HSF-1在HMGB1诱导的炎症反应中的作用

目的:探讨热休克转录因子1(HSF-1)在高迁移率族蛋白1(HMGB1)所诱导的炎症反应中的作用。方法:不同浓度HMGB1作用于RAW264.7细胞不同时间后,用ELISA法检测细胞上清液TNF-α水平;分别用免疫荧光法与Western blot法检测HMGB1作用后,RAW264.7细胞NF-κB核转移情况与HSF-1表达。观察干扰HSF-1表达后,HMGB1诱导RAW264.7细胞TNF-α表达的变化。结果:HMGB1作用后,RAW264.7细胞分别在4、12 h出现两次TNF-α分泌高峰,且TNF-α的释放量随HMGB1浓度的增加而增加。HMGB1作用后,RAW264.7细胞的NF-κB核转移明显增强,HSF-1表达明显增加(均P0.05)。干扰HSF-1表达后,HMGB1诱导RAW264.7细胞产生的TNF-α量较未干扰的RAW264.7细胞明显增加(P0.05)。结论:HMGB1能诱导RAW264.7细胞的炎症反应与HSF-1的表达,但HSF-1可能对HMGB1诱导的炎症反应有负反馈性抑制作用。     

Let-7b和miR-199a对B16F10细胞增殖生长的影响

目的研究let-7b和miR．199a对黑色素瘤增殖生长的影响。方法设计靶向let-7b和miR．199a基因的过表达质粒和inhibitor干扰片段,将同一株系B16FIO细胞分为七组：空白组、let-7b质粒组、miR-199a质粒组、空质粒组、let-7binhibitor组、miR-199ainhibitor组、inhibitor对照组,运用基因转染技术将对应组别的外源基因导人B16F10细胞中,从RNA水平、蛋白水平和细胞水平三方面检测let-7b和miR-199a基因对B16F10细胞的影响。结果let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16FIO细胞中对应基因的表达为3．8776±0．1372和2．8660±O．2821,明显高于空白组（P〈0．05）;let-7binhibitor组和miR-199ainhibitor组B16F10细胞中对应基因的表达为0．2057±0．0263和0．2656±0．0253,明显低于空白组（P〈0．05）;B16F10细胞中cyclinDl的表达let-7b质粒组（2．023±0．315）和let-7binhibitor组（1．857±0．377）明显高于空白组（0．997±0．041）（P〈0．05）,而B16F10细胞中Met的表达中miR．199a质粒组（5．19±0．309）和miR-199ainhibitor组（4．87±0．044）明显高于空白组（2．2±0．198）（P〈0．05）;let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16FIO细胞的生长趋势较空白组缓慢,尤其到转染后第3天,此生长趋势下降至最低值（P〈0．05）,此后又缓慢趋近正常;此外,let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16FlO细胞凋亡率分别为（11．8-4-1．19）％和（11．3±1．59）％,明显高于空白组（5．77±1．74）％（P〈0．05）。结论let-7b和miR-199a可负调控黑色素瘤细胞的增殖生长。     

留学生烧伤湿性医疗技术见习带教体会

烧伤湿性医疗技术(MEBT/MEBO)现已形成了较为系统的皮肤原位再生学术体系,由于留学生语言交流因素,对这一技术了解不多,本文通过作者教学的亲身体会,对留学生烧伤湿性医疗技术的见习教学提出一些新的思路.以期达到把基本理论运用于临床实践,培养正确的临床思维方法和独立解决问题的能力,同时向外国留学生介绍我国烧伤湿性医疗技术之目的.     

液氮储皮的临床应用

我院1982年建立液氮储皮库以来,至1990年期间,临床采用液氮储存的异体皮及猪皮抢救烧伤面积大于80％,三度烧伤面积大于50％的病人共75例,治愈25例,其中1982～1984年治愈率为19.04％;1985～1987年为32.43％;1988～1990年为52.94％,取得逐年明显提高治愈水平的效果。本文介绍了采用的尸体皮及猪皮的制备和储存方法,临床三种烧伤创面,共110例的临床资料;应用经验和效果;以及典型病例等。     

瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系

目的：探讨瘢痕组织HO-1的表达与血管生成的关系，为研究瘢痕形成机制提供理论依据。方法：标本均采集自无严重并发症的志愿者，共24例，分为增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕3组，每组8例，第4组正常皮肤组织由上述24例患者正常皮肤标本中随机抽取8例。所取标本采用免疫组织化学的方法进行HO-1的表达和CD34血管计数以及成纤维细胞计数，比较不同类型瘢痕及正常皮肤HO-1量化指标、成纤维细胞数量与血管密度之间的关系。结果：CD34染色结果示增生性瘢痕、瘢痕疙瘩血管较丰富，而扁平瘢痕和正常皮肤较少，相比差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在各组瘢痕及正常皮肤表皮中均有不同程度表达，在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩中表达较强，与其他组比较差异有统计学意义（P<0.01）。HO-1在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤真皮中表达依次减弱；血管计数与表皮、真皮HO-1（均P<0.01）表达均存在正相关(r=0.761,P<0.01)。成纤维细胞数在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常皮肤中依次减少；血管计数与成纤维细胞计数间存在正相关（r=0.731,P<0.01）。结论：HO-1可能是促进瘢痕血管生成的重要因素；烧伤瘢痕内HO-1及血管生成变化的原因可能在局部而不在全身；过量血管生成可能是病理性瘢痕的一种表象。     

瘢痕中缺氧诱导因子-1α的表达及其与凋亡的关系

目的 探讨瘢痕内缺氧环境减轻的机制。方法 采用免疫组化法检测烧伤后肉芽、不同时期瘢痕和正常皮肤中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）、p53的表达，采用权重方法分别对各组瘢痕的HIF-1α、p53表达结果进行量化，分析各自规律及相互间关系。结果 随着瘢痕的成熟，HIF-1α表达强度逐渐减弱，p53表达强度在1年内逐渐增强，相互间具有负相关性（P〈0．01）。结论 p53在瘢痕成熟过程中起重要作用，HIF-1α可能通过协同p53诱导细胞凋亡，减少耗氧来减轻缺氧环境。     

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对深Ⅱ度烧伤创面的治疗作用

目的 了解重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)凝胶剂治疗深Ⅱ度烧伤创面的有效性和安全性. 方法采用多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照的研究方法,将深Ⅱ度烧伤创面作为目标创面,把321例烧伤患者(实际完成302例)分为用药组200例,创面涂rhGM-CSF凝胶;对照组102例,创面涂安慰剂.观察用药后两组患者的全身情况和不良反应,以及不同时相点创面愈合时间、愈合率、总有效率. 结果用药后两组患者生命体征,血、尿常规及肝、肾功能,创面分泌物、创缘反应比较,差异均无统计学意义(P>0.05),无不良反应.用药组创面愈合时间的中位数为17 d,低于对照组(20 d,P<0.01).用药第8、14、20、28天,用药组平均创面愈合率分别为24.5%、70.5%、95.3%、99.6%,均高于对照组(15.1%、51.4%、84.6%、97.1%,P<0.01).用药8、14、20 d用药组的总有效率显著高于对照组(P<0.01). 结论 rhGM-CSF凝胶剂能促进深Ⅱ度烧伤创面愈合,并且有一定的安全性.     

应用RT-PCR构建人表皮生长因子基因真核表达质粒

目的体外克隆及构建带信号肽的人表皮生长因子(hEGF)基因真核表达质粒。方法设计人表皮生长因子(hEGF)基因和信号肽基因引物,采用RT-PCR技术从胎肾组织总RNA中扩增出hEGF基因和信号肽基因序列,克隆入pGEM-T载体,酶切鉴定和序列分析后经T4连接酶连接并克隆入表达质粒pcDNA3.1( ),再次酶切鉴定和序列分析。结果RT-PCR扩增产物电泳获得约90 bp和180 bp条带,与hEGF及其信号肽cDNA大小符合;克隆入T载体后经序列分析与hEGF及信号肽基因一致,克隆入pcDNA3.1( )质粒后双酶切获得约230 bp和5.4 kb条带,再次测序与hEGF cDNA一致。结论成功构建带信号肽的hEGF基因的真核表达质粒。