电磁场促进骨髓间充质干细胞体外诱导分化时细胞增殖

目的 观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对5-氮胞苷(5-aza)诱导大鼠骨髓问充质干细胞(mesenehymal stem cells,MSCs)向心肌样细胞分化时细胞增殖的影响.方法 50 Hz脉冲低频电磁场刺激5-aza诱导后7 d后的MSCs,根据不同的感应强度分为A、B、C组,每组根据作用时间的不同分为4个亚组;设未暴露PEMFs的细胞为对照组.用MTT法测定细胞增殖变化,用流式细胞技术检测细胞周期.结果 0.5 mT和1 mT的感应强度下20～30 min细胞比对照组有显著性增殖,5 mT作用30～60 min以及1 mT作用60 min与对照组相比较呈显著性抑制.流式检测细胞周期显示0.5 mT和1 mT在20～30 min内可以引起细胞S G2%增高,各感应强度下作用60 min以及5 mT感应强度下作用20 min以上均引起S G2%的下降.结论 50 Hz脉冲低频电磁场0.5 mT和1 mT的感应强度下,作用20～30 min可通过引起诱导后的MSCs周期中S G2%增高而促进它的增殖.     

缺氧对ECV-304细胞CASK表达及细胞内分布的影响

目的 了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase, CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化.方法 将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2) 条件培养1、3、6、12 h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况.结果 ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3 h开始增加,6 h达高峰,12 h下降但仍高于正常.免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象.结论 缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白.     

免疫细胞化学技术在转录因子激活研究中的应用

免疫细胞化学 (Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ,ＩＣＣ) ,或称免疫组织化学 ,其主要原理是用标记的抗体 (或抗原 )对细胞或组织内的相应抗原 (或抗体 )进行定性、定位或定量检测 ,经过组织化学的呈色反应之后 ,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。该技术在信号转导研究中具有一些其它技术所不可替代的优势现主要介绍该技术在转录因子 (Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ ,ＴＦｓ)激活研究中的应用及其特点。1　材料与方法1 1　细胞株　　人脐静脉血管内皮细胞株ＥＣＶ 3 0 4购自ＡＴＣＣ公司。加入含 10 %胎牛血清的…     

内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因消减文库的构建

目的 建立人脐静脉内皮细胞内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法：提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs，反转录合成cDNA，与对照组间进行抑制消减杂交交富集差异表达基因，经T载体转化感受态大肠杆菌。结果：建立了内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因消减cDNA文库。结论：经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因，为今后进一步筛选内毒素相关基因打下基础。     

人端粒酶蛋白催化亚单位基因转染对人胚胎成纤维细胞增殖的影响

目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEF)增殖的影响。方法体外培养hEF。应用脂质体转染法将pIRES2增强性绿色荧光蛋白(EGFP)hTERT正义重组质粒及pIRES2EGFP空载质粒分别导入hEF中,相应称为hEFhTERT和hEFEGFP。采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测正常hEF、hEFhTERT、hEFEGFP中hTERT蛋白、分化抑制因子Id1、增殖细胞核抗原(PCNA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平。用噻唑蓝(MTT)法测定3种细胞的生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期并计算增殖指数(PI)。结果(1)Westernblot与hEFEGFP和hEF比较,hEFhTERT中的hTERT蛋白、Id1、PCNA和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平均较高。(2)MTT法细胞接种后第4—6天,hEFhTERT的吸光度(A)值明显高于hEF和hEFEGFP(P<005),接种后1—6dhEF与hEFEGFP的A值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)细胞周期与hEFEGFP和hEF比较,hEFhTERTG0/G1期细胞较少,S、G2/M期细胞较多;其PI为5747%,高于hEFEGFP(13.13%)和hEF(17.38%)。结论外源性hTERT基因转染可使hEF增殖能力增强。     

肝大、贫血、腹水、发热

病历摘要例1 男,5个月。因颜面苍白贫血入院。患儿出生后即呈贫血貌,近日加重,并有食欲减退,精神不振,多睡,有时则烦躁不安,夜间哭闹不止。患儿为第4胎足月顺产,兄姐健康。检查:体温37. 2℃,脉搏170次,呼吸48次。慢性贫血病容,巩膜皮肤无黄染,浅表淋巴结不肿大。肺、心叩听未见异常。腹     

大鼠吸入性损伤血清对肺微血管内皮细胞的损伤作用

肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）体外培养法的建立对于研究吸入性损伤具有重要意义。以大鼠肺为材料，采用弹力蛋白酶消化法以获取ＰＭＶＥＣ，培养５ｄ～６ｄ后即可融合成片，经Ⅷ因子相关抗原染色鉴定，纯度可达９０％以上。以此为模型，加入大鼠烟雾吸入伤血清，可使ＰＭＶＥＣ分泌功能明显变化，血清ＮＯ及ＬＤＨ增高，同时细胞内ｃＡＭＰ含量降低，［Ｃａ２＋］ｉ水平明显升高，即信息传递系统受损。提示ＰＭＶＥＣ是吸入性损伤中肺损伤的重要靶细胞     

蜕皮甾酮对TNF所致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用的初步观察

目的 观察肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对体外培养的脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌功能及能量代谢的影响,及应用植物药物成分蜕皮甾酮（ＥＤＳ）进行防治的效果。方法 ①ＭＴＴ法对培养内皮细胞琥碧酸脱氢酶活必的影响。②内皮细胞培养上清液ＥＴ、ＮＯ、ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＳＯＤ测定。③采用反相高效液相色谱分析法测定内皮细胞ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ及能荷。结果 ＴＮＦ与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,随着ＴＮＦ     

类脂A和内毒素对人肾小球内皮细胞线粒体脱氢酶活性的影响

目的：为证明构成内毒素（ＬＰＳ）的主要核心部分类脂Ａ在ＬＰＳ直接损伤内皮细胞中所起的作用。方法：分离培养人肾小球内皮细胞（ＨＧＶＥＣ）,把细胞分为正常对照组,ＬＰＳ时间梯度组,ＬＰＳ浓度梯度组和ＬｉｐｉｄＡ浓度梯度组。     

内毒素和内皮细胞的结合能力及对a-Catenin的影响

寻找内毒素和培养的内皮细胞直接结合的证据及对胞内连接蛋白α－Ｃａｔｅｎｉｎ的影响,观察内毒素对内皮细胞的损伤特性。方法：（１）荧光标记的内毒素（２μｍ／ｍｌ）和培养的内皮细胞在无血清下共同孵育后用荧光分光光度计进行检测;（２）内毒素（２μｇ／ｍｌ）刺激无血清培养的内皮细胞后用ＥＬＩＳＡ测定内皮细胞胞内连接蛋白α－Ｃａｔｅｎｉｎ表达的变化。结果：内皮细胞和内毒素孵育１０、２０、４０和６０分后荧光强度分别为对照组的１．８７、３．９７、３．４１（Ｐ＜０．０１）和２．０２（Ｐ＜０．０５）倍;胞内连接蛋白的表达各时相点和对照组比均明显降低（ Ｐ＜０． ０５和＜０． ０１）。结论：内毒素在无血清情况下可以和内皮细胞结合,同时可以影响胞内连接蛋白α－Ｃａｔｅｎｉｎ的表达状态,并不依赖是否有血清的存在。