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目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。 相似文献
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目的 分析肾透明细胞癌(CCRCC)缺氧诱导因子-1α(HIF-1α、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)及程序性细胞死亡因子5(PDCD5)的表达及与患者临床特征的相关性.方法 纳入2017年2月至2018年2月于本院接受诊治的61例CCRCC患者,根据预后生存情况分为:生存组44例,死亡组17例.收集肿瘤组织及肿瘤旁正... 相似文献
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目的 构建过表达人泛素交联酶UBE2D3基因的稳定转染食管癌EC109细胞株,并观察过表达后迁移增殖能力及对顺铂化疗敏感性的改变.方法 食管癌EC109细胞株分别转染pEGFP-C1和pEGFP-UBE2D3质粒后,分为阴性对照组(NC组)和过表达组(OE组),并用G418进行筛选构建稳定转染细胞株.通过实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blotting验证过表达效率,用划痕试验检测迁移能力,并用CCK-8法检测细胞增殖,半抑制浓度(IC50)法评价对顺铂的敏感性.结果 相对于亲本细胞,NC组UBE2D3 mRNA表达量为1.010±0.590,OE组为2.026±0.898;NC组UBE2D3蛋白表达量为0.923 ±0.237,OE组为1.520±0.487;NC组UBE2D3 mRNA及蛋白表达水平与空白对照组亲本细胞EC109相近(t=1.005,P>0.05;t=1.492,P>0.05),OE组较亲本细胞组表达高(t=6.682,P<0.05;t=9.150,P<0.05).在12 h NC组的迁移距离为(0.161±0.062) mm,OE组为(0.052±0.007) mm(=4.370,P<0.05);在24 h NC组的迁移距离为(0.309 ±0.071) mm,OE组为(0.074 ±0.012) mm(=3.644,P<0.05);在12 h和24 h时OE组相对于NC组的迁移率分别为0.236±0.051和0.241±0.037,OE组迁移能力明显较NC组降低;在第1天时OE组相对于NC组的增殖率为0.713±0.220(t=13.466,P<0.05),第2天为0.848±0.241(t =27.241,P<0.05),第3天为0.742 ±0.233(t=15.107,P<0.05).使用顺铂处理后,在第1天时OE组的IC50值相对于NC组为0.356±0.154(t =4.326,P<0.05),第2天为0.445±0.098(t =5.870,P<0.05),第3天为0.481±0.096(=5.009,P<0.05),OE组IC50值明显低于NC组;给予5μg/ml顺铂处理后,在第1、2、3天时OE和NC组相对于未使用顺铂处理时的增殖效率均减慢,其中OE组相对于NC组的增殖率分别为0.606±0.283(t=8.872,P<0.05)、0.759±0.089(t=16.771,P<0.05)和0.569±0.574(t =7.885,P<0.05),然而在第1、2、3天时OE组的存活率相对于NC组分别为0.831 ±0.323(t=24.226,P<0.05)、0.875±0.102(t=33.541,P<0.05)和0.853±0.359(t=28.187,P<0.05),顺铂对OE组抑制效率较NC组增加.结论 食管癌细胞EC109中过表达UBE2D3基因,能够抑制其迁移、增殖,增强其对顺铂的敏感性. 相似文献
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RP-HPLC法测定双丹滴丸中丹参素和原儿茶醛的含量 总被引:4,自引:0,他引:4
目的测定双丹滴丸中丹参素和原儿茶醛的含量。方法采用高效液相色谱法测定双丹滴丸中丹参素和原儿茶醛的含量。采用Hypersil ODS色谱柱,以甲醇-乙睛-0.5%醋酸溶液(8∶2∶90)为流动相,流速1 mL/min,检测波长280 nm。结果丹参素和原儿茶醛的平均回收率分别为100.2%和99.68%,RSD分别为1.1%和1.2%。结论该方法简便,灵敏,准确,可作为双丹滴丸的质量控制方法。 相似文献
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汽车内也会有"空气污染"吗?
答案是肯定的!很多人开新车的时候都会有这样的体验:车里往往会有一股难闻的异味.虽然很多人会在心里问一句"这到底是什么味道",但更多人很快被买到新车的激动与渴望所淹没,马上开车兜风去了.其实,这股难闻的味道就是车内环境污染.同室内污染一样,汽车这个"流动的家"的污染同样会给人们的身体带来难以预料的伤害.环境专家指出,新车内那股难闻的气味中主要的污染物质是甲醛和苯. 相似文献
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宫颈妊娠是指孕卵在宫颈管内(即宫颈组织学内口以下)着床和发育,是一种罕见的异位妊娠,发病率低于异位妊娠中的1%[1].由于助孕技术的应用,发病率有上升的趋势[2],宫颈解剖和结构不同于宫体,常发生难以控制的大出血及休克,甚至造成死亡.我科于2009年5月收治一例宫颈妊娠的患者,经过医护人员的精心治疗护理,治愈出院. 相似文献
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目的:观察蒙脱石散联合奥美拉唑治疗糜烂性胃炎的临床效果。方法:随机抽样法选取 2017 年 12 月—2018 年
12 月本院诊治的糜烂性胃炎患者 120 例,按摸球法分为两组各 60 例。对照组给予奥美拉唑治疗,观察组给予蒙脱石
散联合奥美拉唑治疗,比较两组治疗效果。结果:治疗后,观察组改良 Lanza 评分、单核细胞浸润和中性粒细胞浸润评
分、胃泌素水平均低于对照组(P < 0.05),总有效率高于对照组(P < 0.05),不良反应发生率低于对照组(P < 0.05);
随访 6 个月,观察组复发率低于对照组(P < 0.05)。结论:蒙脱石散联合奥美拉唑治疗糜烂性胃炎可改善胃镜下疗效、
胃黏膜组织病理学和胃肠道运动,提升治疗效果,且不良反应少,复发率低。 相似文献
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