大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、纯化与培养适宜条件的筛选

目的:为获得大量、高纯度的骨髓间充质干细胞,筛选体外分离、纯化和培养的适宜条件。方法:实验于2006-08/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院进行。①实验材料:2月龄SD大鼠,雄性,体质量(100±20)g,由解放军兰州军区兰州总医院实验动物科提供。②实验方法:分别采用全骨髓法(贴壁筛选法)和密度梯度离心法分离和纯化大鼠骨髓间充质干细胞。将采用密度梯度离心法获得的单个核细胞按1×107,1×108,1.5×108,2×108,1×109,2×109L-1的接种密度分别分成1～6组,接种在24孔板内,每组接种6孔。比较细胞出现伸展时间、原代培养时间。于细胞接种后第1,2,3,4,5,6天进行首次换液。将换下的部分细胞置于新的培养皿中进行培养,至少培养3d,观察是否还有新的贴壁细胞出现,以确定首次换液时间。观察体积分数为0.10,0.12,0.15,0.18,0.20血清对原代及传代后细胞生长的影响,比较不同浓度血清中细胞数量、集落形成率。集落形成率=集落数目/接种细胞数目×100%。采用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞细胞周期。选取第5代扩增的骨髓间充质干细胞,接近完全融合后进行成骨和成脂肪诱导培养。诱导剂分别为:10nmol/L地塞米松、0.05nmol/L抗坏血酸及10nmol/Lβ-甘油磷酸钠;1μmol/L地塞米松、0.5mmol/LIBMX、0.01mmol/L人胰岛素、0.01mmol/L吲哚美辛。并设未加诱导剂培养液培养的骨髓间充质干细胞对照。③实验评估:采用碱粒酶测定成骨诱导后细胞,采用油红O染色鉴定成脂肪诱导后细胞。结果:①细胞出现伸展时间、原代培养时间:密度梯度离心法培养细胞出现伸展时间与全骨髓法相比,差异无显著性意义。密度梯度离心法原代培养时间较全骨髓法长[(9.41±1.11),(14.73±2.86)d,P<0.05]。②不同接种密度对密度梯度离心法所获细胞生长影响:1×109L-1组细胞出现伸展时间及原代培养细胞融合时间较早。1×107L-1组培养20d内不能传代。③首次换液时间对细胞生长的影响:第5天开始在换下的液体中,很少有再贴壁的细胞出现。因此首次换液时间应为第5天。④不同体积分数血清对细胞生长的影响:在其他条件相同的前提下,骨髓间充质干细胞在含体积分数为0.12胎牛血清中细胞集落形成率最高。⑤成骨及成脂诱导:成骨诱导的骨髓间充质干细胞经碱粒酶测定,结果钙化结节呈蓝色。成脂诱导的骨髓间充质干细胞经油红O染色,苏木精-伊红复染后胞内脂滴呈桔红色,核呈蓝色。结论:采用密度梯度离心法分离纯化的骨髓间充质干细胞以1×109L-1密度接种,在含体积分数为0.12胎牛血清的MEM培养基中培养,生长状况良好,增殖速度快。     

核糖核酸干扰缺氧诱导因子-1α对食管鳞癌细胞的抑制效果研究

目的 探讨人食管鳞癌细胞系Eca-109中RNA干扰抑制缺氧诱导因子(HIF)-1α的体内、外实验效果.方法 用针对HIF-1α mRNA的小发夹RNA(shRNA)真核表达载体转染人食管鳞癌细胞Eca-109,检测HIF-1α、基质金属蛋白酶(MMP)-2、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1表达,挑选干扰效果最好的细胞命名为Eca-109/shRNA,流式细胞仪检测细胞凋亡率.6周龄BALB/C裸鼠30只,按皮下注入细胞不同均分为三组,A组为Eca-109,B组为转染空质粒Eca-109(Eca-109/Neo),C组为Eca-109/shRNA.观察肿瘤出现时间,测量裸鼠体质量、瘤体大小,计算肿瘤体积.28 d后处死全部裸鼠,取瘤体称重.用Western印迹法检测肿瘤组织HIF-1α蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、凋亡抑制蛋白bcl-2和生存素的表达.结果 Eca-109/shRNA细胞的HIF-1α蛋白表达明显被抑制,同时MMP-2,GLUT-1表达也明显下调,细胞凋亡率为(21.32±1.12)%,比Eca-109细胞和Eca-109/Neo细胞[(1.17±0.85)%和(5.31±1.46)%]明显升高(P＜0.01).A、B组裸鼠接种1周左右成瘤,C组裸鼠2周左右成瘤,成瘤时间较A、B组延迟,且瘤体生长减慢.28 d后移植瘤体积:A组为(1.29±0.34)cm3,B组为(1.19±0.35)cm3,C组为(0.45±0.20)cm3.瘤重:A组为(0.73±0.13)g,B组为(0.71±0.15)g,C组为(0.21±0.11)g.C组与A、B组比较移植瘤体积和瘤重差异均有统计学意义(P值均＜0.01),抑瘤率达65%.Western印迹检测蛋白表达,C组HIF-1α、VEGF、bcl-2和生存素表达均比A、B组明显减少(P值均＜0.01).结论 在食管癌Eca-109细胞中利用RNA干扰HIF-1α能抑制肿瘤生长,其机制为抑制VEGF介导的肿瘤血管生成和无氧糖酵解,可能与影响bcl-2和生存素的表达,促进肿瘤细胞凋亡有关.     

除了鸡蛋,药店还能送什么

只要搞清楚药店的消费群体,按照主力客户群的需求与喜好去选择赠品,难题就会迎刃而解. 连锁发展了15年,送鸡蛋的热潮依然不减. 15年间,顾客群体的年龄结构和喜好都在悄然发生着变化,所谓今时不同往日,促销买赠活动该送些什么呢?有什么新鲜“玩意儿”可以更加打动顾客呢? 药店在以下三种情况下需要使用赠品. 1.新店开业举行开业促销活动. 2.门店大型促销活动(单店活动或部分门店活动或连锁整体门店活动). 3.会员积分兑奖. 4.顾客投诉安抚或老顾客感情维系.     

珍珠梅黄酮纳米粒诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌Hep G-2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法观察不同时间(24,48,72h)、不同浓度(50,100,200μmol/L)的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)的增殖抑制作用;利用光学、荧光和透射电子显微镜观察Hep G-2细胞凋亡,并应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 MTT法检测细胞增殖抑制结果显示:不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌细胞(Hep G-2,Hep3B,PLC/PRF/5)及人正常肝细胞(Chang Liver)均有不同程度的抑制作用,对人肝癌Hep G-2细胞抑制最明显;形态学检测结果显示:珠梅黄酮纳米粒干预Hep G-2细胞48 h后,细胞出现明显的凋亡;流式细胞术检测阴性对照组、5-Fu阳性对照组及不同浓度珍珠梅黄酮纳米粒干预组(50,100μmol/L)凋亡率分别为为4.9%,89.6%,50.0%,86.2%。结论珠梅黄酮纳米粒可以抑制人肝癌Hep G-2生长并诱导其凋亡。     

武警部队卫生应急救援队伍能力评价系统的研制

目的:为了实现武警部队卫生应急救援力量能力评价的数字化、信息化,设计一款武警部队卫生应急救援队伍能力评价系统.方法:借助现代信息技术,针对武警部队卫生应急救援队伍能力指标评价体系提出设计需求,使用Microsoft Visual Studi0 2010开发用户界面程序,以Access 2013作为后台数据库,以Visual C为开发语言进行软件系统开发.结果:该系统安装快捷、运行顺畅,基本实现了预期目标.结论:该系统为应急救援队伍的现场测评提供了可靠、便捷、实用、易操作的数字化工具,可以推广应用.     

微小RNA在免疫调节中的作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达.研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用.近年来,一系列的miRNA已被证实参与了免疫反应调控,如固有性免疫应答,T、B淋巴细胞的分化,病原体感染与免疫及炎症的免疫调控等.文中就miRNA在固有性与获得性免疫应答中的调控作用作一综述.     

微创入路经椎间孔椎间融合治疗单纯腰椎椎间孔狭窄症

示内固定位置良好,JOA平均改善率为31.1% .结论 使用微创人路经椎间孔腰椎间融合足治疗单纯椎间孔狭窄有效的方法,近期临床效果满意,且避免了手术对腰椎椎旁肌、后方韧带结构、硬膜和健侧神经根的副损伤.     

健脾祛湿汤治疗婴幼儿秋季腹泻80例临床疗效观察

目的:观察健脾祛湿汤治疗婴幼儿秋季腹泻的临床疗效。方法:选择80例秋季腹泻患儿口服中药健脾祛湿汤,同时与40例口服西药思密达患儿作对照。结果:总有效率治疗组97.5%,对照组75%,两组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。且治疗组在退热、止泻、止吐方面显著好于对照组(P<0.05)。结论:健脾祛湿汤具有抗炎、抗腹泻的功效,治疗婴幼儿秋季腹泻的疗效优于思密达。     

试析《诸病源候论》“导引法”之类型——兼述“导引法”之内涵及外延

《诸病源候论》是在传统导引法发展史上起到承上启下重要作用的—部中医典籍.该典籍的问世,是导引法成熟的标志.本文尝试对《诸病源候论》导引法的类型进行一些分析.先以姿势为准,将导引法分成“动势”、“静势”和“动、静结合势”三大类,而后在每一大类下以锻炼方式(单纯势训练、与呼吸配合训练、与意念配合训练等)为准,再分成若干小类.然后以此分析为依据,阐述导引法的内涵及外延.内涵:内外兼练,以内为重的中国传统的防病治病方法.外延:中华民族自古原创并沿用至今的多种常用的保健养生的方法,如肢体运动、呼吸吐纳、存想、自我祝由、入静、自我按摩等.     

脱细胞异体真皮基质在腭裂术后复裂穿孔修复术中的应用

目的探讨腭裂术后复裂穿孔应用脱细胞异体真皮基质口腔粘膜补片修复口腔粘膜缺损的临床效果。方法采用脱细胞异体真皮修复24例浅表的口腔粘膜缺损,缺损部位为硬腭部、软腭区及悬雍垂部,缺损面积2．00—16．00cm^2,将脱细胞真皮基质基底膜面向外,用缝线固定、碘纱反包扎,覆盖于粘膜缺损区。术后随访3～6个月。结果完全成活23例,大部成活1例,无失败病例。术后2周观察补片均无排斥反应,基底面点状红润区,3个月后基本稳定,无瘢痕挛缩,均无溃烂发生。结论脱细胞异体真皮可以作为腭裂术后复裂穿孔修复术的腭部粘膜替代,且可取得满意的腭部粘膜修复效果。