外泌体在肺移植中的研究进展

外泌体是一种由绝大多数细胞分泌的微小囊泡,在体内生理以及病理过程中发挥重要作用.发生排斥反应的肺移植受者(LTxR)循环外泌体中含有不匹配的人类白细胞抗原(HLA)和肺相关自身抗原(如K-α1微管蛋白和胶原蛋白V)等,外泌体可能是由自身抗体诱导产生的,循环中的外泌体引发免疫反应,导致肺移植受者发生排斥反应.本文从3个方...     

HLA-G与肾移植术后巨细胞病毒活动性感染的相关性研究

目的 研究HLA-G与肾移植术后巨细胞病毒(CMV)活动性感染的相关性,分析其作用机制及意义。方法 初次肾移植受者215例,按照术后是否发生CMV活动性感染将受者分为CMV阳性组和CMV阴性组,采用流式细胞术检测膜结合型HLA-G1 (mHLA-G1)的表达,采用酶联免疫吸附试验检测可溶性HLA-G5 (sHLA-G5)的表达,采用逆转录聚合酶链法检测HLA-G mRNA的表达,采用蛋白质印迹法验证sHLA-G5的表达,采用免疫组织化学法和HE染色观察移植肾组织中HLA-G的表达,采用ROC曲线分析sHLA-G5水平预测CMV活动性感染的Cutoff值。结果 术前两组间HLA-G表达的差异无统计学意义(P＞0.05)。术后两组间外周血淋巴细胞表面mHLA-G1均呈低表达,CMV pp65阳性时亦无明显变化。CMV阳性组外周血中CD14+ mHLA-G1+细胞显著升高(P＜0.05),达到(45.53±17.32)％,转阴后下降至(10.22±5.78)％。CMV阳性组外周血中sHLA-G5表达水平明显升高(P＜0.05),其预测CMV活动性感染的最适Cutoff值为202.9μg/L,具有很高的诊断准确性。CMV阳性组受者外周血中HLA-G mRNA的表达水平均显著高于CMV阴性组(P＜0.05)。12例CMV活动性感染受者移植肾活检样本中,10例肾小管上皮细胞HLA-G表达呈阳性。结论 HLA-G在外周血中的表达显著升高和移植肾肾小管上皮细胞的阳性表达可能是保护移植肾功能的机制之一。以sHLA-G5表达水平202.9μg/L作为Cutoff阈值,具有很好的判断CMV活动性感染的价值。     

环保脱蜡液替代二甲苯在肝肾标本病理制片中的应用

目的 探讨环保脱蜡液替代二甲苯作透明脱蜡剂在肝肾标本病理制片过程中的应用.方法 取解放军第309医院器官移植中心肝、肾穿刺标本,经固定、水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色等步骤制成病理切片,其中二甲苯均用环保脱蜡液替代,进行常规HE染色、免疫组织化学染色、Masson三色染色,观察染色结果,进行病理诊断.结果 用环保脱蜡液替代二甲苯作透明脱蜡剂,切片过程顺利,组织无变脆、变硬现象;染色后,背景清晰、颜色鲜明,易于观察.结论 环保脱蜡液可替代二甲苯在肝肾标本病理制片中发挥作用,值得在病理诊断科室及基础研究科室推广.     

磁珠-流式细胞术检测肺结核患者Th1/Th2细胞因子

目的 建立磁珠-流式细胞术检测肺结核病患者血浆中的Th1/Th2细胞因子,为结核病患者免疫监测提供一种快速和客观的方法.方法 按Th1/Th2细胞因子磁珠分析试剂盒说明书进行,Th1/Th2细胞因子标准品倍比稀释,50μL等体积混合的Th1/Th2细胞因子捕获磁珠加入检测管,依次加入50μL PE标记的检测试剂,50μL标准品或50μL待检样品震荡混匀,室温避光3 h,加1 mL洗液,200 g离心5 min,加300μL洗液悬浮磁珠,上流式细胞仪前各样品振荡3～5 s.采集流式图谱并用BD CBA software(version 4.0;BDBiosciences)软件分析,并换算成细胞因子浓度.结果 涂阳肺结核患者和涂阴肺结核患者血浆中IFN-γ显著升高,而IL-5显著降低;涂阳肺结核患者循环IL-10显著升高,涂阴肺结核患者循环IL-10含量绝对值升高,但差异无显著性.结论 与常规ELISA法相比,磁珠-流式细胞术检测细胞因子需更少的时间和样品.     

地奥司明对肾缺血再灌注大鼠肾组织MPO和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L水平的影响

 目的：观察地奥司明（DOSM）对肾缺血/再灌注（I/R）大鼠肾组织髓过氧化物酶（MPO）和中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L表达水平的影响。方法: 180只SD大鼠随机分成3组:假手术组(SO)、肾缺血/再灌注模型组(I/R)和地奥司明+肾缺血/再灌注模型组(DOSM+I/R)。采用ELISA方法测定肾脏组织中MPO的水平,流式细胞分析法检测中性粒细胞表面CD11b、CD54和CD62L的表达水平。结果: 在1h、3h、6h、12h、24h和48h不同时间点的肾组织中,I/R和DOSM＋I/R两组MPO活性均随时间逐渐升高,于6h达最高,后逐渐下降,两组相比有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）。中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达在相同时段I/R组显著高于SO组（P＜0.05或P＜0.01);而在DOSM+I/R组显著低于I/R组（P＜0.05或P＜0.01)。结论：DOSM可显著降低肾I/R病理过程中MPO活性,显著降低中性粒细胞CD11b、CD54及CD62L的表达,有助于减轻I/R时炎性细胞的浸润。     

流式细胞技术检测肾脏移植受者pp65抗原血症的意义

背景:临床对pp65 抗原的检测主要采用免疫荧光技术,但是该方法步骤繁琐,需要对标本进行人工计数,在检测过程中受人为的影响因素较多。目的:探讨使用简便的流式细胞技术检测人巨细胞病毒 pp65 抗原血症的可行性及其特点。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-09/2008-03 在解放军总医院附属二院器官移植中心完成。材料:肾脏移植受者外周血标本145份。方法:分离人外周血白细胞,分别采用免疫荧光技术与流式细胞技术对人巨细胞病毒 pp65 抗原检测。主要观察指标:流式细胞仪在激发波长为 488 nm 处的吸收峰判断阳性检出。结果:对肾脏移植受者进行免疫荧光技术检测,在 15 例受者的 25 份标本中检出阳性,检出的特异性为 76.0%;对肾脏移植受者进行流式细胞技术检测,在 5 例受者的 11 份标本中检出阳性,检出的特异性为 54.5%。使用 Fisher 确切概率法对两种不同检测方法检出的效果进行检验,结果两种检测方法的检出效果差异无显著性意义(P > 0.05)。结论:免疫荧光技术和流式细胞技术两种 pp65 抗原检测方法的检出效果无差异,因此可以通过流式细胞技术对 pp65 抗原进行检测,并且结果更加客观。     

两种酶联免疫法检测SARS病毒特异性抗体的比较

严重急性呼吸综合征 (severeacuterespiratorysyndrome,SARS)是由新型冠状病毒引起的以呼吸道传播为主的急性传染病。目前用于检测SARS病原抗体的酶联免疫吸附 (ELISA)法是世界卫生组织 (WHO)推荐的临床检测抗体的主要方法。ELISA法测抗体又分为间接法和双抗原夹心法 ,本文就这两种方法的检测情况进行了比较。1　材料与方法1 1　血清标本　按常法分别抽取 2 0例健康人 ,2 0例发热非SARS患者和 87例住院不同时期的SARS患者静脉血 ,2h内离心分离血清 ,— 2 0℃冻存 ,1周内检测抗SARS病毒特异性抗体。1 2　试剂　间接ELISA法使…