高压氧对脑源性神经干细胞分化的影响

目的:探讨高压氧对缺血缺氧脑源性神经干细胞模型向神经元细胞分化的影响。方法:实验于2006-01/05在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成。YLC0.5/1A型动物实验高压氧舱(湖北武汉)。①实验选取清洁级SD新生鼠10只,无菌条件下分离脑组织,克隆传代培养脑源性神经干细胞。将第3代细胞制成单细胞悬液,分装在不同的25mL培养瓶中,分为正常对照组、模型对照组、高浓度氧组、高气压组、高压氧组,1瓶/组。②除正常对照组外,其余各组均复制神经干细胞缺血缺氧模型。当培养的神经干细胞达80%融合时换为新鲜的完全培养基,次日将培养基弃去,换用新鲜的无血清DMEM/F12培养基,并将细胞置于体积分数为0.93的N2、0.05的CO2、0.02的O2培养箱中37℃培养,3h后用于相关指标检测。③从每组取1mL细胞悬液移入96孔酶标板,在酶联免疫检测仪490nm波长处测定各孔吸光度值,检测神经干细胞活力。④将各组神经干细胞悬液接种于盖玻片上涂有多聚赖氨酸的培养皿中,Nestin免疫荧光染色后加入去除生长因子的血清DMEM/F12培养基,各组在不同条件下继续培养:高气压组培养皿置于高压氧动物舱内,采用压缩空气给予0.2MPa压力1h(加、减压时间各15min,稳压30min),1次/d,连续7d;高压氧组在高气压组基础上,稳压时舱内氧浓度保持在80%以上;高浓度氧组不加压,只保持舱内氧浓度在80%以上;正常对照组和模型对照组在加入去除生长因子的血清DMEM/F12(含体积分数为0.2的胎牛血清)中培养7d进行诱导分化。各组神经干细胞进行特异免疫荧光染色,观察细胞分化情况。⑤采用显微镜在200倍视野下进行细胞计数,每组观察10张盖玻片,每张盖玻片观察6个不重复视野,计算各组神经干细胞分化为神经元及胶质细胞的百分率。结果:①造模后神经干细胞活力的观察:与正常对照组比较,模型对照组、高浓度氧组、高气压组、高压氧组神经干细胞复制缺血缺氧模型后吸光度值均明显下降(t=-4.357,P<0.05),表明神经干细胞经缺血缺氧后数目减少,生长活力下降。②脑源性神经干细胞诱导分化情况:诱导分化3d后,各组微管相关蛋白2免疫细胞化学染色可见神经元样细胞,胶质原纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色可见星形胶质样细胞,半乳糖脑苷脂免疫细胞化学染色可见少突胶质样细胞。③各组神经干细胞分化结果比较:高压氧组神经元及胶质细胞分化率较正常对照组基本相似(t=0.324,P>0.05),但神经元分化率明显高于模型对照组、高浓度氧组、高气压组(t=2.667～5.424,P<0.05),胶质细胞分化率低于此3组(t=-5.424～-2.667,P<0.05)。结论:高压氧处理能够上调脑源性神经干细胞向神经元分化的比例。     

天麻钩藤饮对偏头痛肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质的影响

目的:利用双向凝胶电泳和质谱技术,分析天麻钩藤饮治疗前后偏头痛肝阳上亢证大鼠下丘脑的蛋白质表达的差异。方法:实验于2005-03/2006-04在中南大学湘雅医院中西医结合研究所、湘雅医学院肿瘤免疫与蛋白质组学实验室和卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室进行。①取SD大鼠20只,用附子汤连续灌胃21d复制肝阳上亢证动物模型,复制成功后给大鼠皮下注射硝酸甘油注射剂10mg/kg制备大鼠实验性偏头痛模型。②造模成功后将大鼠随机分为模型组和治疗组2组,每组10只。模型组于造模第22天处死;治疗组自第22天起灌服天麻钩藤饮(由天麻、钩藤、石决明、黄芩、泽兰、白芥子组成,中南大学湘雅医院中药房提供)10mL/(kg·d),连续14d,然后处死,分离出下丘脑。③通过对下丘脑组织蛋白质的提取,经双向电泳,Pdquest软件分析,进行蛋白质点原位酶解及质谱分析。结果:20只大鼠进入结果分析。①天麻钩藤饮治疗前后大鼠的总蛋白质的分布模式非常相似,以pI4～8,Mr(20～75)×103范围的蛋白质斑点分布最多。经PDQuest7.0软件分析后得出,在相同条件下识别的蛋白质斑点数分别为模型组(443±25)个,治疗组(530±27)个。②用肉眼可区分9个表达上调和下调的蛋白质斑点,将这9个蛋白质斑点进行酶解和质谱分析,所得结果在网上搜寻,其中有5个点的蛋白质与之匹配。结论:经天麻钩藤饮治疗后偏头痛肝阳上亢证大鼠下丘脑蛋白质的表达上具有差异,而所鉴定的这5个蛋白质可能与天麻钩藤饮的治疗机制有关。     

柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为及血浆促肾上腺皮质激素释放激素和促肾上腺皮质激素的影响

目的：探讨柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及血浆促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone,CRH）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）浓度的影响。 方法：40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组及柴胡疏肝散组。采用慢性轻度不可预见性应激加孤养复制大鼠抑郁模型（4周）。所有大鼠在造模第15天开始灌胃,分别灌服等体积生理盐水（空白对照组、模型组）或氟西汀（1.8 mg/kg）及柴胡疏肝散（5.9 g/kg）药液,连续2周。选用敞箱实验得分和液体消耗量等指标评价各组大鼠行为学改变,采用放射免疫法检测各组血浆CRH和ACTH浓度。 结果：与空白对照组比,模型组大鼠体质量增加缓慢,敞箱实验中的水平运动、垂直运动得分、清洁动作次数显著减少,中央格停留时间显著延长,糖水消耗明显下降,纯水消耗显著增多,血浆CRH和ACTH浓度增高, 差异有统计学意义（P＜0.05）。柴胡疏肝散组大鼠抑郁样行为显著改善,血浆CRH和ACTH浓度较模型组显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。 结论：慢性轻度不可预见性应激可使大鼠行为及神经内分泌发生异常改变,引起抑郁;柴胡疏肝散可调节慢性应激引起的HPA轴功能亢进,具有抗抑郁作用。     

柴胡疏肝散及其拆方对慢性应激抑郁大鼠模型海马组织ERK1/2 mRNA表达的影响

目的:探讨柴胡疏肝散及其拆方的抗抑郁作用及机制.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、全方干预组、拆方干预I组和II组、氟西汀对照组.采用慢性轻度不可预见性应激配合孤养复制抑郁模型;运用敞箱试验和蔗糖水消耗实验观察大鼠行为改变;荧光实时定量PCR(FQ-PCR)检测各组大鼠海马组织细胞外调节蛋白激酶(extr...     

尿毒症时微量元素代谢的初步研究

我院自1982年9月以来用原子吸收分光光度法,对27例各种原因引起的尿毒症进行了血清和尿掖中微量元素(镁、锌、铜、铁)含量的测定,藉以研究尿毒症时微量元素代谢与肾功能损害程度和透析时间长短的关系。通过微量元素含量的测定来预示肾功能损害程度,以便寻求有效微量元素替代剂作为尿毒症患者的辅助治疗。     

单针血透的临床应用与评价

作者将单针血液透析与传统应用的双针血透作自身对照研究,指出单针血透可减少穿刺次数,减少病员痛苦,延长内瘘血管通路的使用期,并与双针透析有相近似的透析效果及良好的脱水性能,而无心血管并发症及血细胞损害,值得在临床上应用与推广。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌40例分析

目的：观察紫杉醇联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和毒性反应。方法：40例应用紫杉醇65-70 mg/m^2静脉滴注,第1、8天;顺铂20 mg/m^2静脉滴注,第2、3、9、10天。21 d为1个周期,2个周期后评价疗效。结果：总有效率为55%。主要毒性为白细胞下降,其中Ⅲ-Ⅳ度50%。结论：紫杉醇联合顺铂治疗晚期NSCLC疗效较高,不良反应可耐受。     

高血压大鼠肝阳上亢证的下丘脑双向凝胶电泳分析

目的通过双向凝胶电泳建立高血压肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑分辨率高、重复性好的蛋白质表达图谱,并分析其差异蛋白质。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝阳上亢证大鼠与正常大鼠下丘脑的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果两种状态下的大鼠下丘脑图象平均匹配率达92%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点pI3-8,分子量M r14.4~75kD范围。高血压肝阳上亢大鼠下丘脑约有777±27个蛋白质点,正常大鼠下丘脑约有780±31个蛋白质点。与正常大鼠比较肝阳上亢大鼠有22个点表达上升2倍及以上,有25个点表达下降2倍及以上。结论在肝阳上亢状态下有22个蛋白质表达明显增加,还有25个蛋白质表达明显减少。这些蛋白质的变化可能与高血压肝阳上亢的形成有关。     

电针对脑缺血再灌注大鼠线粒体Ca2+值及Na+-K+-ATP酶活性的影响

目的:探讨电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑线粒体Ca2 值及Na -K -ATP酶活性的影响。方法:将动物随机分为正常组、模型组、电针组,采用改良的Longa的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型。电针组于造模后针刺水沟、大椎、三阴交,捻转刺激30s后,接电针仪,持续20 min。结果:模型组Na -K -ATP酶活性较正常组显著下降,Ca2 值则较正常组明显升高;电针组Na -K -ATP酶活性与模型组比较有明显升高,Ca2 值较模型组显著降低。结论:电针可以提高缺血再灌注区域线粒体抗氧化损伤的能力,提高线粒体神经元细胞的能量代谢能力,从而发挥对缺血再灌注线粒体损伤的保护作用。     

阳明经穴位注射治疗腓总神经损伤的疗效观察

目的 观察穴位注射治疗腓总神经损伤的临床疗效,寻求治疗腓总神经损伤的有效治疗方法,提高患者的生活质量,减少致残率.方法 将85例患者随机分为两组,治疗组45例,采用穴位注射加电针治疗;对照组40例,采用单纯电针治疗,进行对照观察.结果 治疗组总有效率为95.6%,对照组为80.0%.两组疗效比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 穴位注射加电针治疗腓总神经损伤疗效优于单纯电针治疗.