染可表达STAT3基因shRNA的载体慢病毒后，STAT3基因mRNA显著下降，抑制率为84．3％，STAT3蛋白表达下降81．5％，活化的pSTAT3下降97．9％；胶质瘤干细胞STAT3表达、活化受抑后细胞生长显著变慢，G1期细胞比例显著增高。结论慢病毒载体对人原代胶质瘤干细胞有着很高的感染效率，介导的RNAi可显著抑制靶基因的表达与活化，是对人胶质瘤干细胞基因功能研究的理想工具。人胶质瘤干细胞STAT3基因受抑后细胞生长显著变慢，出现G1期阻滞。