肠道病毒71型疫苗研究进展

肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是引起儿童手足口病的主要病原体之一,其感染可在少数患者中引起严重的神经系统综合征甚至导致死亡。自20世纪90年代后期在东南亚地区暴发以来,EV71感染已成为严重威胁全球,尤其是亚太地区儿童健康的公共卫生问题之一。尽管目前临床上尚无针对EV71的安全有效的疫苗,但多个灭活疫苗已进入或完成临床研究,减毒活疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗等新型疫苗也显示出良好的发展前景,该文综述了EV71疫苗的最新研究进展。     

登革病毒衣壳蛋白研究进展

登革病毒衣壳蛋白是病毒的结构蛋白之一，可与病毒基因组RNA结合构成病毒的核衣壳。同时，衣壳蛋白可进入细胞核，与多种蛋白质结合，并有可能参与对宿主细胞的调控，在病毒的感染过程中具有重要的作用。本文综述了近年来登革病毒衣壳蛋白的结构与功能等方面的研究进展情况。     

融合蛋白D2C-SN对登革2型病毒增殖的影响

目的：观察登革2型病毒衣壳蛋白（D2C）与葡萄球菌核酸酶（SN）融合蛋白在哺乳动物细胞中对登革2型病毒增殖的影响。方法：通过基因重组构建可在哺乳动物细胞中表达融合蛋白D2C-SN的重组质粒pc／D2C-SN，同步构建pc／D2C-SN用作对照。病毒感染BHK21细胞后，通过阳离子转染试剂将重组质粒导入感染细胞，在此基础上评价融合蛋白D2C-SN抗登革病毒感染的治疗效果。结果：融合蛋白D2C-SN能够在哺乳动物细胞中表达，对宿主细胞没有明显的毒性；与正常BHK21细胞相比较，可导致病毒感染性滴度降到原来的1／60—1／12。结论：融合蛋白D2C-SN在细胞水平能够有效抑制登革病毒的增殖。有可能成为潜在的抗登革病毒感染的治疗性药物。     

携带Kpn1酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性克隆的构建与鉴定

目的 构建携带特定酶切位点的日本脑炎病毒全长感染性克隆,并对拯救病毒的生物学特征进行鉴定.方法 利用分子克隆和反向遗传学技术,在日本脑炎病毒全长感染性克隆pJE70质粒的基础上引入Kpn1单酶切位点,获得pJE70_Kpn1重组质粒.将质粒线性化后进行体外转录,将转录体RNA转染BHK-21细胞,拯救获得恢复病毒E70...     

登革热的实验室诊断

登革病毒是一种重要的虫媒病毒,主要通过白纹伊蚊和埃及伊蚊叮咬传播,其基因组为单股正链RNA.含单一的开放读码框依次编码3种结构蛋白(C、prM和E)和7种非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5).自然界中存在4种血清型登革病毒,每种血清型感染均可导致登革热、登革出血热以及登革休克综合征,目前广泛流行于全球热带及亚热带地区,对人类健康和公共卫生安全构成了重要威胁[1].     

利用DNA免疫建立分泌登革2型病毒E蛋白单抗的杂交瘤细胞系

目的:利用DNA免疫建立分泌登革2型病毒E蛋白特异单抗的杂交瘤细胞系,为研究E蛋白的结构和功能及其抗原表位提供新手段.方法:以构建的病毒全长prM-E基因的真核重组质粒DNA作为免疫原,免疫BALB/c小鼠后将其脾细胞和SP2/0瘤细胞融合,通过IFA、间接ELISA和空斑减少中和试验对杂交瘤细胞系进行筛选和鉴定.结果:获得了4株分泌登革2型病毒E蛋白单抗的杂交瘤细胞系(2B4,6B4,4C10和2D5),它们结合的抗原表位均位于E蛋白Ⅲ区,其中4C10对登革2型病毒具有中和活性.这些单抗与登革1、3和4型病毒有强的交叉反应,但与黄病毒其他成员反应较弱.结论:DNA免疫法可用于分泌登革2型病毒E蛋白特异单抗的杂交瘤细胞系的建立,该结果有利于登革病毒E蛋白特异抗原表位的研究及新的登革病毒诊断试剂的研制.     

含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段.方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP).将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PCR和R.luc检测技术对复制子进行鉴定.结果:所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子,均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白.DEN-R.luc2A-RP可持续表达外源R.luc报告基因21 d,在转染后24~96 h R.luc荧光信号呈线性增强.在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化.结论:获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子,为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础.     

登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用.方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6).将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测.结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调.结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用.     

衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

目的 制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒.方法 在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒.结果 序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变.结论 成功制备衣壳蛋白缺失突变病毒,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础.     

虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白.其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用.最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应.NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注.本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展.