用转瓶结合微载体大量生产高活性的鼠干扰素

为了满足实验室大量生产干扰素(IFN)的要求,一般都采用转瓶系统,或在转瓶中增加几个同心圆和塑料片等方法。1978年Levine等和1979年Giard等先后较详细地介绍了用MIT微载体进行细胞培养,并用以生产β干扰素的方法。他们认为,这是生产高滴度、低成本人干扰素最有希望的系统。但该系统也有一定缺点,如结果不如转瓶稳定;操作比较麻烦;器材需要硅化,而且需要有一定的悬浮培养装置等。考虑到     

发色底物法定量测定重组u-PA产品的总活性和单链比例

目的建立一种发色底物酶水解方法定量分析重组尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)中的总活性及其单链酶原比例.方法用嗜热菌蛋白酶激活u-PA转化成具有催化活性的双链尿激酶,再用尿激酶的发色底物S-2444测定u-PA的总活性.在非激活条件下,u-PA产品中的单链酶原不会催化水解S-2444底物,因而可以测定其单链酶原比例.结果优化了嗜热菌蛋白酶激活u-PA的反应条件和尿激酶催化水解S-2444的反应条件.用这种方法测定了用CHO细胞表达的基因重组u-PA产品,单链比例大于98%,比活性约为11×104 U/mg.结论用发色底物法测定重组人u-PA产品中的总活性和单链比例具有很好的重复性和准确性.     

动物细胞微载体灌流培养技术的研究和应用

随着基因工程的发展,人们逐渐认识到有许多基因产物不能在原核细胞内表达,它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰,以及正确的切割,折叠后,才能形成与自然分子一样的功能和抗原性。这就使动物细胞一跃成为一种重要的宿主细胞,用以生产各种各样的重要的生物制品,包括有疫苗(如乙肝疫苗、狂犬病疫苗、脊髓灰质炎疫苗和乙     

用国产SH－2型微载体和低血清培基灌流培养CHO工程细胞

采用国产ＳＨ—２型聚苯乙烯微载体和新研制的低血清培基添加剂ＢＩＧＢＥＦ—２，在改进了的灌流控制系统的控制下灌流培养产尿激酶原ＣＨＯ工程细胞ＣＬ—１１Ｇ，所得细胞密度超过１×１０￣７细胞／ｍｌ，尿激酶原平均活性为４００７ＩＵ／ｍｌ，最高达６６１４ＩＵ／ｍｌ，均高于以前采用５％血清的培基和Ｂｉｏｓｉｌｏｎ微载体培养时的水平，从而更有利于中试和未来的大规模工业化生产。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂单克隆抗体的制备、鉴定及其在抗原纯化中的应用研究

以从ＣＨＯ工程细胞培液上清初步纯化的尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过杂交瘤技术制备出１１株抗ｕＰＡ单克隆抗体，经特异性实验表明，这些抗体特异性地识别高分子量ｕＰＡ（５．４×１０￣４ｕ），与低分子量ｕＰＡ（３．３×１０￣４ｕ）有不同程度结合，但都不识别１．８×１０￣４ｕ的ｕＰＡ片段。它们与牛血清白蛋白、ＣＨＯ细胞上清液及组织型纤溶酶原激活剂都无交叉反应。１１株抗体分别针对５个不同的抗原决定簇。以单克隆抗体偶联的ｓｃｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱直接从培液上清纯化ｕＰＡ，并经ｓｅｐｈａｃｒｖ１Ｓ－２００分子筛进一步纯化，纯度达９５％以上，回收率为８５％，纯化倍数为１５７倍左右。     

Namalva细胞干扰素生产流程的初步探索

用Namalva细胞生产的IFN是否允许用于临床,这是自1975年Strander等发现该株细胞以来一直存在着争议的问题.但是十多年来,经过许多科学家的努力,特别是Finter等人出色的工作,认识已经统一,认为只要经过纯化是可以保证安全的.目前用它生产的wellferon已被许多国家批准销售并用于临床.1986年日本从英国引进该技术,生产的IFN命名为sumiferon,也已被厚生省获准用于癌症及肝炎等病人的治疗.鉴于该情况,为了更好地满足我国对IFN的需求,我们开展了Namalva细胞IFN的研究.通过对生产流程的初步探索,发现用该细胞生产IFN确有其突出的优点:简便、高效,容易扩大进行工业化生产.     

聚乙二醇修饰对尿激酶原性质的影响

为了延长尿激酶原的半衰期，采用聚乙二醇５０００（ＰＥＧ５０００）对该酶进行了修饰，结果表明，尿激酶原经ＰＥＧ修饰后，在兔体内的半衰期延长了９￣１３倍，同时酶活性也有损失，溶酰胺活性保持６２％，溶纤活性保持３．８％￣１０％。     

用微量细胞病变抑制法观察三种天然人干扰素的协同抗病毒作用

用微量细胞病变抑制法观察天然α，β，γ干扰素（ｎｈｕＩＦＮ－α，β，γ）在体外诱导ＨＥｐ－２细胞的抗病毒协同作用。ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞表现为抗病毒协同增强效应；ｎＨｕＩＦＮ－α和ｎＨｕＩＦＮ－β共同作用于ＨＥｐ－２细胞只表现为抗病毒协同相加效应。实验结果表明：ｎＨｕＩＦＮ－γ和ｎＨｕＩＦＮ－α或ｎＨｕＩＦＮ－β的抗病毒协同增强作用，与不同干扰素（ＩＦＮ）处理ＨＥｐ－２的顺序及ＩＦＮ的浓度比例有关；ｎＨｕＩＦＮ－γ与ｎＨｕＩＦＮ－α的抗病毒协同增强作用是细胞接受ＩＦＮ作用后早期即发生的现象。     

胚胎发育早期转基因的PCR检测研究

转基因在受精卵中的整合时间对于转基因动物的建立十分重要。采用ＷＡＰ基因调控序列指导的人Ｇ－ＣＳＦ基因为构件，对小鼠受精卵进行显微注射。对培养至１细胞期、２细胞期和８细胞期的胚胎进行ＰＣＲ检测。结果表明，三个时期转基因的检出率分别为１００％、７７．７７％和４４．４４％。说明随着培养时间的增加，转基因逐渐丢失。